气相色谱法测定茴香脑三硫酮中残留溶剂

2013-08-28陈璐

中国现代药物应用 2013年4期

陈璐

茴香脑三硫酮又名胆维他，是一种分泌性的利胆药，能明显增强肝脏谷胱甘肽(GSH)水平，显著增强谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)，谷胱甘肽还原酶(GSSG-R)和谷胱甘肽硫转移酶(GSH-S-Tx)活性，降低谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性，从而增强肝细胞活力，使胆汁分泌增多。本品合成工艺中主要使用了二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇，前两种溶剂均为第二类溶剂，乙醇为第三类溶剂［1，2］，均应进行限度控制。参照《中国药典》2005年版二部附录ⅧP残留溶剂测定法的指导原则，采用气相色谱法测定上述三种溶剂，方法简便、快捷，结果准确、可靠。

表1 合成工艺中使用的主要有机溶剂

1 仪器与试药

Agilent 6890N气相色谱仪及工作站。FID检测器。二甲基甲酰胺、乙醇均为色谱纯，二甲苯为分析纯试剂。样品由四川某制药公司提供。

2 色谱条件

色谱柱:PEG-20000毛细管柱(15 m×0.53 μm×1 μm)，进样口温度190℃，检测器温度230℃;柱程序升温:初始温度为 40℃，保持 min，以每分钟15℃的速度升温至150℃，保持3 min。进样口分流比5∶1，载气为氮气，速度3.0 ml/min。

分别取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇各适量，精密称定，用甲醇制成每1 ml中含乙醇、二甲苯和二甲基甲酰胺各200 μg的混合溶液，取1 μl照上述色谱条件试验，三个组分以及溶剂甲醇完全分离，出峰顺序依次为:乙醇、二甲苯和二甲基甲酰胺，三个待测组分的分离度依次为36.8，7.6和22.5;乙醇和溶剂甲醇完全分离，分离度为2.7。具体色谱图见图1。

图1 混合对照品溶液的GC色谱图

3 最低检出浓度

将二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇用甲醇逐级稀释，按上述色谱条件测定，最低检出浓度依次为 2.0ng、1.0ng和3.0ng。

4 线性关系

精密称取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇适量，用甲醇稀释制成每1 ml中分别含异丙醇和丙酮各约1000 μg的混合对照品储备溶液，再用取储备溶液加水稀释制成每1 ml中各约含 500 μg、200 μg、100 μg、10 μg、5 μg 的混合标准溶液，依法测定。以浓度为横坐标(μg/ml)X，峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，结果见表2。结果表明，这三种溶剂在测定范围内浓度和峰响应的线性关系良好。

表2 回归方程与线性范围实验结果(n=5)

5 加样回收实验

取已测定残留溶剂的茴香脑三硫酮0.2 g，精密称定，加已知浓度的混合对照品溶液4.0 ml，密塞，超声处理1 min，滤过，取续滤液依法测定，作回收率计算。结果二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇的回收率分别为98.0%、98.3%和102.2%，回收结果良好，能满足测定的需要。

6 精密度

取“4”项下浓度为100 μg/ml的对照品溶液，按上述色谱条件进行检测，连续进样6次，计算乙醇、二甲苯、二甲基甲酰胺峰面积的RSD分别为0.56%，0.89%，1.12%。

7 样品的测定

取样品约0.2 g，精密称定，加甲醇4.0 ml，密塞，超声处理1 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液;另分别取二甲基甲酰胺、二甲苯和乙醇各适量，精密称定，用甲醇制成每1 ml中含乙醇250 μg、二甲苯108 μg 和二甲基甲酰胺44 μg 的混合溶液，作为对照品溶液。照上述色谱条件试验，结果三批样品中二甲基甲酰胺和乙醇均未检出，二甲苯的残留量低于中国药典的限度规定，结果见表3。