IL-6、IL-18和TPO等指标对预测脓毒症预后的意义

黄 慧傅应云齐 晖

（1 深圳市人民医院 暨南大学第二附属医院呼吸科，广东 深圳 518000；2 深圳市人民医院 暨南大学第二附属医院临床医学中心，广东 深圳 518000）

IL-6、IL-18和TPO等指标对预测脓毒症预后的意义

黄 慧1傅应云1齐 晖2

（1 深圳市人民医院 暨南大学第二附属医院呼吸科，广东 深圳 518000；2 深圳市人民医院 暨南大学第二附属医院临床医学中心，广东 深圳 518000）

目的 脓毒症是指感染引起的全身炎性反应综合征，可发展为脓毒性休克和多器官功能衰竭。通过测定和比较脓毒症存活和死亡患者血清中炎性细胞因子的浓度，探讨简单、准确的无创伤性指标，准确地预测病情发展。方法 分别通过流式细胞仪测定法和ELISA法测定脓毒症患者血中FITC-CD14阳性细胞比率、IL-6、IL-18、PLT和TPO等指标，记录患者的预后。结果 脓毒症死亡组的FITC-CD14阳性细胞（%）显着高于存活组（44.19±2.59 vs 33.71±8.54，P＜0.01），存活组也显着高于正常对照组（33.71±8.54 vs 16.27±2.25，P＜0.01）。死亡组的IL-6明显高于对照组（25.65±3.34 vs 17.3±4.05，P＜0.01），存活组高于对照组（24.78±6.01 vs 17.3±4.05，P＜0.01），但死亡组与存活组之间无显着差异（P=0.68）。脓毒症患者IL-18浓度显着高于正常对照组，并且死亡组与存活组之间的差异也有统计学意义。脓毒症患者PLT低于对照组，TPO显着高于对照组，死亡组与存活组之间的PLT差异无统计学意义，而TPO则存在显着差异。结论 脓毒症是全身炎性反应综合征的晚期失代偿表现，常导致脓毒性休克和多器官功能衰竭，病死率很高。测定脓毒症患者血中FITC-CD14阳性细胞、IL-18和TPO等指标可以早期、准确地进行预后判断，有助于建立正确的治疗目标。

FITC-CD14细胞；IL-6；IL-18；TPO；脓毒症；预后

脓毒症是指感染引起的全身炎性反应综合征，积极探讨与脓毒症预后有关的因素，将有利于防止脓毒症患者病情进一步恶化和改善患者预后[1]。本研究主要通过测定和比较脓毒症存活和死亡患者血清中炎性细胞因子的浓度，探讨简单、准确的无创伤性指标，客观地判断患者病情的严重程度，准确地对病情发展进行预测，为医生制定正确的治疗方案，改善医患沟通，减轻患者痛苦提供依据。

1 资料与方法

1.1 病例的选择

入选标准：参照2003年美国胸科医师学会和危重病医学会制定的脓毒症诊断和分级标准[2]：有原发感染病灶或菌血症，同时具备下列4项中的2项：①体温＞39℃或＜36℃；②心率＞120次/分；③呼吸频率＞28次/分或二氧化碳分压＜32mmHg；④白细胞计数＞12×109/L或＜4.0×109/L，其中中性粒细胞＞0.80，未成熟粒细胞＞0.10。排除标准：同时存在自身免疫性疾病、肿瘤或正在使用免疫抑制剂者。对入选病例进行急性生理学与慢性健康状况评分（APACHEII评分）。抽取静脉血15mL。其中5mL用于FITC-CD14阳性细胞数的测定，10mL用于白细胞介素6 （IL-6）、白细胞介素18 （IL-18）和血小板生成素（TPO）的测定。记录患者在30d内是否死亡。对照组为同期在我院进行健康检查的正常成年人。

1.2 实验试剂和仪器设备

FITC-CD14荧光标记抗体为Biolegend公司生产，溶血剂由Immunoprobe公司提供，牛血清白蛋白由Amresco公司提供，IL-6、IL-18和TPO的ELISA试剂盒分别由深圳晶美公司、Bender公司和R&D公司生产，流式细胞仪为Coulter公司生产。

1.3 测定方法

1.3.1 FITC-CD14阳性细胞数的测定

①分离细胞：取抗凝全血150 μL，用溶血剂2 mL溶血，充分混匀，室温下避光10 min后以1100 r/min离心5 min，弃去上清。加2 mL PBS洗涤沉淀细胞后以1100 r/min离心5 min。弃去上清，加入200 μL PBS悬浮沉淀细胞。将上述细胞悬液20 μL用PBS稀释10倍后，用细胞计数板计算细胞浓度。②荧光标记：将流式细胞测试管分为对照管和样品管，分别加入1.2×105个细胞，再加入牛血清白蛋白，37.5℃孵育30min，加入PBS冲洗未结合的蛋白，以1100 r/min离心5 min。弃去上清，加入荧光标记抗体，对照管内加入等量PBS。在室温下孵育20 min。然后两管均加入2 mL PBS 1100 r/min离心5 min。弃上清，再次加入牛血清白蛋白结合，再用PBS冲洗，弃上清后，加1%多聚甲醛200 μL固定细胞。③流式细胞仪测定：用白细胞设门，共分析25000个细胞，测定FITC-CD4阳性细胞数。

1.3.2 IL-6、IL-18和TOP的测定

将10mL静脉血在室温下放置30min，然后低温3000 r/min离心10 min，分离血清，贮存于-80℃冰箱。用相应的ELISA试剂盒按照说明书的具体步骤进行测定。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0软件进行数据处理和统计学分析，各组数据以均数±标准差（）表示，对各组数据进行单因素方差分析，P＜0.05视为差异有统计学意义。

2 研究结果

2.1 病例资料

收集我院2009年3月至2012年12月外科ICU和呼吸ICU的脓毒症病例共87例，其中17例因存在排除标准规定的情况而排除在研究病例之外。共70例脓毒症患者进入研究范围，其中男39例，女31例，年龄22～74岁，平均（50.6±8.9岁）。对照组为20例，其中男14例，女6例，年龄21～65岁，平均（45.9±9.7岁）。

2.2 脓毒症组和对照组的血清FITC-CD14阳性细胞数、IL-6、IL-18、PLT和TPO水平，见表1。

3 讨 论

脓毒症是多种疾病在发生发展过程中表现出来的一种病理生理过程，主要由感染性因素引起，如革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌、病毒等病原体入侵所致。这些感染因素迅速激活机体非特异性免疫系统释放大量促炎性细胞因子，进一步诱发失控性炎性反应，即全身炎性反应综合征[3]。

CD14作为内毒素诱发疾病过程中的重要受体，是体内增敏内毒素细胞效应的主要系统之一[4]，属细胞表面糖蛋白家族成员之一。国外研究表明CD14是重要的脂多糖受体，识别、结合LPS或LPS/LBP复合物，介导LPS所致的细胞反应，使内毒素的生物活性提高数百倍甚至数千倍，在炎性反应、脓毒症等病理反应中起重要作用[5]。方文慧等发现组织CD14表达上调可能增强内毒素刺激局部组织合成、产生TNF-α效应[6]。本研究发现脓毒症死亡组的FITC-CD14阳性细胞（%）显着高于存活组（44.19±2.59 vs 33.71±8.54，P＜0.01），存活组也显着高于正常对照组（33.71±8.54 vs 16.27±2.25，P＜0.01），与文献报道的一致。该结果提示如果能够完全封闭CD14的功能，就可以防止LPS介导的炎性反应，对临床治疗内毒素血症将有重要意义。

表1 三组患者血清FITC-CD14阳性细胞数、IL-6、IL-18、PLT和TPO水平

IL-6能诱导T、B淋巴细胞分化，刺激肝细胞合成急性期反应蛋白，催化和放大炎性反应和毒性作用，造成组织细胞的损害，反应疾病的严重程度[7]。本研究发现死亡组的IL-6明显高于对照组（25.65±3.34 vs 17.3±4.05，P＜0.01），存活组高于对照组（24.78 ±6.01 vs 17.3±4.05，P＜0.01），但死亡组与存活组之间无显着差异（P=0.68），可能提示IL-6的浓度与脓毒症患者的预后无关。这与国外报道的结果[8]不一致，可能与研究对象的数量和测定方法不同有关。IL-18是近年发现的一种前炎症介质，能促进致炎因子的释放，上调细胞间粘附分子（ICAM）的表达。其主要生物学作用是促进细胞因子分泌，诱导Th1细胞和NK细胞产生IFN-γ[9]，促进T细胞增强，加强Fas1介导的细胞毒效应[10]。本研究测定结果提示脓毒症患者IL-18浓度显着高于正常对照组，并且死亡组与存活组之间的差异也有统计学意义，提示IL-18表达的升高可带来负面影响，可能不仅加重疾病和引起组织损害，甚至可能预示死亡。不同预后的脓毒症患者具有不同的IL-18浓度，而IL-6浓度则没有这种显着差异，意味着IL-18比IL-6更能准确地反映脓毒症的预后。

SIRS和脓毒症是严重感染的并发症。脓毒症时循环血内各种毒素和炎性细胞因子循环于全身各个组织器官，其中以骨髓对毒素和炎症介质反应最早，也是最敏感的器官之一，具体表现为例如白细胞增高、血小板减少，严重时全血细胞下降。骨髓穿刺因有创伤性，并且病情危重时骨髓检查操作受限，所以骨穿作为临床监测指标具有局限性，而采血测定则简单方便，所以可作为危重病患者的可靠监测指标。脓毒症患者普遍存在凝血功能紊乱[11]。目前认为血小板减少是ICU患者独立的风险指标之一[12]。本研究死亡组与存活组之间的的血小板计数差异无统计学意义，提示虽然血小板减少可作为独立危险因素预测危重病患者预后，但血小板的动态变化可能具有更准确的预警价值。

TPO是介导血小板产生的最主要的细胞调节因子[13]。其含量主要受血小板与巨核细胞数及血小板与巨核细胞膜表面TPO受体总量的负调控。在本研究中，血小板减少的患者的TPO水平升高，可能与血小板生成减少有关，因此感染、药物因素引起的血小板减少症患者TPO水平变化较大。同时监测脓毒症患者的血小板计数和血清TPO水平有助于区分血小板减少的原因是生成减少或破坏增加[14]。

综上所述，脓毒症是全身炎性反应综合征的晚期失代偿表现，常导致脓毒性休克和多器官功能衰竭，病死率很高。测定脓毒症患者血中FITC-CD14阳性细胞、IL-18和TPO等指标可以早期、准确地进行预后判断，有助于建立正确的治疗目标。

[1] Marshall JC.Such staff as dreams are made on: mediator-directed therapy in sepsis [J].Nature Rev Drug Disc,2003,2(5): 391-405.

[2] Dellinger RP,Carlet M,Masur H.Surviving sepsis campaign guidelines for management of severe sepsis and septic shock[J].Crit Care Med,2004,32(3): 858-873.

[3] 姚咏明,柴家科,林洪远.现代脓毒症理论与实践[M].北京: 科学出版社,2005:155-288.

[4] Kielian TL,Blecha F.CD4 and other recognition molecules for lipopolysacchridea review[J].Immunopharmacology,1995,29(3): 187-205.

[5] Calvano JE,Agnese DM,Um JY,et al.Modulation of the lipopolysaccharide receptor complex (CD14,TLR4,MD-2) and Toll-like receptor 2 in systemic inflammatory response syndrome-positive patients with and without infection: relationship to tolerance[J]. Shock,2003,20(5): 415-419.

[6] 方文慧,姚咏明,施志国,等.烫伤后脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-α基因表达的变化规律[J].中华外科杂志,1999,37(5): 271-273.

[7] Keel M,Birchler M,Wanner A,et al.Predictive role of IL-6 for MODS in severely injured patients in the early intensive care phase [J].Langenbecks Arch Chir Suppl Kongressbd,1998,115: 1086-1087.

[8] The association of interleukin 6 haplotype clades with mortality in critically ill adults[J].Arch Intern Med,2005,165(1): 75-82.

[9] Yoshimoto T,Tsutsui H,Tominaga K.IL-18,although antiallergic when administered with IL-12,stimulates IL-4 and histamine released by basophils [J].Proc.Acad.Sci.USA,1999,96(24): 13962-13966.

[10] Tsutsui H,Matsui K,Kawad N.IL-18 accounts of both TNF-α and Fas ligand meidated hepatotoxic pathways in endotoxin-induced liver injury in mice[J].J Immunol,1997,159(8): 3961-3967.

[11] 王红,张淑文,任爱民,等.重度脓毒症凝血功能紊乱与病情严重度及预后的关系[J].中华急诊医学杂志,2005,14(10): 804-806.

[12] Vanderschueren S,De Weerdt A,Malbrain M,et al.Thrombocytopenia and prognosis in intensive care [J].Crit Care Med,2000,28(6): 1871-1876.

[13] Kaushansky K.Thrombopoietin: the primary regulator of platelet production [J].Blood,1995,86(2): 419.

[14] Sakane Y,Wada H,Kazuyo H,et al.Increased thrombopoietin levels in idiopathic thrombocytopenic purpura patients with a poor response to steroid therapy [J].Blood Coagul Fibrinolysis,1998,9(4): 315.

R631

B

1671-8194（2013）24-0230-02