AKT2在大肠腺瘤及其癌变组织中的表达及意义

艾迎春,王立平,李奕鑫

(1.佳木斯大学附属第一医院消化二科,黑龙江 佳木斯 154003;2.佳木斯大学临床医学院,黑龙江 佳木斯 154003;3.佳木斯市医保医院,黑龙江佳木斯 154004)

大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病机制尚不十分明确。AKT2是一种丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞信号传导通路和调控细胞生存和凋亡的平衡中发挥重要作用。但对于AKT2在大肠癌发生发展中的作用国内研究还很少。本试验用 SABC免疫组化技术检测 AKT2在大肠腺瘤及大肠腺瘤癌变组织中的表达并探讨其在大肠腺瘤恶性转化中的作用。

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取哈尔滨市第二医院 2005— 01～2011— 01确诊临床资料完整的 30例大肠癌(癌变的大肠腺瘤 )的存档蜡块 ,40例大肠腺瘤的存档蜡块,其中高危性腺瘤 14例,低位性腺瘤26例;管状腺瘤19例,混合性腺瘤 9例,绒毛状腺瘤12例。20例正常大肠黏膜蜡块。所有癌症病例术前均未进行放化疗。全部标本均经10%福尔马林固定,常规脱水后石蜡包埋,制成蜡块保存。载玻片为多聚赖氨酸防脱片,购自福州迈新公司。每个蜡块行连续切片,厚4μm,行 HE染色和免疫组化染色。

1.2 方法

1.2.1 试剂

兔抗人 AKT2多克隆抗体,编号:BA-1512,购自武汉博士德生物工程有限公司,4°C冰箱保存。广谱型 SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。试验步骤:采用 SABC免疫组化法,严格按照试剂盒说明进行。

1.2.2 阳性结果判断

AKT2蛋白阳性为黄色颗粒主要定位于胞浆。400倍下计数5个视野,阳性细胞率=阳性细胞数 /总细胞数×100%。结合阳性细胞百分比和及阳性细胞强弱计算免疫组化染色评分:①阳性细胞≤ 5为0分,阳性细胞6%～25%为1分 ,26%～50%为2分,＞ 50%为 3分。②0分为无色,阳性细胞淡黄色为 1分,黄色为2分,棕黄色为 3分。①、②两项乘积即为其免疫组化评分,得分 ＜2分为阴性,≥2分为阳性。

1.3 统计学处理

应用 SPS13.0统计学软件,采用卡方检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AKT2在正常大肠组织,大肠腺瘤,大肠腺瘤癌变组织中的表达

三者比较差异有统计学意义 (i2= 19.68,P＜0.01)。正常组和大肠腺瘤组比较差异有统计学意义 (i2= 5.09,P＜0.05)。大肠腺瘤组和癌变的大肠腺瘤组比较差异有统计学意义 (i2=6.01,P＜0.05),癌变的大肠腺瘤组和正常组的比较差异有统计学意义 (i2= 16.8,P＜0.01)。见表1。

2.2 AKT2与大肠腺瘤临床病理因素的关系

各组织学类型间比较,AKT2阳性表达率无显著性差异(P＞ 0.05)。高危性腺瘤和低危性腺瘤相比,AKT2阳性表达率升高,差异有统计学意义 (P ＜0.05);见表 2。

表1 AKT2在不同大肠组织中的表达

3 讨论

AK T2是生长因子受体酪氨酸激酶下游重要的调节靶点,是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号传导通路的中心环节。PI3K/AKT2通路被证实参与了多种肿瘤的发生发展。AKT2以直接或间接的方式影响下游多个因子,这些因子参与调控细胞存活和蛋白翻译。目前的研究发现 AKT2是肿瘤发生的重要信号分子,其异常表达在人类的恶性肿瘤的发生发展和演进过程中发挥重要作用。AKT2主要通过两条路径来调节细胞存活:(1)直接参与细胞凋亡。AKT可减弱细胞内在的凋亡途径,和外在的凋亡途径不同之处是内在途径与细胞内线粒体体系密切相关。(2)干扰部分基因转录。许多细胞凋亡刺激素要求启动细胞内一些基因表达来诱导细胞凋亡,AKT可干扰促进细胞凋亡的转录程序,或通过激活生存转录程序来抑制细胞凋亡。再者磷酸化的 AKT可抑制 KB抑制因子激酶(ILK),启动核因子 Kb(N FkB)转录功能,促进 bcl-xL及凋亡蛋白抑制子(IAP)的表达来维持细胞生存。

在多种肿瘤组织中都有 AKT2的过度表达或活化,最新研究结果证明,在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌等多种肿瘤中存在 AKT的持续激活[1～3]。AK T2在不同结直肠组织中的表达 Roy[4]等发现,57%的散发型结肠癌和结肠腺瘤AKT蛋白过量表达和活化 ,并以 AKT2亚型为主 ,提示其可能参与结肠上皮细胞早期增生癌变过程,是结直肠癌变过程的一个早期事件。翟云芝[5]等发现 AKT2在结直肠癌组织中高表达,阳性率达57.9%,而在正常大肠黏膜组织中阳性率仅为17.5%,两者对比有统计学差异,提示 AK T2可能在结直肠癌的发生发展中有重要作用。本实验显示 AKT2在正常大肠黏膜组的阳性表达率为10.0%、大肠腺瘤组的阳性表达率42.5%、癌变的腺瘤组织中的阳性表达率73.3%呈逐渐升高的趋势,且在大肠腺瘤与癌变腺瘤之间的阳性表达率差异具有显著性,说明在大肠腺瘤向腺癌方向的转化过程当中,AKT2起到了重要的作用,可能是大肠腺瘤发生癌变的早期信号。AKT2的表达率与大肠腺瘤的组织学类型无相关性,而随着大肠腺瘤的危险性增高阳性表达率逐渐升高。本试验表明在大肠腺瘤的恶性转化过程中 AKT2发挥了重要作用。检测 AKT2的表达可能做为临床监测大肠腺瘤的恶性转化的指标,并为大肠癌的早期诊断提供新的思路和理论依据。

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[2]Sun M,Wang G,Paciga JE,et al.AKT1YKBalpha kinase is frequently elevated in human cancers and its constitutive activation is required for oncogenic29 transformation in N IH3T3 cells[J].Am J Pathol,2001,159(2):431-437

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[4]Roy HK,Olusola BF,Clemens DL,et al.AKT proto-oncogene overexpression is an early event during sporadic colon carcinogenesis[J].Carcinogenesis,2002,23(1):201-205

[5]翟云芝,陈振东.Ezrin和 AKT2在大肠癌组织中的表达和临床意义 [J].临床肿瘤学杂志,2009,14(1):25-28