氯化苯丙胺盐比浊法检测脑脊液蛋白质方法学评价

唐晓霞（靖江市人民医院检验科，江苏靖江 214500）

目前常用的脑脊液（CSF）蛋白质测定方法有硫酸钠-磺基水杨酸比浊法、干化学法、染料结合法和邻苯三酚红铜络合法等，但存在易受湿度、时间等因素影响导致假阳性结果，染料黏附比色杯而不易洗脱，成本较高等缺点。为此，本研究对氯化苯丙胺盐比浊法检测CSF蛋白质进行了评价和探讨，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 无黄疸、无溶血且包括低、中、高蛋白质水平的CSF标本48份。

1.2 仪器与试剂 DXC800全自动生化分析仪及配套质控品、定值血清（美国贝克曼），VITROS350干式生化分析仪及配套双缩脲法检测试剂（美国强生），氯化苯丙胺盐比浊法CSF蛋白检测试剂盒（北京万泰德瑞），干扰物质为血红蛋白、胆红素、维生素C、葡萄糖等。

1.3 方法 将标本3 000r／min离心5min后吸上清液上机检测，参数设置如下：主波长520nm，次波长700nm，标本体积12μL，R1 200μL，R2 75μL，测定值高于2 000mg／L时，以生理盐水稀释后测定。灵敏度实验方法参照文献［1］。精密度实验方法参照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）EP5-A文件［2-3］，计算批内、批间、天间和总变异系数（CV）。线性范围实验方法：以生理盐水对定值血清进行系列稀释，每份稀释标本做双份测定，计算平均值，以拟合曲线分析线性范围。干扰实验方法：将不同浓度干扰物质与同一份CSF标本按体积比1∶9混合，以等体积生理盐水作为无干扰标本，各标本测定双份，计算平均值，以（无干扰标本检测结果±10%）作为明显偏差的判断限。方法学比对实验方法：因强生公司CSF蛋白质检测线性范围宽，对球蛋白和清蛋白检测灵敏度相似，并已得到临床认可［4］，故选择强省公司分析系统作为参考方法（Y），与实验方法，即氯化苯丙胺盐比浊法（X）进行比对，比对实验方法参照CLSI EP9-A文件。

1.4 统计学处理 采用Excel2003软件进行数据分析，包括计算平均值、标准差及制备回归曲线等。

2 结 果

2.1 灵敏度 经检测，该法检测CSF蛋白质的灵敏度为25.5 mg／L。

2.2 精密度 低、中、高浓度标本检测批内、批间、日间及总变异系数均小于5%。

2.3 线性范围 标本蛋白质浓度为60～2 600mg／L，实测浓度与理论浓度具有良好线性关系。

2.4 干扰实验 高浓度血红蛋白（0.1g／L）可导致检测结果出现负偏差；各浓度胆红素、维生素C、葡萄糖对检测结果无明显干扰。

2.5 方法学比对 参考方法与实验方法检测结果回归方程为Y＝0.932X＋12.9，相关系数为0.989。

3 讨 论

CSF中的蛋白质主要因脉络膜毛细血管壁的超滤作用而出现，神经系统亦可自行合成。多种神经系统疾病，如各种原因所致炎性反应、肿瘤、脑外伤、卒中、神经系统退化性病变等均可导致CSF蛋白质浓度升高，而水中毒、CSF外溢症、甲状腺功能亢进等可导致其浓度降低。因此，CSF蛋白质浓度的快速、准确检测对上述疾病的诊断及预后判断有重要意义［5-8］。

在CSF蛋白质常用检测方法中，磺基水杨酸比浊法需自配试剂，且操作繁琐、易产生误差、标准液不统一、精密度较低、蛋白质易形成凝块。染料结合法和邻苯三酚红铜络合法对清蛋白的检测灵敏度高于球蛋白，且染料易污染比色杯。干化学法测定线性范围宽，对球蛋白和清蛋白检测灵敏度相似，测定速度快，适用于急诊检测，但成本较高。氯化苯丙胺盐浊度法利用氯化苯丙胺盐可与CSF中的蛋白质结合，产生稳定的浊度，通过检测浊度的变化而确定蛋白质浓度，具有检测步骤简便、干扰因素少、误差较小等优点。本研究参照CLSI文件进行了系列评价，结果表明该检测方法稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、抗干扰能力较强，适合于临床推广应用。

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