丹红注射液的质量标准及其稳定性研究*

弋金龙 黄 翔 何春晓 汪兴宇 张茹萍 韩 进 陈 波 谌晓曦（浙江中医药大学，浙江 杭州 310053）

丹红注射液的质量标准及其稳定性研究*

弋金龙 黄 翔 何春晓 汪兴宇 张茹萍 韩 进 陈 波 谌晓曦△（浙江中医药大学，浙江 杭州 310053）

目的 建立检测丹红注射液中有效部位含量的方法，并考察丹红注射液质量标准及其稳定性。方法丹红注射液中黄酮定量应用紫外可见分光光度法，以芦丁为标准品定量，检测波长506 nm；采用pH计法和沉淀法对注射液进行pH，鞣质、蛋白质、草酸盐、抗氧化试验和稳定性试验。结果 芦丁在0.021～0.103 mg/mL范围内，浓度与吸光度成良好线性关系，r=0.9999，平均回收率100.46%，RSD为1.20%。6批注射液中总黄酮的含量分别 9.68、9.85、9.58、11.80、10.42、11.67 mg/mL，pH 5.62～5.83，鞣质、蛋白质、草酸盐含量都符合药典规定。结论 本实验方法操作简单，结果准确，可为丹红注射液的质量控制提供参考。

丹红注射液 总黄酮 分光光度法 质量标准 稳定性

丹红注射液中黄酮类化合物是该药发挥药效的有效部位。因此本实验以芦丁为指标，采用分光光度法，通过方法学的系统考察和6批样品的含量测定，建立了丹红注射液中总黄酮的含量测定方法。为对丹红注射液质量的评价和控制提供更全面的依据，本实验同时考查注射液中鞣质、蛋白质、草酸盐等质量标准及其稳定性。

1 材 料

TU-1900型双光束紫外可见分光光度计 （北京普析通用仪器有限责任公司）；超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；XS105DualRange分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。InoLab pH720实验室台式酸度计（德国WTW公司）。丹红注射液（批号110858，110926，110927，110934，110937，110928。 规格 10 mL/支），山东步长制药有限公司提供。芦丁对照品（批号100080-200707）购于中国药品生物制品检定所，甲醇（批号101437）购于美国Fisher公司，为色谱纯。盐酸（批号20101030），中国杭州化学试剂有限公司。明胶（批号 F20091228）、冰醋酸（批号 T20100913）、氢氧化钠（批号 20120809）、氯化钠（批号 20120926）、磺基水杨酸（批号 T20100112）、氯化钙（批号 F20111012）、亚硫酸氢钠（批号F20080528）均购于国药集团化学试剂公司，为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹红注射液中总黄酮含量测定

2.1.1 溶液的配制 对照品溶液：精密称定芦丁对照品2.06 mg，以50%甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中，摇匀，得质量浓度为0.206 mg/mL的对照品溶液。供试品溶液：精密吸取丹红注射液0.5 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。

2.1.2 测定波长的选择 分别精密吸取芦丁对照品溶液和供试品溶液各1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，各加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，再分别以50%甲醇稀释至刻度，摇匀后放置15 min，以相应的试剂为空白，在300～700 nm波长范围内扫描。芦丁标准品显色后和丹红注射液显色前后紫外可见吸收光谱图如图1所示。由此确定对照品溶液和供试品溶液在506 nm波长处均有最大吸收，故选择506 nm作为总黄酮的检测波长。

2.1.3 标准曲线的制备 分别精密吸取芦丁对照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，按“2.1.2”项 下操 作，在506 nm处测定吸光度。以溶液的质量浓度（mg/mL）为横坐标（X），吸光度（A）为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=11.735X+0.028，r=0.9999。说明芦丁在0.021～0.103 mg/mL范围内，质量浓度与吸光度有良好的线性关系。

2.1.4 精密度试验 精密吸取芦丁对照品溶液1.0 mL，按“2.1.2”项下操作后，在506 nm测定6次吸光度，并计算其相对标准偏差（RSD）=0.13%。

2.1.5 重复性试验 精密吸取批号111033丹红注射液0.5 mL各6份，配制供试品，依法测定其含量，结果其RSD=0.43%，表明该方法的重现性良好。

2.1.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液1.0 mL，按“2.1.2”项下操作，对显色后的供试品溶液每隔15 min测1次吸光度，连续测定9次，结果吸光度平均值为0.643，RSD=0.22%，表明样品在显色后120 min内稳定。2.1.7 加样回收率试验 精密吸取已知含量的同批供试品液0.5 mL共6份，各加入芦丁对照品0.250 mg，依法测定各份样品中总黄酮的含量并计算回收率，结果平均回收率100.46%，见表1。2.1.8 样品含量测定 取6个不同批号的丹红注射液，按“2.1.1”项方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液1 mL，按“2.1.2”项中方法测定，每批样品测定3次。将其吸光度值代入芦丁标准曲线可得对应样品浓度，结果见表2。

表1 加样回收率试验

表2 6批丹红注射液中总黄酮的含量（mg/mL）

2.2丹红注射液质量稳定性研究

2.2.1 pH值测定试验 取注射液10 mL，缓慢加入0.1 mol/L HCl，观察注射液外观变化情况，并测定pH值。取注射液10 mL，缓慢加入0.1 mol／L氢氧化钠，观察注射液外观变化情况，并测定pH值。结果注射液在加盐酸溶液的过程注射液出现浑浊，而加氢氧化钠溶液5 mL仍然未出现浑浊。见表3。

表3 丹红注射液pH值测定结果

2.2.2 鞣质检查试验 取注射液1 mL加0.1 mol/L醋酸溶液1滴，再加明胶氯化钠溶液（明胶1%，氯化钠10%的水溶液，新鲜配制）5滴，3 min内观察其澄清度变化。按方法连续测定6批注射液样品，结果均未见产生沉淀或浑浊。

2.2.3 蛋白质检查试验 取注射液1 mL加新制的30%磺基水杨酸液1 mL，摇匀，放置5 min，观察其澄清度变化。按方法连续测定6批注射液样品，结果均未见见产生沉淀或浑浊。

2.2.4 草酸盐检查试验 取注射液2 mL加0.1 mol/L醋酸溶液0.2 mL，蒸馏水稀释至5 mL，加3%氯化钙试液3滴，放置10 min，观察其澄清度变化。按方法连续测定6批注射液样品，结果均未见产生沉淀或浑浊。

2.2.5 抗氧化试验 取注射液2 mL，缓慢加入0.1 mol/L亚硫酸氢钠0.5 mL，观察其对药液澄明度的影响。按方法连续测定6批注射液样品，结果丹红注射液的澄明度均无明显变化。

2.2.6 稳定性试验 选取批号111033丹红注射液，分别在低温（4±2）℃、高温（60±2） ℃、光照（2500±300） lx 3种条件放置0、7、14 d进行稳定性考查，重复3次。结果稳定性良好。见表4。

表4 丹红注射液稳定性试验

3 讨 论

由图1可知芦丁经过硝酸铝-亚硝酸钠显色后在506 nm有吸收峰。而丹红注射液不显色在400～600 nm没有吸收峰，而经过显色后在499 nm有吸收峰。因而选定在506 nm下测定丹红注射液中黄酮含量，排除自身吸光度干扰，具有较强专属性［1］。

测得6批样品中总黄酮的含量分别为9.68、9.85、9.58、11.80、10.42、11.67，均符合国家药品标准规定（丹红注射液每1 mL含总黄酮以芦丁（C27H30O16）计，不得少于 5.0 mg）。

由黄酮测定稳定性实验可知，样品在显色后120 min内稳定。但样品中含有多种还原性很强成分［2］，长时间非密封状态下放置对其含量测定是否有影响，需要近一步研究确定。

pH值是影响药用成分的稳定性和澄明度变化的一个因素，控制好pH值能保证注射液的澄明度。本实验中6批次注射液pH值5.62～5.83，较为稳定。注射液中添加一定量盐酸，注射液会出现浑浊情况，而添加氢氧化钠溶液与添加抗氧化剂亚硫酸氢钠对其澄明度均无影响。说明该注射液在强酸环境下澄明度不稳定，而在微酸或碱性环境下澄明度较稳定［3］。

由实验结果可知，6批样品中的鞣质、蛋白质、草酸盐等项目检测，均符合中药、天然药物注射液质量要求。注射液分别在低温、高温及光照条件下放置7 d，14 d与0 d比较，其外观性状、pH、澄明度、总黄酮含量等均基本无改变，表明其稳定性良好。

［1］朱明，王静，张小宁，等.紫外光谱法测定蒙药紫檀香总黄酮的含量［J］.中华中医药杂志，2012，27（10）：2517-2520.

［2］Zhan Y，Xu J，Liang J，et al.Simultaneous LC-MS-MS analysis of danshensu，salvianolic acid B，and hydroxysafflor yellow a in beagle dog plasma，and application of the method to a pharmacokinetic study of danhong lyophilized powder for injection ［J］.Chromatographia，2008，68（1）：71.

［3］吕应年，GG Chen，龚先玲，等.半边旗5F注射液的质量标准研究［J］.中国中药杂志，2008，33（20）：2343-2346.

Study on Quality Standard and Stability of Danhong Injection

YI Jin-long，HUANG Xiang，HE Chun-xiao，et al. Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Hangzhou 310053，China

Objective:To establish a method to detect the content of effective site in Danhong Injection and research for the quality standard and stability of it.Methods:The quantitative of flavonoids in Danhong Injection was tested by ultraviolet-visible spectrophotometer （UV-VIS），rutin as standard，detection wavelength 506 nm.The pH value and stability test of the six batchs injection were determined with pH meter and the contents of tannin，protein，oxlaicacid slalt were detected by deferent methods.Results:From 0.021 to 0.103 mg/mL，the concentration and absorbance of rutin had a good linear relationship （r=0.9999），the average recovery rate was 100.46% ，and the RSD was 1.20%.Six batchs injection of total flavonoids were 9.68，9.85， 9.58，11.80，10.42，11.67 mg/mL，pH 5.62～5.83.Its content of tannin，protein，oxalate were complied Pharmacopoeia standard.

Conclusion:The method is simple，accurate，and can provide a reference control for quality of Danhong injection.

Danhong Injection；Flavonoids；Spectrophotometer method；Quality standard；Stability

R944.1+1

A

1004-745X（2013）06-0864-03

国家自然科学基金项目（30973933，81274176）；浙江省自然科学基金项目（Z2101201，LR12H27001）；浙江省中医药重点学科（2012-XK-A06）；浙江省科技厅公益技术应用研究项目（2012C33122）

△通信作者

2013-02-14）