竹荪生长条件的初探

黄 艳 林国强 江玉姬*

（1.武夷学院 茶与食品学院，福建 武夷山 354300；2.福建农林大学 食品科学学院，福建 福州 350002）

竹荪(Dictyophora indusiata)，又名竹笙、竹参，属真菌门、担子菌亚门、腹菌纲、鬼笔目、鬼笔科竹荪属真菌。素有“菌类皇后”之称[1]的竹荪因高蛋白、低脂肪、氨基酸种类齐全等特点而被誉为 “现代保健食品”及“十分好的蛋白质来源”食品。除了食用价值，竹荪还具有一定的药用保健价值。相关研究[2-3]表明竹荪可以减少促癌物质和肠膜的接触时间，从而起到预防消化道癌、结肠癌的作用；此外，它还可以有效预防动脉粥样硬化、高血压、糖尿病、心肌梗塞等慢性疾病的发生。

由于竹荪具有较高的营养价值和药用价值，且竹荪具有良好的防腐效果[4]，近年来对竹荪的研究成为食用菌科研工作者的重点研究课题之一。与香菇、金针菇等相比，竹荪的培养相对较难，在液体培养基中，不易生长，发酵周期很长。目前，针对竹荪液体培养所需的理化条件的摸索和短时间内获得大量营养菌丝体的研究报道已有一些，但并不多，国外的报道几乎没有。吴振强等[5]对长裙竹荪进行了液体培养的研究，得出葡萄糖是最佳碳源，最适温度是21～25℃，菌丝得率为1.10%(W/V)。杜显光等[6]通过对长裙竹荪液体培养所需物理、化学条件的初步研究，确定了长裙竹荪菌丝体生长所需的一些理化条件，表明短时间内要获得大量菌丝体是可行的。竹荪菌丝体的液体培养主要问题是适宜培养基的选择、培养条件的控制以及培养液的开发利用等。

本试验以竹荪350和竹荪D-8两个菌株为材料，研究不同培养基、pH值、温度及VB1浓度对这两种菌株生长的影响，为竹荪的液体发酵提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株

竹荪菌株：竹荪350和竹荪D-8，引自福建省蚕桑研究所食用菌站。

抑菌试验供试菌株：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，引自福建农林大学食品科学学院微生物实验室。

1.1.2 试验设备

不锈钢手提式灭菌器DSX-280B型：上海申安医疗器械厂；不锈钢电热鼓风干燥箱DHG-9241A型：江苏省金坛市大地自动化仪器厂；数显恒温水浴锅HH-2型：江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；智能型生化培养箱SPJ-250W型：江苏省金坛市大地自动化仪器厂；单人净化工作台SW-CJ-2D型：苏州净化设备有限公司；全温振荡器ZHWY-211B型：厦门德维科技有限公司；DELTA-320 pH计：梅特勒-托利多仪器（上海有限公司）；电子天平LP1002B型：常熟市百灵天平仪器有限公司。

1.1.3 培养基配方

（1）马铃薯固体培养基(PDA固体培养基)

马铃薯 （去皮）200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁 0.8g，琼脂 18-20g，水 1000mL。

（2）黄豆粉固体培养基

马铃薯（去皮）200g，黄豆粉 50g，葡萄糖 20g，磷酸二氢钾 0.3g，硫酸镁0.8g，琼脂18-20g，水1000mL。

（3）玉米粉固体培养基

马铃薯（去皮）200g，玉米粉 50g，葡萄糖 20g，磷酸二氢钾 0.3g，硫酸镁0.8g，琼脂18-20g，水1000mL。

（4）麸皮固体培养基

马铃薯（去皮）200g，麸皮 50g，葡萄糖 20g，磷酸二氢钾 0.3g，硫酸镁 0.8g，琼脂 18-20g，水 1000mL。

（5）牛肉膏蛋白胨培养基

牛肉膏 5g，蛋白胨 10g，NaCl5g，水 1000mL，琼脂20g。

1.2 试验方法

1.2.1 培养基制作

（1）马铃薯固体培养基（PDA固体培养基）

选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成小方块，称取200g，加少量水，煮沸后改小火煮30min，然后用8层沾湿纱布过滤，往滤液中加入琼脂20g，葡萄糖20g，使其溶解后，搅匀，补足水至1000mL，最后分装试管，塞好硅胶塞或棉花塞。以1.05kg/cm2（15磅/英寸 2），121.3℃，30min 灭菌，摆成斜面，备用。

（2）马铃薯液体培养基

其制作方法与其固体培养基的制作相同，但不用加琼脂。制作完之后将其分装在300mL三角瓶中，每瓶装量为100mL，灭菌备用。

（3）黄豆粉固体培养基

在PDA培养基的基础上按比例加入黄豆粉溶解均匀，分装试管，其它步骤同PDA固体培养基的制作。

（4）玉米粉固体培养基

在PDA培养基的基础上按比例加入玉米粉溶解均匀，分装试管，其它步骤同PDA固体培养基的制作。

（5）麸皮固体培养基

称取50g麸皮放入已制好的1000mL PDA液体培养基中，用小火煮5-10min左右，过滤，将滤液加入琼脂溶解，分装试管，其它步骤同PDA固体培养基的制作。

（6）牛肉膏蛋白胨培养基

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂放入烧杯中，加入所需要的水量，在石棉网上加热使其溶解，用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH至7.6。将配制的培养基分装入三角烧瓶内，每瓶装 150mL，以 1.05kg/cm2（15 磅/英寸 2），121.3℃，灭菌30min，备用。

1.2.2 试验菌种的培养

（1）竹荪的培养：在无菌室中将竹荪350和竹荪D-8分别转接到PDA试管斜面培养基，在25℃生化培养箱内连续活化3次，第三次每个菌株分别转接20支备用。

（2）大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的培养：在无菌室中将供试菌种接入相对应的牛肉膏蛋白胨斜面，置于37℃恒温培养箱内培养18-24h，备用。

1.2.3 滤纸圆片的准备

用打孔器将新华1号定性滤纸打成直径6mm的小圆片，于培养皿中160℃干热灭菌1-2h。

1.2.4 不同培养基对竹荪菌丝生长的影响

将竹荪350和竹荪D-8斜面种分别切成大小约为5mm×5mm的小菌块，分别接在马铃薯斜面培养基、玉米粉斜面培养基、麸皮斜面培养基、黄豆粉斜面培养基中，每种培养基每个菌种各接5支，在25℃生化培养箱中培养，测定每种菌株菌丝的生长速度，确定每种菌株生长的最适培养基。

1.2.5 不同pH值对竹荪菌丝生长的影响

根据上述筛选出来的两种培养基，进一步测定不同pH值对竹荪菌丝生长的影响。用酸度计将培养基的 初 始 pH 值 调 至 5.00、5.50、6.00、6.50、7.00、7.50、8.00七个梯度，每个梯度每个菌株5个重复，接种方法、培养条件同1.2.4。测定每种菌株菌丝的生长速度，确定每种菌株生长的最适pH值。

1.2.6 不同温度对竹荪菌丝生长的影响

在所筛选出来的两种培养基中，测定不同温度对竹荪菌丝生长的影响。温度设16℃、19℃、22℃、25℃、28℃、31℃、34℃七个梯度，每个梯度每个菌株5个重复，接种方法同1.2.4，接种完毕，分别置于相应温度的恒温培养箱中培养。测定每种菌株菌丝的生长速度，确定每种菌株生长的最适温度。

1.2.7 不同浓度VB1对竹荪菌丝生长的影响

在所筛选出来的两种培养基中，分别加入浓度为0.005% 、0.010% 、0.015% 、0.020% 的 VB1，以 VB1浓度为0作为对照。接种方法同1.2.4。接种完毕，置于每种菌株生长的最适温度下恒温培养，测定每种菌株菌丝的生长速度。

1.2.8 竹荪菌丝生长速度测量方法

菌丝生长速度采用直接测定法，即在菌丝萌发后对其边缘画线，几天后再对其边缘画线，用刻度尺测量两条线的平均距离，除以天数即为竹荪的生长速度，单位为 mm/d，(d：day)。

1.2.9 差异显著性分析

采用DPS软件进行数据处理。

2 结果与分析

2.1 不同培养基对竹荪菌丝生长速度的影响

竹荪的生长与营养成分有关，本试验设计了4种培养基进行对比，结果见表1。

由表1可知，竹荪350在麸皮和马铃薯培养基生度速度最快，而且二者无显著差异；对于竹荪D-8，同样也是麸皮和马铃薯培养基生度速度最快，而且二者无显著差异，因此，既可选择麸皮也可选择马铃薯培养基作为以下试验的培养基质。本试验选用两种培养基，进一步测定其它因素对竹荪菌丝生长的影响。

表1不同培养基对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.1 The effects of media ingredients on mycelial growth of Dictyophora indusiata

2.2 不同pH值对竹荪菌丝生长速度的影响

大多数食用菌在微酸和中性pH条件下长势良好，而在碱性条件下生长缓慢。竹荪在不同pH条件下，在麸皮和马铃薯两种培养基中的生长速度见表2和表3。

表2麸皮培养基下不同pH值对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.2 The effects of pH on mycelial growth of Dictyophora indusiata

表3马铃薯培养基下不同pH值对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.3 The effects of pH on mycelial growth of Dictyophora indusiata

由表2可知，在麸皮培养基中，竹荪350和在竹荪D-8都是在pH6.0和pH5.5中长势最好，而且二者无显著差异。

由表3可知，在马铃薯培养基中，竹荪350在pH5.5和pH6.0中长势最好，而且二者无显著差异；对于竹荪D-8，同样也在pH6.0和pH5.5中长势最好，而且二者无显著差异。这与相关资料研究的其他竹荪品种在pH5.5-6.0生长速度最快是相符的[10]。

2.3 不同温度对竹荪菌丝生长速度的影响

不同温度对竹荪生长的影响见表4和表5。

表4麸皮培养基下不同温度对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.4 The effects of temperature on mycelial growth of Dictyophora indusiata

表5马铃薯培养基下不同温度对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.5 The effects of temperature on mycelial growth of Dictyophora indusiata

由表4可知，竹荪350在麸皮培养基中，25℃和22℃条件长势最好，而且二者无显著差异；竹荪D-8在麸皮培养基中，则25℃条件长势最好，25℃与其它温度差异显著。

由表5可知，竹荪350在马铃薯培养基中，25℃和28℃条件下长势最好，而且二者无显著差异；竹荪D-8在马铃薯培养基中，25℃条件下长势最好，25℃与其他温度差异显著。

2.4 不同VB1浓度对竹荪菌丝生长速度的影响

本试验所用的VB1是从药店所买的VB1片。不同VB1浓度对竹荪菌丝生长的影响如表6和表7所示。

由表6可知，竹荪350在麸皮培养基中，对照组的长势最好而且与其它浓度的VB1差异显著；竹荪D-8在麸皮培养基中，同样也是对照组的长势最好而且与其它浓度的VB1差异显著。说明在本试验浓度下，VB1会抑制竹荪菌丝的生长。

表6麸皮培养基下不同VB1浓度对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.6 The effects of VB1 on growth of Dictyophora indusiata

表7马铃薯培养基下不同VB1浓度对竹荪菌丝生长速度的影响Tab.7 The effects of VB1 on growth of Dictyophora indusiata

由表7可知，竹荪350在马铃薯培养基中，CK、0.005%、0.010%、0.015%的VB1浓度下竹荪菌丝的长势都很好，无显著差异，与0.20%VB1差异显著；说明VB1浓度过高，抑制竹荪350菌丝生长的作用越强。在本试验浓度下，VB1对竹荪D-8无显著抑制作用。

由表6和表7可知，在配制培养基时，不需要添加VB1。

3 结论

3.1 马铃薯培养基和麸皮培养基是竹荪生长的良好基质，可以用于今后试验竹荪的液体发酵培养。由于麸皮培养基的制作过程相对马铃薯培养基复杂，因此可选择马铃薯培养基。

3.2 不同竹荪菌株对pH要求比较一致，最适pH范围为5.50～6.00。竹荪生长的条件受温度影响也很大，试验发现竹荪在16～34℃都能生长，以25℃最佳。

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