SLE患者外周血单个核细胞中信号转导子及转录激活因子4 mRNA的表达及其与血清IFN-γ水平之间的相关性

胡秋侠，李博，钟贵芳，何伟珍，孔卫红，黄进贤

（1.深圳市福田区第二人民医院门诊，广东深圳518040；2.深圳市第四人民医院香蜜湖风湿病分院风湿科，广东深圳518040；3.深圳市第四人民医院急诊科，广东深圳518040)

SLE患者外周血单个核细胞中信号转导子及转录激活因子4 mRNA的表达及其与血清IFN-γ水平之间的相关性

胡秋侠1，李博2，钟贵芳3，何伟珍2，孔卫红2，黄进贤2

（1.深圳市福田区第二人民医院门诊，广东深圳518040；2.深圳市第四人民医院香蜜湖风湿病分院风湿科，广东深圳518040；3.深圳市第四人民医院急诊科，广东深圳518040)

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）外周血单个核细胞(PBMC)中信号转导子及转录激活因子4 (STAT4)mRNA表达及其与血清干扰素(IFN-γ)水平之间的相关性。方法用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应法检测60例SLE患者及30例正常对照者PBMC中STAT4 mRNA表达水平，用酶联免疫吸附法检测SLE患者血清中IFN-γ的水平，并分析两者之间的相关性。结果PBMC中STAT4 mRNA表达水平在SLE患者组中要显著高于正常对照组(P＜0.05)，并且在SLE患者病情活动组中显著高于病情非活动组(P＜0.05)。SLE患者血清中IFN-γ水平检测结果为(12.71±5.68)ng/ml，并与患者PBMC中STAT4 mRNA表达呈正相关(r=0.769，P＜0.05)。结论SLE患者PBMC中STAT4 mRNA的表达水平高于正常，并与病情活动性及患者血清中IFN-γ水平相关。

信号转导和转录激活因子4；mRNA表达；γ干扰素

系统性红斑狼疮(SLE)是最常见的自身免疫性疾病之一，临床表现十分复杂。SLE患者最显著的特征之一是血清中存在以抗核抗体(ANA)为代表的多种自身抗体。许多研究结果显示信号转导和转录激活因子4(STAT4)的基因单核苷酸多态性(SNP)在多个种族SLE患者中均为SLE的易感基因，可能与SLE的发病相关[1-6]。但有关STAT4 mRNA表达及其临床意义的研究国内外报道尚不多见。本研究旨在探讨广东省SLE患者PBMC中STAT4 mRNA的表达及其与血清IFN-γ水平之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料所有入选的60例(女50例，男10例)SLE患者均来自本院风湿科2006年9月至2012年5月间的门诊及住院患者，所有患者均符合美国风湿病学会(ACR)1997年修订的SLE分类标准。入选患者的年龄最小为18岁，最大为67岁，中位数为40岁。所有同时合并有类风湿关节炎、系统性硬化症、多发性肌炎及其他弥漫性结缔组织病的患者均被排除。所有同时合并有结节病、移植物抗宿主病、获得性免疫缺陷综合征及淋巴瘤的患者亦被排除。入选的30例正常对照者为在本院体检的正常人，其中女性25例，男性5例，年龄最小为19岁，最大为63岁，中位数为39岁，性别组成与年龄分布与SLE患者组相比差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 STAT4 mRNA表达水平的检测采集以上研究对象EDTA抗凝静脉血12 ml，用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC细胞。总RNA的抽提采用Trizol试剂，操作完全按照其说明。STAT4 mRNA表达水平的检测采用TaqMan实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应试剂盒(美国ABI公司)。引物及TaqMan探针的序列分别如下：正向引物序列为5'-CTACACA TACGCCACCCTGACC-3'，反应体系完全按照试剂盒说明。反应条件如下：60℃逆转录30 min，接着95℃10 min以激活Taq酶，然后95℃20 s、55℃30 s、72℃1 min进行35个循环。

1.2.2 IFN-γ的检测所有受试者均晨起空腹采集静脉血3 ml，离心10 min，分离出血清分装于EP管，置于-20℃冰箱保存待测。IFN-γ的检测采用酶联免疫吸附(ELISA)法，试剂盒购自美国R&D公司，检测时严格按试剂盒说明书操作。

1.2.3 SLE临床资料的收集记录入选SLE患者的临床及辅助检查资料。患者的实验室检查主要包括全血细胞计数、尿常规、肾功能、肝功能、红细胞沉降率(ESR)、ANA(间接免疫荧光法)抗心磷脂抗体(aCL)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗ds-DNA抗体及抗ENA抗体等。其中aCL、ANCA、抗anti-dsDNA抗体及抗ENA抗体的检测使用ELISA法。类风湿因子(RF)、血清补体(C3、C4)及免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)的检测使用免疫比浊法，SLE患者的病情活动性采用SLEDAI进行评分，SLEDAI评分＞9定义为病情活动。

1.3 统计学方法采用SPSS18.0统计软件进行统计分析。两组间计量资料的比较采用独立t检验，组间率的比较采用χ2检验，相关分析采用Spearman's相关分析法，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 SLE患者与正常对照者PBMC中STAT4 mRNA表达水平的比较SLE患者与正常对照者PBMC中STAT4 mRNA表达水平的检测结果详见表1。统计分析后显示PBMC中STAT4 mRNA表达水平在SLE患者组中要显著高于正常对照组(P＜0.05)，并且在SLE患者病情活动组中显著高于病情非活动组(P＜0.05)。

表1 SLE患者与正常对照者PBMC中STAT4 mRNA的表达水平

表1 SLE患者与正常对照者PBMC中STAT4 mRNA的表达水平

注：aSLE患者组与正常对照者组比较，b病情活动组与病情非活动组比较。

组别SLE患者病情活动组病情非活动组正常对照者例数60 32 28 30 mRNA表达水平3.475±0.526 4.918±0.932 3.132±0.263 1.613±0.276 t值1.782 1.817 P值0.000a0.001b

2.2 SLE患者PBMC中STAT4 mRNA表达与患者血清IFN-γ水平之间的相关性SLE患者血清中IFN-γ水平检测结果为(12.71±5.68)ng/ml，相关分析后发现SLE患者血清IFN-γ水平与患者PBMC中STAT4 mRNA表达呈正相关(r=0.769，P＜0.05)。

3 讨论

STAT4属于STAT转录因子家族中的一员，主要表达在细胞的胞浆，可以调节基因的转录与表达。STAT4基因位于人染色体2q32.2-2q32.3，以前的研究结果提示该区域的临近区域2q33与SLE发病连锁[7]。Remmers等[1]报道发现STAT4基因rs7574865位点的SNP与北美类风湿关节炎及SLE患者的发病相关。Kobayashi等[2]在日本患者中、Palomino-Morales等[3]在哥伦比亚患者中及Yang等[4]在中国香港SLE患者中分别对以上研究结果进行了证实。Namjou等[5]后来在不同种族SLE患者中研究发现包括rs7574865位点在内的多个STAT4基因位点的SNP与SLE发病相关。Hellquist等[6]在芬兰患者中还报道发现STAT4基因rs7582694位点及rs10181656的SNP和正常人相比存在异常。还有两个不同的研究显示特定的STAT4基因型与SLE的某些临床表现相关，例如抗ds-DNA抗体、抗心磷脂抗体的产生、缺血性股骨头坏死及其他一些较严重的临床表现[8-9]。柏素云等[10]报道发现STAT4基因rs7574865位点的SNP与山东汉族SLE特定的临床表现相关，以上研究结果已经提示STAT4基因可能是SLE的易感基因，与SLE的发病相关。

已有的有关STAT4与SLE的研究大多集中在STAT4基因多态性与表达在SLE中存在异常，有关STST4引起SLE发病的可能具体机制尚未见有研究报道。既往的动物试验研究发现STAT4基因敲除小鼠缺乏许多IL-12诱导的免疫反应，包括IFN-γ的产生及Th1细胞的分化，致使形成Th2优势[11]。另外，众所周知，Th1/Th2失衡是SLE的一个显著特征，这种失衡是否与患者体内STAT4的表达存在关系，目前亦不明确。本研究在国内外率先进行了这方面的研究，对中国大陆SLE患者PBMC中STAT4 mRNA表达及患者血清中IFN-γ水平进行了检测，结果发现PBMC中STAT4 mRNA表达水平在SLE患者组中要显著高于正常对照组(P＜0.05)，并且在SLE患者病情活动组中显著高于病情非活动组(P＜0.05)。SLE患者血清中IFN-γ水平检测结果为(12.71±5.68)ng/ml，并与患者PBMC中STAT4 mRNA表达呈正相关(r=0.769，P＜0.05)。迄今为止，国内外尚未见其他有关类似的研究报道。

综上所述，广东省SLE患者PBMC中STAT4 mRNA的表达水平增高，并与病情活动性及患者血清中IFN-γ水平相关，提示STAT4参与SLE发病的可能机制，但此结果尚待进一步的研究证实。

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Correlation of mRNA level of STAT4 in peripheral blood mononuclear cells with IFN-γ level in serum in patients with systemic lupus erythematosus

HU Qiu-xia1,LI Bo2,ZHONG Gui-fang3,HE Wei-zhen2,KONG

Wei-hong2,HUANG Jin-xian2.1.Department of Emergency,Shenzhen Futian TCM Hospital,Shenzhen 518040, Guangdong,CHINA;2.Department of Rheumatology,Xiangmihu Branch of Shenzhen Fourth People's Hospital,Shenzhen 518040,Guangdong,CHINA;3.Department of Emengency,Shenzhen Fourth People's Hospital,Shenzhen 518040, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the correlation of mRNA level of STAT4 in peripheral blood mononuclear cells(PBMC)with IFN-γ level in serum in patients with systemic lupus erythematosus(SLE).MethodsPeripheral blood samples from patients with SLE(n=60,the study group)and healthy individuals(n=30,the control group)wereused to detect STAT4 mRNA level by TaqMan real-time RT-PCR and to evaluate IFN-γ level in serum by ELISA methods.ResultsThe STAT4 mRNA level was significantly higher in the study group than the control group,and was also significantly higher in active SLE patients than in non-active SLE patients(P＜0.05).The IFN-γ level in serum was(12.71±5.68),and was positively associated with STAT4 mRNA level(r=0.769,P＜0.05).ConclusionA significant correlation is found between mRNA level of STAT4 in PBMC and the disease activity or IFN-γ level in serum in patients with SLE.

Signal transducer and activator of transcription 4;mRNAexpression;IFN-γ

R593.24+1

A

1003—6350（2013）05—0627—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.05.0271

2012-10-29)

深圳市医学重点学科建设经费资助项目（编号：2005C10）；深圳市科技计划项目（医疗卫生类）（编号：201002145）

李博。E-mail：genefan@163.com