胱抑素C在狼疮肾炎诊断中的应用

刘冬叶

（湖南省邵阳县第二人民医院检验科 湖南 邵阳 422100）

1 研究背景

系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）是一病因不明的好发于育龄女性的慢性炎症性自身免疫性疾病.病程和预后多样，常反复恶化与缓解.通常累及肌肉骨骼系统和皮肤，也可引起肾，肺，心和中枢神经系统炎症性改变［1］。狼疮肾炎（l upus nephritis，LN）是SLE中最常见且严重的并发症之一，约50%-70%的SLE伴有LN，表现为高发病率和高死亡率，狼疮肾炎的五年生存率比较低狼疮肾炎［2］。然而，若能早期诊断出狼疮肾炎并及时的给予治疗，将显著的改变肾脏的病理进程并延长患者的生存率［3］。因此，对狼疮肾炎的早期检测和诊断具有重要的临床意义。胱抑素C（cystatin C，Cys C）是近年来报道的反应肾小球滤过率（GFR）最敏感的指标之一，可早期反映肾小球滤过膜通透性的变化及早期肾小管的损伤变化，对早期肾损伤有着较为敏感的检出率［4］。本文通过检测89例SLE患者和60例健康者血清及尿中的Cys C和24h尿微量清蛋白（24h UmAlb）的水平，探讨Cys C在狼疮肾炎中的变化及应用价值。

2 实验方法

2.1 标本的采集

2.1.1 健康对照组及疾病组纳入标准：

健康对照组：为随机抽取本院门诊经体检确认无自身免疫病和其他躯体疾病者（病史、查体、心电图、胸片、B超、血液常规及生化检查等均正常者）40例，年龄28～67岁，平均（34.3±17.8）岁，其中男10例，平均（33.2±15.5）岁，女30例，平均（31.2±17.3）岁。近1个月内无重大生活事件。

疾病组：选择2011年1月～2012年12月我院收治的SLE患者89例，男8例，女81例，平均年龄（31.58±14.22）岁。诊断符合美国风湿病学会（ACR）2010年修订的诊断标准［5］。患者无并发糖尿病、高血压及其他引起肾功能改变的疾病。

2.1.2 血清样品和尿液标本收集：研究对象于上午8～9时采集空腹静脉血3 mL，置于洁净的促凝管内，在常温下以3000 r／min的速率离心5 min，以EP管分离血清置于-80℃冰箱内保存。同时嘱患者早上8点排尿弃去，开始留取24小时全部尿量（包括次日凌晨8点）收集在一个带盖的干净容器内，于第一次采集尿后加入1 mL甲苯作为防腐剂，混匀后测量并记录总尿量，再取混匀尿2～3 ml置于-80℃冰箱内保存。

2.2 检测方法

2.2.1 所有标本都均在日立7600生化分析仪上测定。先以标准品定标，再以高低二水平质控物做质控，确认仪器及工作状态良好后，再行标本检测。Cys C检测为增强免疫比浊法，Urea为酶活力分析法，Cr用碱性苦味酸二点时间法，24h尿微量白蛋白以免疫比浊法检测，β2-微球蛋白以颗粒增强免疫比浊法进行检测。

2.2.2 分组依据：以24h UmAlb为依据，将SLE）患者分为24h UmAl b＜20 mg／L的SLE组（无肾病）和24h UmAlb＞20 mg／L LN组（有肾病），LN组又再依据24h UmAl b为20-200 mg／L的LN1组（早期LN）和24h UmAlb＞200 mg／L的LN2组（临床LN）。

表1 各组间Urea、Cr、β2-MG和Cys C水平比较（）

表1 各组间Urea、Cr、β2-MG和Cys C水平比较（）

注：与正常对照组比较＃P＜0.05，与SLE组比较＊P＜0.05，与LN1组比较¥P＜0.05。

0.14±0.09 SLE组 24 4.98±2.13 74.12±18.12 2.72±0.65＃ 1.65±0.28＃ 0.28±0.14＃LN1组 33 5.34±3.09 73.15±24.54 4.35±2.38＃＊ 2.65±1.12＃＊ 0.48±0.16＃＊LN2组 32 9.46±6.45＃＊¥156.43±112.18＃＊¥7.12±6.02＃＊¥ 4.34±1.89＃＊¥ 0.99±0.21＃＊¥sC对照组 40 5.12±1.12 76.57±24.34 2.0±1.02 0.98±0.16组别 例数 Urea Cr β2-MG 血CysC 尿Cy

3.2 血清Urea、Cr、β2-MG和Cys C对SLE肾损害诊断效能的比较：用ROC（receiver operating characteristic）曲线分析各指标对SLE肾损害诊断的准确性（如图1），结果显示Cys C和β2-MG的AUC（area under the curve）相当，分别为0.977和0.965，Urea、Cr的AUC分别为0.781和0.851（P＜0.05），这个结果显示Cys C和β2-微球蛋白在对系统性红斑狼疮的肾损害的诊断上明显优于Urea、Cr。

图1 血清Cys C和Urea、Cr、β2-MG对LN的ROC曲线

3 实验结果

3.1 各组血清Urea、Cr、β2-MG、Cys C及24h UmAlb的比较

对所有资料行正态性和方差齐性分析，各组资料均为正态分布且为方差齐性资料，所以用单因素方差分析对各指标进行统计学分析，SLE

4 讨论

SLE是多因素参与的病因尚不明了的自身免疫性疾病，其临床表现复杂多样，病程迁延反复，血清中存在大量自身抗体，全身多脏器可受累，肾脏是最常见累及器官之一［6］。LN为SLE常见且最严重的并发症之一。目前认为患者免疫耐受机制破坏，细胞免疫和体液免疫功能失调，补体旁路途径激活，造成大量自身抗体产生，并在肾脏沉积是导致LN发病的基本环节［7］。LN有着很高的患病率和死亡率，有报道在上世纪九十年代狼疮肾炎患者5年和10年的存活率分别为83%-92%和74-84%［8］。尽管在近二十年来，对SLE的诊疗有了很大的改善，LN的预后依然不理想，约有25%的病人在发现有肾损害的10年后恶化为终未期肾衰竭［9］。LN以交替的发作和缓解为特点，这就要求对其进行长期的跟踪和监测以便随时更改治疗方案。LN肾病早期除肾小球病变外还较普遍的存在肾小管间质的损伤。因此，及时的了解肾小球和肾小管的损害程度对LN的早期诊断，采取及时的干预措施对延缓肾脏疾病的发展具有重要的临床意义［10］。

Cys C是由122个氨基酸残基组成，分子量为13.3KD，带正电荷，等电点为9.3碱性非糖化蛋白质，是半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员之一。编码Cys C的基因位于20号染色体短臂，长约615kb，由三个外显子和二个内含子组成，属于“管家基因”，能在几乎所有的有核细胞表达，无组织学特异性，故机体Cys C产生率相当恒定［11，12］。Cys C属分泌性蛋白质，广泛存在于各种体液中，其中精液和脑脊液中浓度最高、尿液中最低，可经肾小球自由滤过，在近曲小管被重吸收并降解。肾脏是清除循环中Cys C的惟一器官，GFR是决定血清Cys C浓度的主要因素［13］。当肾功能受损时，Cys C能敏感的反应其受损的状况及其受损的部位，若是肾小球的病变，血清中的Cys就会显著升高；若是肾小管的病变，经肾小球滤过的Cys C在肾小管不能被完全分解代谢，尿液中的Cys C就会升高。

本文通过对89例SLE患者不同临床分期的血清及尿液胱抑素C的检测结果分析，发现随着SLE肾损伤的病程发展，血清及尿Cys C随着24h UmAlb的增加明显的呈现逐渐增高的趋势。实验结果显示，LN2组的血清及尿Cys C水平均显著高于LN1组、SLE组及对照组（p＜0.05）；LN1组显著高于SLE组和对照组（p＜0.05）；SLE组也显著高于对照组。这与SLE患者肾功能的受损常同时累及肾小球和肾小管是相一致的，此前已有相关研究表明血清中的Cys C能较传统的肾功能指标更为敏感的反映肾小球滤过率的变化，尿液中的Cys C能敏感的反映肾小管的受损状况。用ROC曲线分析结果显示Cys C和β2-MG的AUC（area under the curve）相当，分别为0.977和0.965，Urea、Cr的AUC分别为0.781和0.851（P＜0.05），这个结果显示Cys C和β2-微球蛋白在对系统性红斑狼疮的肾损害的诊断上明显优于Urea、Cr。本实验结果证实了Cys C能敏感地反映肾小球和肾小管的功能，可作为SLE早期肾功能损伤评价的指标。

［1］周江红，刘南田，and朱海萍.系统性红斑狼疮.国外医学：护理学分册，2005.24（1）：p.23-24

［2］张凤山，et al.来氟米特治疗31例狼疮肾炎的临床研究.中华风湿病学杂志，2002.6（4）：p.282-284

［3］余学清and陈楠.狼疮肾炎治疗现状及应注意的几个问题.中华肾脏病杂志，2002.18（1）：p.7-8

［4］俸家富，罗军，and李少林.胱抑素C-肾小球滤过率肌酐替代标记物 ［J］.国外医学：临床生物化学与检验学分册，2005.26（3）：p.168-172

［5］王国春，et al.2010年美国风湿病学会年会会议纪要 ［J］.中华风湿病学杂志，2011.15（1）：p.46-48