β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条的质量测试研究

万宇平 ，唐承明 ，罗晓琴 ，冯才伟 ，崔艳莉

（1.北京勤邦生物技术有限公司，北京 102206；2.广西壮族自治区兽药监察所，广西 南宁 530000）

β-内酰胺类抗生素（β-lactams）是化学结构中具有β-内酰胺环的一大类抗生素，包括临床最常用的青霉素与头孢菌素，以及新发展的头霉素类、硫霉素类、单环β-内酰胺类等其他非典型β-内酰胺类抗生素。此类抗生素具有杀菌活性强、毒副作用小等特点。

长期以来，β-内酰胺类抗生素被广泛地应用于人和动物疾病的防治，尤其是在治疗牛乳房炎方面具有显著疗效。但抗生素通过乳牛机体的血液在一定时间内残留于生牛奶中，如果不正当使用或者没有遵守奶牛停药期规定，将会造成抗生素在乳制品中的残留，如若经常饮用含有抗生素残留的牛奶，相当于长期间接地吸收低剂量的抗生素，致使人体内病原菌对多种抗生素产生耐药性，从而造成免疫力降低。

因此，我们有必要建立一类准确、快速、简便的β-内酰胺类抗生素检测方法，以保障人类健康和维护正常的进出口贸易。由于试纸条法具有灵敏度高、检测时间短、准确度高、易贮存、携带方便、可进行现场操作等特点，因而成为牛奶中违禁抗生素筛查时的首选产品。本文主要研究了β-内酰胺类抗生素中常见的几种药物如青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、苯唑青霉素、邻青霉素、双青霉素、萘夫西林、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻呋、头孢洛宁和头孢喹肟的试纸条分析检测。

1 材料与方法

1.1 试验材料 牛奶样品购自市场；β-内酰胺类各种抗生素标准品购自美国Sigma公司；β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条购自北京某生物技术有限公司；微量移液器购自美国Thermo公司。

1.2 试验方法

1.2.1 试样制备 阴性牛奶样品：取空白牛奶样品任1份5mL，置于50mL塑料瓶中，再分别加入适量β-内酰胺类各种抗生素标准品，配制浓度分别为0和β-内酰胺类试纸条检测限下限的1/2，混匀备用，现配现用。

阳性牛奶样品：取空白牛奶样品任1份5mL，置于50mL塑料瓶中，再分别加入适量β-内酰胺类各种抗生素标准品，配制浓度分别为β-内酰胺类试纸条检测限下限和检测限下限的2倍，混匀备用，现配现用。

1.2.2 试纸条的使用步骤 用微量移液器吸取200μL待检牛奶样品溶液于微孔中，缓慢抽吸且充分与微孔中的试剂混匀。将试纸条插入微孔中（印有“MAX”线的一端朝下），充分浸入溶液中。室温（20～25℃）孵育5 min后，取出试纸条观察颜色，判定结果。

1.2.3 结果判定 如果C线和T线都显色，无论颜色深浅，均表示牛奶样品中β-内酰胺类抗生素浓度低于检测限，为阴性结果；如果C线显色，T线不显色，表示牛奶样品中β-内酰胺类抗生素浓度高于检测限，为阳性结果；如果未出现C线，表明操作过程不正确或试纸条已变质失效（如图1）。

图1 β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条示意图

1.2.4 检测阈值的测定 用β-内酰胺类试纸条分别对添加各种抗生素的阴性牛奶、阳性牛奶进行检测，每个样品作2个重复，记录每种抗生素呈现阳性的最低浓度值。如果检测限下限浓度的阳性牛奶样品不呈现阳性则根据检测限（检测限有下限和上限的，则在检测限内选择更高的浓度进行检测）配制浓度更高的阳性牛奶样品进行检测，直至出现阳性结果为止。

1.2.5 假阳性率的测定 取空白牛奶样品50份，每份10 mL，按照1.2.1阴性牛奶样品的制备方法，制备B1 B2、B3、……、B50等100份阴性牛奶样品。对阴性牛奶样品用试纸条检测，每个样品作2个重复，统计假阳性数，按照下面的公式计算假阳性率。

1.2.6 假阴性率的测定 取空白牛奶样品50份，每份10 mL，按照1.2.1阳性牛奶样品的制备方法，制备B1 B2、B3、……、B50等100份阳性牛奶样品。对阳性牛奶样品用试纸条检测，每个样品作2个重复，统计假阴性数，按照下面的公式计算假阴性率。

2 结果

用β-内酰胺类试纸条对该类12种抗生素进行了检测限、假阳性率、假阴性率验证，结果如表1所示。

表1 试纸条检测结果

3 讨论

3.1 本试验的检测阈值基本在检测限范围内，因此可以判定，试纸条检测限指标合格。同时由于每一批次抗体存在质量上的差异，所以在制定检测限时，采用了以一个浓度范围作为检测限的方式。

3.2 检测限即试纸条对样品所能检测出来的最低浓度值。当检测阈值与试纸条标示的检测限相符时，该试纸条为合格；当其小于检测限时，则会导致假阳性检测结果的出现；当其大于检测限时，则会导致假阴性检测结果的出现。目前，国内外对于快速检测技术的一个基本原则是：绝不能有假阴性，但允许有假阳性。按照农业部兽药残留专家委员会“试剂盒备案参考评判标准”，快速检测试纸条的假阳性率应小于10%

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