银杏达莫联合脂必泰胶囊对小鼠心肌缺血模型的保护性研究

李 健

(山东中医药大学附属医院药学部，济南 250011)

缺血性心脏病属中医学“胸痹”范畴，是目前引发突然死亡的主要原因之一，严重威胁人类健康。近年来，中药在心肌缺血保护方面显示出良好的前景。银杏达莫是银杏叶提取物，能有效地扩张脑血管、抑制血小板聚集、增加脑血流量、促进脑血液循环，抗氧化、清除自由基、缓解缺血、缺氧和舒张血管平滑肌等药理作用［1］。今年药理研究发现［2］，其能升高大鼠超氧化物歧化酶、降低丙二醛含量。近年研究发现［3］，脂必泰能有效地调脂，还能改善血管内皮功能，但目前未见关于银杏达莫在心肌缺血保护作用的详细研究。本研究拟在异丙肾上腺素诱发的小鼠心肌缺血模型上，探讨银杏达莫联合脂必泰对心肌缺血的保护作用及作用特点，为临床用药提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

盐酸异丙肾上腺(ISO)(上海禾丰制药有限公司，批号6E2011);银杏达莫注射液(山西普德药业有限公司，批号20110120);脂必泰(成都地奥九泓制药厂，批号101126);生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)。磷酸肌酸激酶(CK)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)试剂盒均购于北京中生生物工程公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.2 仪器

ECG-651型心电图仪(上海光电医用电子仪器有限公司)、721分光光度计(上海第三分析仪器厂)、CLSM共聚焦激光扫描显微镜(德国Zeiss公司)。

1.3 动物

SPF级昆明种小鼠40只，雌雄各半，体质量18!23g，平均体质量20.8±2.4g，购于山东中医药大学实验动物中心(许可证号SCXK(鲁)20070004)。

1.4 模型建立及分组

入组小鼠均在实验前记录Ⅱ导联心电图，剔除ECG异常者，并将其随机分为对照组、模型组、银杏达莫组以及联合组。对照组和模型组小鼠给予10mg·kg－1NS，银杏达莫组给予1ml/d腹腔注射，联合组在银杏达莫组基础上给予4.8mg·kg－1。5min给予20mg·kg－1盐酸异丙肾上素，连续2d皮下注射ISO。第2天注射3%戊巴比妥钠ip麻醉后，仰卧位固定，记录ISO注射前及注射15min后记录1次Ⅱ导联测定ST段J点上移值。2h后去眼球采血备用。将血样3000r/min离心15min后取血清，血清CK、LHD含量按照比色法测定，血清SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，血清MDA含量按照硫代巴比妥酸法测定，以上测定均按试剂盒说明书进行操作。取血后立即处死小鼠取出心脏，剪去心室置于4%多聚甲醛中进行病理组织学检查。

1.5 统计学处理

运用SPSS17.0分析所得数据，一般资料用均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析进行组间比较，各组间样本采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对异丙肾上素诱发小鼠心肌缺血的影响

2.1.1 对心肌缺血小鼠心电图ST段影响 表1显示，与对照组相比，异丙肾上素皮下注射后，模型小鼠的心电图ST段明显抬高(P＜0.01)。银杏达莫组及联合组能明显抑制异丙肾上素诱导的小鼠心电图ST段的抬高(与模型组相比均P＜0.01)，且2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1各组小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影响(±s)

表1各组小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影响(±s)

注:与对照组比较:1)P＜0.001，2)P ＜0.01;与模型组比较:3)P ＜0.001，4)P ＜0.01，5)P ＜0.05

组 别 例数 ST段抬高(mV) CK(U"L－1) LDH(U"L－1) MDA(μmol"L－1) SOD(U"mL－1) NOS(KU"g－1)对 照 10 0.04±0.01 234.56±101.18 361.34±131.35 5.83±1.38 323.95±20.36 0.87±0.09模 型 10 0.74±0.381) 572.49±113.241)623.19±127.121) 11.42±1.731) 226.91±19.271) 0.59±0.072)银杏达莫 10 0.51±0.233) 375.31±108.133)519.28±121.474) 7.13±1.343) 334.27±23.284) 1.10±0.134)联 合 10 0.38±0.164) 338.58±102.544)462.71±113.945) 6.06±1.255) 397.16±30.213) 1.65±0.113)

2.1.2 对心肌缺血小鼠血清LDH、CK、SOD、MDA及NOS的影响 表1显示，与对照组相比，模型组血清LDH、CK及MDA均明显升高(P＜0.01)，而血清SOD和NOS明显降低(P＜0.01)。与模型组相比，银杏达莫组及联合组均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)。

2.2 对异丙肾上素诱发心肌缺血小鼠心肌损伤程度的影响

图1显示，对照组小鼠心肌组织未见病理形态改变。模型组小鼠缺血心肌呈萎缩、断裂状，部分心肌纤维胞浆呈凝固性坏死，部分呈溶解性坏死，心肌间炎症细胞浸润明显。与模型组相比，银杏达莫组及联合组小鼠心肌组织病理损伤程度均有所减轻，且联合组小鼠心肌组织病理改变情况明显优于银杏达莫组，仅见少量心肌纤维萎缩和少量炎症细胞浸润。

3 讨论

心血管疾病是临床常见病、多发病，随着社会人口的老年化，其发病率呈上升趋势。心肌缺血为心血管常见疾病，长期心肌缺血会导致心肌梗死以及心细胞坏死。异丙肾上腺素皮下注射可加快心率，使心肌收缩力增强，增加心肌耗氧量，造成心肌细胞缺血，是一种常用的动物实验性心肌缺血模型［4］。心电图变化是心肌缺血模型成功与否的最直观的指标［5］。本研究结果显示，在异丙肾上腺素皮下注射后，模型组小鼠心电图ST段明显抬高，给予银杏达莫和银杏达莫联合脂必泰能明显抑制小鼠心电图ST段的抬高，且银杏达莫组与联合组明显比较差异有统计学意义(P＜0.05)。提示银杏达莫对小鼠心肌缺血损伤具有一定保护作用，脂必泰能提高银杏达莫的心肌缺血保护作用。

图1 各组用药对异丙肾腺上素诱发心肌缺血小鼠心肌损伤程度情况比较

LDH、CK是心肌缺血时心肌细胞受损程度的重要标志［6］。氧自由基形成过多可导致膜脂质过氧化加强，改变膜通透性及流动性，使心肌细胞的功能、结构发生改变，是心肌缺血发生的主要机制之一［7］。MDA含量可间接反映细胞受自由基损伤的程度。SOD活性高低可间接反映机体清除氧自由基的能力［8］，NOS是一种分布于血管内皮细胞、神经细胞、中性粒细胞和巨噬细胞等含铁的单氧化酶［9］。本研究结果显示，在异丙肾上素皮下注射后，模型组小鼠血清LDH、CK及MDA均明显升高，而血清SOD和NOS明显降低(P＜0.01)。银杏达莫组及联合组均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)，进一步提示银杏达莫联合脂必泰抗心肌缺血作用。

通过EN染色可显示，心肌组织的病理变化可微观地观察心肌损伤程度［10］。本研究结果显示，与模型组相比，银杏达莫组及联合组小鼠心肌组织病理损伤程度均有所减轻。联合组仅见少量心肌纤维萎缩和少量炎症细胞浸润，其小鼠心肌组织病理改变较银杏达莫组明显减轻，提示银杏达莫联合脂必泰可明显减轻心肌组织病理损伤程度，其原因可能与脂必泰改变血管内皮功能有关。

综上所述，银杏达莫联合脂必泰对小鼠心肌损伤具有保护作用，其机制可能与增加NOS、SOD活性，抑制MDA含量和血清LDH、CK活性增加有关。

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