莽草酸含量测定研究进展

白朝辉，石晓峰，刘东彦，李爽

莽草酸又称毒八角酸，化学名为3,4,5-三羟基-1-环己烯-1-羧酸(3,4,5- trihydroxy-l-cyclohexene-1-carboxylic acid)，分子式C7H10O5，分子量174.15，广泛存在于木兰科八角茴香、松柏科等高等植物和微生物中，是一种重要的天然有机酸[1]。

莽草酸具有抗肿瘤、抗菌、抗艾滋病、镇痛、抗血栓形成和抗脑缺血等多种药理活性[2~5]，合成抗禽流感、抗甲流感唯一药物-磷酸奥司他韦的重要原料[6]。本文对莽草酸含量测定方法的研究进展综述如下，希冀为莽草酸的开发利用和深入研究提供参考。

目前，莽草酸的含量测定主要集中在高效液相色谱(HPLC)及其联用技术、气相色谱法(GC)，紫外分光光度法(UV)，毛细管电泳法(CE)，偏最小二乘法-近红外光谱法(PLS-NIR)等，其中高效液相色谱及其联用技术是莽草酸含量测定的主要方法。

1 高效液相色谱及其联用技术

1.1 高效液相色谱法

Lydon[7]采用HPLC测定莽草酸的含量，具体操作为样品用超声提取，色谱柱为Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-1%冰醋酸水溶液，流速为0.8mL/min，柱温为30℃，紫外检测波长为213 nm。莽草酸质量浓度在0.57~7.36 μg/mL范围内，质量浓度与峰面积有良好的线性关系（r=0.9996），保留时间为8分钟，平均加样回收率为99.36%，RSD%为1.71%（n=6）。Andreia PO等[8]建立HPLC测定榅桲属植物叶中莽草酸的含量，仪器为Gilson-HPLC，色谱柱为Chromabond，流动相：0.01N 硫酸，检测器UV，波长214 nm。王琳等[9]采用HPLC法测定不同采收期云南松中莽草酸的含量，色谱柱Agilent Eclipse XDBC18(46mm×50mm,5μm)，流动相为甲醇-1%磷酸水溶液(10:90)，流速0.8mL/min，检测波长214nm，柱温25℃。结果莽草酸在0.0312~0.4368μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均加样回收率为99.97%，RSD为1.06%(n=6)。林於等[10]采用HPLC法测定莽草酸的含量，莽草酸浓度在5~300μg/mL范围内，线性关系良好(r=0.9993)，平均回收率为94.5%，RSD为2.5%(n=5)。此模型简单可靠，稳定性好、精度高，在中药有效成分定量分析中有广阔的应用前景。

1.2 反相高效液相色谱法

吴俊珠等[11]建立RP-HPLC测定松龄血脉康胶囊中莽草酸的含量，检测波长214nm，流速0.8mL﹒min-1，柱温25℃。莽草酸进样量0.4～8.0μg呈良好的线性关系，r=0.9998，平均回收率为98.87%。郭亚健[12]建立RP-HPLC测定八角茴香不同部位中莽草酸的含量测定方法。平均回收率为101.27%，RSD为103%(n= 6)，显示此方法可用于八角茴香莽草酸的含量测定。李伟[13]采用RP-HPLC对广西不同产地的27个八角茴香样品进行莽草酸的含量测定，莽草酸含量在6.3%～7.6%，平均6.61%。试验对八角茴香中莽草酸的生产提供理论参考。反相高效液相色谱法简便、快速、准确、专属性强、重复性好。

1.3 液相-气相色谱联用法

Magdolna[14]采用气相液相色谱联用测定莽草酸的含量，仪器条件：FID检测器，15%DexsilGC300涂布，运行时间30min，氮气流速60cm3/min。样品在旋转蒸发仪上蒸干，再用无水盐酸羟胺的吡啶处理，加热溶解，冷却后用六甲基二硅氮烷和三氟醋酸在反应瓶中100℃反应60min。莽草酸保留时间16min，最低检测限1μg。开发了三甲基硅衍生物的单个解决方案，建立了有机酸和糖最佳条件的定量评价。结果显示在0.25~1μg，相对标准偏差RSD≥10.7%，莽草酸保留时间为16分钟，最低检测线为1微克，此法简单快捷。Bharathi A等[15]用LC-UV定量测定九种八角和各种其他种植物莽草酸的含量。LC-UV分离是通过反相色谱法在C18柱，磷酸二氢钾和甲醇作为流动相。该方法操作简单，结果准确可靠，回收率、精密度、重复性均符合要求。

1.4 高效液相色谱-质谱法

Bharathi A等[15]采用高效液相色谱和串联电喷雾质谱，定量测定八角甲醇提取物莽草酸的含量。分离是通过反相色谱法在Agilentzorbax C18(150mm×4.6mm，5μm)柱，用含有0.1%乙酸的水和乙腈作为流动相，检测波长为210nm，柱温35℃，流速0.8mL/min。莽草酸在3～70μg﹒ml-1范围内呈良好的线性关系，回收率为98.66%，RSD=2.46%。这种方法被成功地用于研究九种八角和各种其他种植物莽草酸的含量。建立了LC-MS检测莽草酸的定性和定量分析方法。本法简便，快速，测定结果准确，重现性好。

1.5 离子抑制反相高效液相色谱

周光明[16]采用IS-RP-HPLC法对杉科植物中莽草酸进行定性、定量分析。色谱柱：Hypersil ODS25mm(4.6mm×150mm)；流动相：HClO4, 流速0.8 mL/min，pH为2.5，检测波长：214nm, 柱温25℃，流速：0.8mL/min；在选定色谱条件下线性范围良好，回收率102.6%，RSD=1.3%，r=0.9998。

2 气相色谱法

Hong-cheng Liu等[17]，建立了气相色谱-质谱联用测定莽草酸含量。其分别采用超声波提取和索氏提取法，提取物经乙醚萃取，无水硫酸钠脱水后挥去溶剂。测定方法及条件：以苯甲酸为内标，柱温为起始温度80℃，以5℃/min的速率升至210℃；检测器温度均为240 ℃；进样量1μL，对中国云南省不同产区的八角茴香进行定量检测，而且用方差分析评价了样品的同质性。结果表明超声提取效率比索氏提取更快更简单，线性和回收率良好。屏边县和富宁县莽草酸的含量最高。此模型稳定性好、精度高，在中药有效成分定量分析中有广阔的应用前景。该法简单、重现性好，可作为莽草酸的含量测定方法。

3 紫外分光光度法(UV)

分光光度法为报道中最早测定莽草酸定量的方法。张志信等[18]采用紫外分光光度法，测定八角茴香中莽草酸的含量，其操作是取八角茴香粉末超声提取，检测波长213nm。结果武定、西畴、马关产的野生和富宁种植八角茴香的莽草酸含量分别为135.05 mg/g、126.32和121.51mg/g、110.46mg/g(干重)。平均加样回收率为102.25%，RSD为2.576%。证明八角茴香是提取莽草酸的良好原料。粟本超等[19]采用紫外分光光度法，样品溶液用0.2%H3PO4稀释，在213nm 波长处测定莽草酸含量。结果其标准曲线的线性范围是4.7～23.0μg/ml，平均回收率为97.25%，RSD=1.07%，n=5。表明紫外分光光度法与高效液相色谱法均可用于莽草酸的含量测定。Saslaw等[20]对浓度0.7～17μg/ml的莽草酸溶液进行研究，用分光光度计于660nm的最大吸收处测定吸光度。Teresa[21]将体积为3倍莽草酸的96%硫酸，用分光光度法检测，在590nm处有吸光度。

4 毛细管电泳法

熊彩侨等[22]采用毛细管电泳法，对广西7种不同产地的八角茴香中莽草酸的含量进行测定，具体做法是超生提取后以5mmol/l缓冲液，60mmol/lSDS四硼酸钠，12.5kv的运行电压，电进样时间3s，213nm的检测波长。结果莽草酸浓度在5~4mmol/l内线性良好。安徽芜湖、福建湘潭、湖北天门、重庆秀山、云南、广西桂林的莽草酸含量分别为4.75%，7.36%，3.13%，5.91%，2.12%，6.15%，平均回收率为（n=6）102.1%，RSD为7.5%。罗英等[23]建立了毛细管区带电泳-紫外检测八角壳和种子莽草酸新的分析方法，优化获得最佳分离条件：采用磷酸盐-硼砂溶液为缓冲液，NaH2PO4为10nmol/L，硼砂为9nmol/L、pH为8.63、分离电压为25kV，回收率分别为98.9%和104.6%。Qing-Feng Zhang 等[24]利用毛细管电泳法测定土茯苓中莽草酸的含量，pH为9.46、分离电压为25kV，温度为25°C和检测波长214nm。Claudia M等[25]用毛细管电泳法，在pH为7.0，分离电压为30kV，完成了反式白藜芦醇中莽草酸的分离和含量测定。Iben LP等[26]在pH值为7.3，紫外线探测在206海里，用胶束动电毛细管电泳法完成了对天然产物中莽草酸含量的测定。

5 偏最小二乘法-近红外光谱法

逯家辉等[27]采用PLS建立测定27个八角茴香样品中莽草酸含量的NIR光谱定量分析模型。莽草酸含量为6.585%~9.655%，平均8.649%。结果证明PLS-NIR检测莽草酸的定量分析效果良好。范铭然[28]等采用P LS-NIR建立测定八角茴香中莽草酸含量的定量分析模型。此模型稳定性好、精度高，在天然药物有效成分定量分析中有广阔的应用前景。

6 电导抑制离子色谱

朱朝娟[29]建立电导抑制离子色谱法测定八角中莽草酸含量的方法。色谱条件为Metrohm A supp 4(4mm×250mm)型阴离子分析柱，洗液流速0.8mL/min，抑制电流250mA。对样品进行5次进样，测得莽草酸平均含量为5.7%，莽草酸质量浓度与峰面积有良好线性关系(r=0.9993)。相对标准偏差1.04%，保留时间的相对标准偏差为0.47%，回收率为97.3%～98.9%。此实验回收率好，灵敏度高，对测量莽草酸方法有推动作用。

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