家兔失血性休克实验技术的探索和改进

王慧雯，干仲元

(上海中医药大学，教学实验中心，机能实验室，上海 201203)

《生理科学综合实验》作为上海中医药大学机能实验教学的一门特色课程，将生理学、病理生理学和药理学这三门学科的实验教学部分有机整合。“家兔失血性休克实验”为本课程的重要组成部分。在日常教学中发现，传统实验方法操作繁琐，学生自行完成该实验较为困难，实验成功率低，教学效果不甚理想。此次课程建设，对“家兔失血性休克”实验技术(包括手术操作、实验装置设计、观察项目等)进行研究与改进，改进后操作难度降低，实验成功率提高，达到更好的教学目的，为学生实验教学创造更好的技术支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 试剂与仪器

1%戊巴比妥钠(戊巴比妥钠干粉剂为德国Fluka公司产品)、肝素生理盐水(肝素钠注射液为上海第一生化药业有限公司产品。)、生理盐水(上海百特医疗用品有限公司)、RM6240BD型多道生理信号采集处理系统、YPJO1型压力换能器(均为四川成都仪器厂产品，中国)、三通输液治理及压力监测旋塞系统(德国B.Braun Melsungen AG公司)。

1.1.2 实验动物

普通级家兔，成年，雄性，体重 2.4～2.6kg，购自上海市松江区车墩实验动物良种场【SCXK(沪)2012—0008】。

1.2 实验方法

“家兔失血性休克实验”采用家兔Wiggers法模拟失血性休克［1］，通过颈动脉插管途径观察和监测家兔心率及血压的变化，观察肠系膜微循环发生瘀阻确定休克发生，颈静脉输血输液路径进行抢救［1-4］。在以往教学中，学生普遍反映独立完成实验存在较大困难，为此我们对参加过《生理科学综合实验》课程的学生发放问卷调查，结果发现72%的学生表示实验操作困难，实验失败率为39.8%。通过统计发现实验失败的问题集中在以下几个方面:1.肝素化后的家兔在手术过程中容易出血不止，放血造模前已经出现休克甚至死亡。2.多处手术操作复杂，耗时较长，家兔术中容易死亡。3.多处插管操作繁复，因此学生在实验过程中易顾此失彼、高度紧张或直接失败，无法有效观察到家兔失血性休克状态下的生理、病理现象，使课程本身失去教学意义。课题组在上述通用实验方法基础上［1-4］，尝试做出以下探索性改进:如表1。

1.3 手术方法改进

1.3.1 实验中通过对三通阀门组的改进，将血压心率监测途径和放血途径合并到股动脉［7］。因股动脉非主动脉，离心脏较远，腹部循环比较丰富，既可顺利造模，同时，若在造模过程中发生放血阀门堵塞需要冲洗，对心脏功能影响也较小。此外，我们还改进了插管结构，详见1.4［3］，这样便可以同时兼顾放血与血压、心率的监测。课题组对两组体重为2.4～2.6kg的雄性家兔，每组6只，分别做颈总动脉插管和股动脉插管，对比在造模和抢救过程中，通过颈总动脉插管途径监测血压、心率与股动脉插管途径监测血压、心率可得:实验中股动脉插管组家兔测得原始血压低于颈动脉插管组，为外周阻力逐渐增大的关系［3］。在失血性休克造模及抢救过程中，颈动脉插管组及股动脉插管组血压曲线相似;实验过程中，颈动脉组插管组家兔及股动脉插管组家兔心率出现都相应病理变化［3，5］。因此，将放血途径和监测途径合并到股动脉，对实验结果影响不大，具有教学意义。并且在上述前提下，达到了简化实验步骤、降低操作难度的目的。

1.3.2 以往教学中对家兔的输血输液经由颈外静脉进行，学生反映实际操作中，分离血管困难，容易将静脉挑断大量出血。课题组考虑到麻醉家兔时经由耳缘静脉注射，家兔耳缘静脉粗大浅表，可以接受大剂量快速注射，拟将颈外静脉输液途径改为耳缘静脉输液途径，在麻醉时采用静脉留置针，将留置针固定在家兔耳部。这样改动后，操作简便，留置针本身带有肝素帽，可避免血液凝固堵塞针头，针头软管设计更易于固定，避免造成静脉损伤影响注射。经过课题组实际操作验证可行。

表1 实验方法Tab.1 Empirical method

图1 前置三通阀控制系统连接简图Fig.1 prepositive stopcocks system

1.4 实验装置改进

以往实验中，家兔一般事先肝素化，剂量为4000 U/(kg·bw)［2，4，10］(U 为效价单位)，家兔肝素化后手术容易在手术过程中大量失血，导致在造模前家兔已经休克甚至死亡。课题组尝试家兔不术前肝素化手术，发现家兔失血确实减少，但造模过程中，三通阀门放血后堵塞的概率很高，因此，我们将肝素注射时间改为手术完成后，放血造模前，调整肝素注射剂量为原来的1/3用以抗凝(实验中使用的肝素生理盐水浓度为:1000 U/mL［7-9］)。此外，原有插管装置的三通阀为后置，与换能器直接连接，插管长度超过30 cm，直接对颈总动脉插管进行冲洗损伤心脏功能，于是我们在将插管途径合并到股动脉后，对三通阀门的结构进行了调整，从一组三通阀门控制变成多组三通阀组成一个控制系统，且将三通阀门组前置缩短插管到放血阀门的距离为10 cm以内，如图1:从阀门1放血，如果出现凝血则从阀门2注入肝素生理盐水冲洗，将插管到放血阀门一路的血液冲洗稀释，由于缩短放血距离，在冲洗插管时，只需少量注入肝素生理盐水，对股动脉功能的影响也尽量降低，经实验验证可行。

2 结语

本次“家兔失血性休克”实验技术改进后投入教学，2010～2012学年参与“生理综合性实验”的共两批学生，课题组于课后进行问卷调查，结果反映实验改进后，认为操作困难的学生比例由原来的72%下降至31%，实验失败率下降为12%。课题组对“家兔失血性休克”实验进行的一系列技术改进，实验结果有效、实验操作难度降低、实验成功率显著提高。同时由于时间和经验所限，此课程改进也仍然存在一些不足，比如:1.家兔肠系膜微循环的观察，作为示教，应该清晰明了，可反复观察更佳。目前我们考虑与信息教学相结合，借助虚拟实验室或者视频同步教学，拟在下一期课程建设中进一步实践，达到最佳教学效果。2.在本次课程建设项目中，对实验观察项目的选取比较典型，可以扩大观察范围，如监测尿量及测定血红蛋白等，或可实验不同的抢救方案并观察效果，提升教学意义。

［1］裘法祖，陈孝平.《外科常用实验方法及动物模型的建立》［M］.北京:人民卫生出版社，2003年8月:97-99.

［2］陆源，夏强.《生理科学实验教程》［M］.浙江:浙江大学出版社，2004年8月:270-274.

［3］张志雄.《生理学》［M］.上海:上海科学技术出版社，2012年1月:102-117.

［4］龚永生，陈醒言.《医学机能实验学》［M］.北京:高等教育出版社，2012年1月:112-113.

［5］李桂源.《病理生理学》(第2版)［M］.北京:人民卫生出版社，2011年6月:262-288.

［6］刘晓琳，张腾，王陛可.休克指数在失血性休克中的监测意义［J］.数理医药学杂志，2011，24(3):290-291.

［7］姚奇，倪秀雄，卓若.关于家兔失血性休克实验课的教学体会［J］.山西医科大学学报，2006，8(6):631-632.

［8］张建青，李墨林.医学机能实验中失血性休克实验的教学体会［B］.大连医科大学学报，2006，28(1):79.

［9］王建荣，苏荣，刘秀华等.复苏液体温度对失血性休克兔微循环的影响［J］.微循环学杂志，2004，14(4):18-20.

［10］陈小琳，杨皓庄，王达安等.发热的动物模型复制方法的改进:制备EP冷贮温度的新选择［J］.中国病理生理杂志，1999，15(3):285-286，288.