乌司他丁和血必净抑制晚期内毒素血症大鼠炎症反应的对比研究

蒋国洪，冯旭明，段 嫄，陈丽芬

1.深圳市宝安区妇幼保健院(广东深圳518133)

2.深圳市宝安区人民医院(广东深圳518133)

乌司他丁(ulinastatin，UTI)与血必净(Xuebijing，XBJ)在临床上常用来治疗炎症反应，UTI在临床治疗炎症反应有一定毒副作用，而TUI作为中成药物临床疗效起效慢，在炎症反应晚期两种药物抑制炎症反应是否有差别是临床关注的话题，本实验就此做相关研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 成年SPF级雄性SD大鼠72只，由广东省医学实验动物中心提供体质量220～250 g，8～10周龄，随机分为内毒素(LPS)组、UTI治疗组和XBJ治疗组，每组24只，先养3d让大鼠适应实验环境，实验前12h禁食，可以自由饮水。

1.2 主要试剂 LPS试剂(美国，Sigma公司);XBJ针(天津红日药业股份有限公司);UTI针(广东天普生化医药股份有限公司);HMGB1试剂(美国，Biosource公司)。

1.3 方法 采用鼠尾静脉注射LPS建立LPS血症大鼠模型［1］;分别用 UTI(20000 U/kg，NS 稀释至 2 ml)［2］、XBJ(4ml/kg，NS 稀释至 2ml)［3］腹腔注射相应组别的大鼠，每天2次，观察大鼠用药后活动、进食、竖毛、眼球凹陷、呼吸抑制等反应，各个时点麻醉后处死大鼠，取心脏血，分离血清，双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清HMGB1的值，并记录大鼠死亡情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差(±s)表示。计量资料服从正态分布及方差齐性，采用方差分析以及重复测量方差分析;多组资料两两比较采用LSD法。

2 结果

2.1 各组大鼠一般观察指标 LPS组大鼠注射LPS后8h精神萎靡，竖毛，不进食，活动减少，体温升高，呼吸急促，对刺激反应差;12 h后，呈嗜睡状，倦怠，卷曲，活动明显减少，多数出现解稀便，至24 h达到高峰;48h后渐恢复活动，少许进食水;72 h后动物的一般情况逐渐改善，活动、进食渐正常。(LPS+UTI)组和(LPS+XBJ)组大鼠注射LPS后的一般情况和高峰与LPS组相似，但程度较轻，24h后活动及进食渐恢复，但是(LPS+UTI)组与(LPS+XBJ)组无明显差别。

2.2 HMGB1水平在各组中各时间点的比较 经两两 LSD 比较，LPS组在 8h、24 h、48 h、72 h 时间点分别与乌司他丁、血必净组有差别(P＜0.01或 P＜0.05);UTI组在8h、24h、48h、72h 时间点与 XBJ组无差别(P＞0.05)。见表1。

3 讨论

晚期炎症介质HMGB1在脓毒症的发展、转归及预后方面扮演着重要角色［4］。相对于TNF－α等早期炎症介质而言，HMGB1具有释放晚，维持时间长，对机体炎症反应的发生、发展、转归等均具有调控作用等特点，是脓毒症产生致死效应的关键因子，为脓毒症的治疗提供了宝贵的“时间窗”，可能成为脓毒症治疗的新靶点［5］。HMGB1是脓毒症致死效应中发挥关键作用的细胞因子，促炎作用的关键在于其核内的DNA结合蛋白被活化的巨噬细胞/单核细胞释放到细胞外，从而发挥一系列炎症效应［6］。HMGB1的胞浆、胞外转移是其发挥致死效应的关键，其表达的量与脓毒症严重程度成正比，多与LPS、TNF－α、IL－1β 等刺激有关，也能被坏死细胞直接释放，但凋亡细胞并不直接释放HMGB1［7］。UTI在抑制HMGB1表达、降低脓毒症死亡率等方面有良好效果［8］。

表1 HMGB1水平在各组中各时间点的比较(±s，n=6，μg/L)

表1 HMGB1水平在各组中各时间点的比较(±s，n=6，μg/L)

时间(h)内毒素组 乌司他丁组 血必净组8 13.24±1.17 10.80±1.34 11.80±1.5024 18.08±2.00 13.20±1.28 13.68±1.8348 22.62±1.85 12.00±1.08 12.03±0.8572 26.51±1.31 10.62±1.49 11.31±0.99

(LPS+UTI)组、(LPS+XBJ)组的 HMGB1水平在注射后8、24、48、72h比 LPS组降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明UTI、XBJ治疗可以降低HMGB1水平;(LPS+UTI)组的HMGB1水平在注射后8 h比(LPS+XBJ)组降低更多，差异具有统计学意义(P＜0.05)，但是在注射后 24、48、72 h，差异没有统计学意义(P＞0.05)，说明UTI在晚期抑制LPS血症大鼠的炎症反应并不优于XBJ。

XBJ可拮抗内毒素、保护内皮细胞、减轻脓毒症及多器官功能障碍综合征时的器官损伤［9］，改善患者病死率。XBJ可以通过拮抗炎性介质TNF－α和IL－6有效降低脓毒症患者血清中TNF－α、IL－6的水平，打断炎症激活的恶性循环，抑制过度的炎症反应，减少组织细胞的损害，改善循环和组织灌注，改善脓毒症患者的病情［10］，还能拮抗或抑制心肌抑制物质、血管活性物质等炎性介质释放的功能，是治疗LPS 休克的重要手段［11］。

本研究粗略探讨了乌司他丁与血必净抑制晚期内毒素大鼠炎症反应的疗效，由于实验动物数量有限，观察时间点较少，所得实验数据可能有误差。在后续实验中将增加样本量，改变用药剂量，增加测定值的时间点，以更深入研究两种药品的疗效，为临床用药做好基础理论研究。

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