亚硒酸钠、维生素E对被动吸烟大鼠肺部炎症和抗氧化能力的影响

郭 媛，李 艳，王丽芳，赵文宇，王凤杰，向万平，陈显兵*

1.湖北民族学院医学院(湖北恩施445000)

2.恩施市中心医院病理科(湖北 恩施445000)

近年来，主动吸烟对机体的影响己得到广泛的重视，而更为隐匿、广泛和严重的被动吸烟的危害性却未得到足够的重视。吸烟者吸烟时摄入大量自由基［1］，烟雾中的一些化学物质在体内也可形成大量的自由基，导致机体抗氧化能力下降。有关自由基在各种疾病发病机制中的作用日益受到重视。为寻找可以减少被动吸烟自由基对机体损伤作用的药物，我们将亚硒酸钠和维生素E用于被动吸烟小鼠，观察其效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 成年SPF级wistar大鼠(由同济医科大学实验动物中心提供)，体质量150～180 g，鼠龄8周。

1.1.2 实验材料 亚硒酸钠购自北京中联试剂公司AR级试剂;维生素E(VitE)胶丸(华北制药集团有限责任公司，100 mg/丸):金龙鱼牌调和油;某品牌香烟，每支含烟气烟碱量1.3mg，焦油14 mg，烟气一氧化碳15mg;自制被动吸烟箱(120cm×45cm×45 cm)。

1.2 方法

1.2.1 分组 将大鼠随机分为5组(每组10只)，A组:正常对照组，常规饲养，不吸烟;B组:常规饲养，每天吸烟3次，不给药;C组:每天吸烟3次，亚硒酸钠灌胃;D组:每天吸烟3次，VitE灌胃;E组:每天吸烟3次，VitE+亚硒酸钠灌胃。

1.2.2 实验给药 除A组不吸入香烟烟雾外，其余组每天吸烟3次，每次30 min，一次点燃4支香烟。实验完后将其放在通风场所。亚硒酸钠用蒸馏水溶解，灌胃0.25mg/(kg·d)。VitE 用调和油溶解，灌胃20mg/(kg·d)，A组、B组、C组每天相同量调和油灌胃。实验第42d所有的大鼠断头处死取血。

1.2.3 支气管肺泡灌洗和洗脱细胞学观察 将大白鼠左肺支气管肺泡进行灌洗，操作如下:在环甲软骨处剪一“V”字型切口，将16号灌胃针插入左主支气管并固定，开胸分离右主支气管并结扎，用预冷无菌生理盐水6ml分3次肺泡灌洗，回收率达85%以上。离心后，用1ml生理盐水稀释后进行细胞计数并分类。

1.2.4 常规组织学观察 取右肺中叶矢状切面，常规制片HE染色，梯度乙醇脱水，组织透明处理，包埋切片，HE染色。

1.2.5 抗氧化指标检测 将所取血液放入带盖的肝素化试管中，立即盖紧。按试剂盒说明书测定活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)各项指标。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，所有数据采用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，各组间比较采用q检验。

2 结果

2.1 亚硒酸钠和VitE对被动吸烟大鼠肺部病理形态学的影响 大鼠被动吸烟6周后，气管、支气管粘膜上皮纤毛紊乱、倒伏，甚至有不同程度的脱落，管壁周围有大量炎症细胞浸润。亚硒酸钠和VitE治疗组上皮细胞脱落、中性粒细胞浸润、单核巨噬细胞浸润、气道炎症较吸烟组有所减轻(见表1，图1)。

表1 各组大鼠气道病理指标比较(n=10，×106/L)

图1 A:正常对照图;B:吸烟组;C:亚硒酸钠和VitE处理组

2.2 大鼠血清中 ROS、SOD、MDA、GSH－PX 含量SOD含量A组与其它4组间比较差异显著 (P＜0.05);ROS、MDA含量B组与其它四组相比有不同程度的升高(P＜0.05);GSH－Px含量C组、E组与B组相比升高(P＜0.05)，与A 组相比，C、D、E组也有升高(P＜0.05)，C组、D组和E组间没有显著差异(P＞0.05)，提示VitE与亚硒酸钠合用没有显著的协同作用。见表2。

表2 各组ROS、MDA、SOD、GSH－PX 含量比较(±s)

表2 各组ROS、MDA、SOD、GSH－PX 含量比较(±s)

注:*P＜0.05，＊＊P＜0.01 VS Group B;#P＜0.05，##P＜0.01 VS Group A

组别 ROS(U/ml) MDA(nmol/mgprot) SOD(U/mgprot) GSH－PX(U/mgprot)A 组 197.37±13.43＊＊ 1.57+0.37* 160.03+13.96 5.26+0.84 B 组 356.64±19.73 2.54+1.07 183.34+16.72# 5.92+1.13 C 组 277.51±11.96＊＊## 1.29+0.98＊＊ 191.86+15.21## 7.14+1.21##*D 组 304.62±18.33＊＊## 1.32+0.67＊＊ 207.43+25.11## 6.57+0.63#E 组 261.34±12.04＊＊## 0.97+0.41＊＊ 206.36+21.37## 7.03+0.87##*

3 讨论

据报道中国居民合并的被动吸烟率高于一些西方国家，如加拿大据估计有25%的不吸烟者在家中、公共场所经常性暴露于“二手烟雾”中［2］，欧盟成员国中约有39%的不吸烟者暴露于“二手烟雾”中［3］。被动吸烟者相对于吸烟者来说，吸入烟草烟雾中有毒有害物质和致癌物质浓度更高。被动吸烟吸入的大量自由基造成机体长期处于过度氧负荷，消耗体内的抗氧化物质和抗氧化酶类，使其耗竭或失代偿。过量自由基及诱发的连锁反应产生更多的自由基，均可造成对生物大分子如DNA、RNA、蛋白质和脂肪的损伤，是恶性肿瘤启动和促进的基础［4］。有关研究表明被动吸烟大鼠肺组织，血清及肺泡灌洗液中NOS的含量增加，诱导大量NO发生从而形成大量自由基，促进炎症产生与发展［5］。

在机体抗氧化体系中硒的作用非常重要［6］。GSH－Px是含硒酶。硒是构成GSH－Px活性的必需成分，可提高机体免疫水平，从而达到抗氧化的目的［7］。我们研究发现实验组ROS、MDA含量明显低于模型组，实验组GSH、SOD的含量高于模型组，说明亚硒酸钠和VitE能提高被动吸烟大鼠的抗氧化能力。肺部炎症细胞实验组较模型组少，说明亚硒酸钠和VitE可缓解被动吸烟肺部炎症。

许多研究显示了亚硒酸钠可以提高机体抗氧化能力［8］。经口给予富硒肝可诱导大鼠产生较多的抗氧化物质GSH、GSH－Px，增强大鼠的抗氧化能力，其作用可达同剂量亚硒酸钠水平［9］。

VitE是重要的脂溶性断链型抗氧化剂，是氧自由基的直接清除剂，并能稳定膜结构，保护膜功能［10］。VitE修饰的透析膜具有抗氧化作用，其可通过减少脂质氧化而降低透析相关性疾病的发生率［11］。长期硒或VitE缺乏，可以使机体的抗氧化能力降低.导致心肌损伤的发生，硒和VitE可提高机体的抗氧化能力，起到保护心肌的作用［12］。当细胞的抗氧化能力被削弱或者氧化损伤的程度提高。氧化损伤对细胞造成的危害将是不可逆转的［13］。补充VitE对提高血清T－AOC活力和降低MDA和ROS含量有显著效果。VitE是存在于细胞膜上的脂溶性抗氧化剂，可有效地捕获和清除自由基，增加机体的抗氧化能力，保护心肌细胞膜免受脂质过氧化的损害［14］。

硒是人体内必须的微量元素，小分子硒化合物(亚硒酸钠)进入机体后，代谢中由mRNA上的三联密码予UGA编码成第21个氨基酸－硒代半胱氨酸掺入蛋白质而发挥其生物功能［15］。正是由于含硒的GSH－Px能催化H2O2还原，使活性氧减少，自由基的产生才不会过量，从而减少或延迟脂褐素的形成，达到抗细胞衰老和死亡的目的。硒元素作为抗氧化物酶GSH－Px的必需成分，它在和VitE同时使用时，具有协同抗氧化作用。在本实验中经VitE、亚硒酸钠饲喂的小鼠可对抗自由基引起的脂质过氧化反应，使血清中SOD、GSH－Px含量增加，清除氧自由的能力加强。

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