明目地黄丸对白内障大鼠晶状体内SOD、MDA影响的实验研究*

许丽娟，倪学霞

（张家口市第四医院药剂科，张家口 075000）

白内障在各种致盲因素中占27%，为次于年龄相关性黄斑变性的第二大致盲原因[1]；氧化应力学说为目前白内障发病机制的重要学说之一[2]。本文研究了明目地黄丸对白内障模型大鼠晶状体内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响，为发展治疗白内障的中药提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器 亚硒酸钠结晶体（Na2SeO3·5H2O）日本参天公司，明目地黄丸（北京勃然制药有限公司），MDA、SOD及考马斯亮蓝试剂盒（南京建成生物工程研究所）。UV－2100双光束紫外—可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器集团公司），微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）。FSLM－4型裂缝灯显微镜（深圳拓天仪器设备有限公司）。

1.1.2 动物 健康纯系Wistar大鼠乳鼠50只，雌雄兼用，鼠龄均为10 d，体质量14～16 g，由河北北方学院实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 实验分组与模型制备 采用随机数字表法将Wistar大鼠乳鼠随机分为5组，每组各10只，即对照组10只、模型组10只、明目地黄丸高（1500mg/kg）、中（1000 mg/kg）、低（500 mg/kg）剂量组各 10只。各组乳鼠年龄均为10 d，体质量14～16 g，以母乳及普通颗粒饲料分笼喂养，自由饮水。给模型组、明目地黄丸组大鼠颈背部皮下注射亚硒酸钠溶液（3.46 mg/kg），隔日1次，连续3次[3]。对照组大鼠颈背部皮下注射等量生理盐水。末次给药后第3天用裂隙灯显微镜观察大鼠晶状体变化，晶状体混浊为造模成功。

1.2.2 混悬液的配制及给药 将明目地黄丸研碎后用蒸馏水配成不同质量浓度的混悬液。分别装于玻璃瓶中，密封，置4℃冰箱保存备用。明目地黄丸高、中、低剂量组分别灌胃给予明目地黄丸混悬液，灌胃量均为10 mL/kg体质量，每日1次，持续30 d，对照组与模型组大鼠灌胃给予等量生理盐水。

1.2.3 晶状体检查与分级 末次给药后，用复方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙灯显微镜检查各组大鼠晶状体，混浊程度按下列标准分级[4]：1）无混浊，晶状体透明。2）轻度混浊，只在赤道部有空泡。3）中度混浊，空泡扩展到中央。4）重度混浊，中央呈现白内障。

1.2.4 晶状体SOD活性与MDA含量测定 末次给药后12 h，断头处死各组大鼠，立即取出双侧眼球。将眼球用0～4℃生理盐水冲洗3次后，剥离晶状体，用滤纸吸干，放在电子天平上称质量，并记录。将双侧晶状体放入5 mL匀浆杯内，加入适量0～4℃生理盐水，用控温多用高速组织捣碎机捣碎（10000 r/min，1.5 min），制成 3.5%晶状体匀浆。将匀浆以2000 r/min低速离心8 min后，取上清液。用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，用硫代巴比妥酸法测定MDA含量，用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。具体步骤按南京建成生物工程研究所生产的试剂盒说明书进行[5-8]。

1.2.5 统计学处理 采用SPSS18.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，正态分布计量资料的组间比较采用单因素方差分析，偏态分布的计量资料组间比较采用秩和检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验大鼠晶状体混浊分级情况 晶状体混浊分级情况见表1。

表1 各组大鼠晶状体混浊情况Tab.1 Opacity of the lens in rats例

2.2 实验大鼠晶状体SOD活性和MDA含量的影响 模型组大鼠晶状体SOD活性显著低于对照组，MDA含量显著高于对照组。明目地黄丸高、中剂量组的SOD活性均高于模型组，而MDA含量均低于模型组，其差异均有统计学意义，表明明目地黄丸能提高白内障大鼠的抗氧化能力。见表2。

表2 各组大鼠晶状体SOD活性和MDA含量的比较（±s）Tab.2 Activity of SOD and the content of MDA of lens in rats（±s）

表2 各组大鼠晶状体SOD活性和MDA含量的比较（±s）Tab.2 Activity of SOD and the content of MDA of lens in rats（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05

组别 n MDA(U/mgprot) SOD(nmol/mgprot)对照组 10 0.32±0.28 36.77±4.01模型组 10 1.42±0.55* 26.08±3.75*明目地黄丸低剂量组 10 1.33±0.34 28.11±3.98明目地黄丸中剂量组 10 0.94±0.22▲ 32.21±3.24▲明目地黄丸高剂量组 10 0.72±0.26▲ 34.78±2.55▲

3 讨论

明目地黄丸方是由六味地黄丸加味而来，即杞菊地黄丸加当归、白芍以补血，再配以明目退翳之白蒺藜和石决明，故其功用是滋肾养肝明目，适用于肝肾阴虚而至目涩畏光、视物模糊、迎风流泪，即凡由肝肾阴虚而引起的内障眼病皆可用之，全身无证可辨之瞳神疾患亦可服之，“盖遵五轮之瞳神属肾耳”[9]。

SOD及MDA反映眼内抗自由基氧化能力及脂质过氧化的过程。为此，笔者检测了各组实验大鼠晶状体SOD活性和MDA含量。结果表明明目地黄丸中、高剂量组大鼠晶状体内SOD活性显著高于模型组，而MDA含量显著低于模型组，这与文献报道，活性氧自由基是导致白内障的重要原因，抗氧化剂可有效地防治白内障一致[10]。

实验结果提示明目地黄丸对白内障有一定的治疗作用，其机制可能是通过提高晶状体抗氧化能力，降低脂质过氧化来实现的；或者是其多种作用机制之一。由于明目地黄丸为复方制剂，成分较为复杂，其确切作用机制尚有待进一步研究。

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