1202例疑似生殖器疱疹患者HSV 基因检测结果分析

杨勇孙伟吴保华★

•论 著•

1202例疑似生殖器疱疹患者HSV 基因检测结果分析

杨勇1孙伟2吴保华1★

目的了解广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒（HSV）感染情况。方法用PCR-荧光探针法（FQ-PCR）对我院门诊1202例疑似生殖器疱疹患者进行HSV-I/II基因检测。结果在1202例生殖器疱疹疑似患者中，检测出HSV-I型阳性患者8例，阳性率为0.67%（8/1202）；HSVII型阳性患者282例，阳性率为23.46%（282/1202），总计单纯疱疹病毒阳性患者290例，阳性率24.13%（290/1202）。HSV-I型感染率与HSV-II型感染率比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。290例单纯疱疹病毒感染患者中男性患者193例，阳性率24.62%（193/748），女性患者97例，阳性率23.21%（97/418），男性与女性的感染率比较，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结论① 广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者HSV检出率较高近1/4，感染率有型别差异，以HSV-II型为主，提示临床需重视对疑似生殖器疱疹病毒患者进行HSV检测，避免误诊漏诊。② HSV感染率无性别差异。③ FQ-PCR在HSV检测中具有简便、灵敏度高、快捷等特点，具有良好的推广、应用前景。

生殖器疱疹；单纯疱疹病毒；荧光定量PCR

生殖器疱疹（genital herpes，GH）是由单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）感染泌尿道生殖器及肛周部位皮肤黏膜引起的一种慢性、复发性、难治愈的性传播疾病。流行病学研究发现[1]，生殖器疱疹是常见的性传播疾病之一，其发病率可达到所有性病的30%。生殖器疱疹的发病率在全球范围内不断增长，逐渐成为一个令人关注的公共卫生问题，且随着社会的发展，其发病率亦随之增高，部分省市的生殖器疱疹甚至较梅毒更多见[2]。尤为严重的是生殖器疱疹增加了人类免疫缺陷病毒/获得性免疫缺陷综合征（Human Immunode fi ciency Virus/Acquired Immunode fi ciency Syndrome，HIV/AIDS）感染的危险性，是引起HIV传播的独立危险因素。生殖器疱疹所致的生殖器溃疡显著增加梅毒（syphilis）及HIV的传播[3]。此外，还发现生殖器疱疹患者与人类乳头瘤病毒、念珠菌、杜克雷嗜血杆菌感染有关系[4]，不仅给患者带来反复难愈的生殖器部位皮肤黏膜损害，而且会给患者带来缠绕不去的道德失落和性精神压力[5]。因此早期正确诊断及治疗生殖器疱疹，降低其传染性及危害性具有十分重要的意义。为了解广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒的感染情况，本文对2010年1月1日～2012年12月30日，我院皮肤性病科门诊及妇科门诊1202例生殖器疱疹疑似患者进行HSV-I及HSV-II基因检测，并对其结果进行分析。

1 资料与方法

1.1 标本来源

2010年1月1日～2012年12月30日期间在我院皮肤性病科门诊及妇科门诊就诊疑有生殖器疱疹感染的患者共1202例。其中男性784例，女性418例，年龄结构：小于20岁120例、20～60岁1032例、60岁以上50例。

患者入选条件：（1）有不洁性行为史或其配偶确诊HSV感染。（2）有典型生殖器疱疹或高度可疑生殖器疱疹皮疹，如泌尿生殖器及肛周部位皮肤黏膜红斑基础上，簇集或散在分布的水疱。（3）无典型生殖器疱疹皮疹，但男女在生殖器部位出现细小裂隙、红肿渗液、溃疡糜烂面等；男性有尿道痛、刺痒、不适感，有少量尿道分泌物，尿道口发红等症状，女性患者有阴道分泌物增多、出现伴有疱疹样改变的宫颈糜烂等症状和体症。患者排除条件：既往在我院或其他医院确诊为生殖器疱疹的患者。

1.2 取材方法

用无菌棉拭子沾取疱液或渗出液，溃疡取溃疡物和渗出液，结痂取痂皮，丘疹红斑用棉拭子刮取组织渗出液，将棉拭子置于无菌管，密闭送检。宫颈标本的取材：先用无菌棉拭子清除宮颈表面的分泌物，然后再用另一灭菌拭子伸入宫颈管内2 cm，留置10 s左右，轻轻旋转取出，将取材棉拭子置于无菌管，密闭送检。标本一经采集立即送检，当天不能检测的标本置于-20℃保存，以待下次检测。

1.3 仪器与试剂

使用仪器为DA7600基因扩增仪，其与试剂盒、质控品均购于中山大学达安基因股份有限公司。

1.4 DNA提取及检测方法

向无菌管中加入1 mL灭菌生理盐水，充分震荡摇匀，挤干棉拭子；吸取全部液体转至1.5 mL离心管中，12 000 rpm离心5 min；去上清，沉淀加灭菌生理盐水1 mL混匀，12 000 rpm离心5 min；去上清，沉淀中加入50 μL DNA提取液充分混匀，100℃恒温处理10±1 min；12 000 rpm离心5 min，取上清液2 μL作PCR反应。HSV-DNA定量检测采用荧光定量聚合酶链反应（PCR-荧光探针法），试剂盒检测的灵敏度为5.0×102基因拷贝，线性范围5.0×102～5.0×106基因拷贝。严格按照说明书进行操作。

1.5 统计学处理

应用SPSS 13.0软件包进行数据的统计分析，计数资料以百分比表示，进行χ2检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 1202例疑似患者HSV检测结果

1202例疑似生殖器疱疹患者中，检出HSV-I型阳性8例，阳性率0.67%（8/1202）；HSV-II型阳性282例，阳性率23.46%（282/1202）。单纯疱疹病毒感染290例，总阳性率24.13% （290/1202）。HSV-II型感染率大于HSV-I型感染率，二者差异有统计学意义（χ2=294.396，P＜0.01）。结果见表1。

表1 1202例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒检测结果Table 1 Testing result of herpes simplex virus from 1202 samples

2.2 不同性别疑似患者HSV阳性率

290例单纯疱疹病毒感染患者中男性患者193例，阳性率24.62%（193/784），女性患者97例，阳性率23.21%（97/418），男性与女性的感染率比较，差异不具有统计学意义（χ2=0.297，P＞0.05）。结果见表2。

表2 不同性别患者单纯疱疹病毒检出率Table 2 The positive detection rate of herpes simplex virus in male and female outpatients

3 讨论

人类HSV为有包膜的双链DNA病毒，属疱疹病毒科α病毒亚科，分为两型，即单纯疱疹病毒I型（HSV-I）和单纯疱疹病毒II型（HSV-II）。病毒存在于患者的疱液、口鼻和生殖器分泌物中，经呼吸道、口腔、生殖器粘膜以及破损皮肤进入体内。当机体抵抗力下降时，如发热、胃肠功能紊乱、月经、妊娠、感染和情绪改变时，体内潜伏的HSV被激活而发病。HSV主要通过直接接触传播，包括接吻、接触带有HSV的病人的口腔和呼吸道分泌物，原发性感染和复发性感染及无症状的排病毒者均可成为传染源。I型病毒主要引起生殖器以外的皮肤、粘膜（口腔粘膜）和器官（脑）的感染；II型病毒主要通过性接触传播，引起生殖器部位皮肤粘膜感染。生殖器疱疹临床表现多样化，典型临床症状是生殖器部位出现水疱、脓疱、溃疡或糜烂，但不典型表现、无症状感染也相当常见，仅依靠患者症状做出诊断明显存在不足[6]，正确的做法是进行实验室检测确诊[7]。因此，HSV的实验室早期准确检测显得非常重要。

目前HSV的检测方法主要有：（1）直接HSV病毒的细胞培养鉴定。（2）免疫学检测。（3）分子生物学检测：包括核酸杂交技术和PCR等。然而细胞培养和免疫学检测都费时、费力，FQ-PCR技术是一种比较简单的分子生物学技术，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点[11,12]，目前，利用该技术在我国进行有关单纯疱疹病毒感染的研究报道逐渐增多。本研究中我们利用该技术对广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者HSV感染情况进行了调查研究。研究发现，1202例生殖器疱疹疑似患者检测HSV阳性患者共290例，阳性率24.13%（290/1202），其中有8例生殖器疱疹疑似患者HSV-I病毒检测结果呈阳性，阳性率0.67%（8/1202）；HSV-II型阳性患者282例，阳性率为23.46%（282/1202），说明HSV在本地区有较高的感染率，感染率有型别差异，II型感染率显著高于I型。同时，与潘大虎等[8]报道相比较，HSV-II阳性率偏低，需引起临床注意，特别是对生殖器疱疹病毒患者HSV-II型疑似病例扩大检测范围，避免误诊漏诊的发生。290例HSV感染患者中男性患者193例，阳性率24.62%（193/784）；女性患者97例，阳性率23.21%（97/418），HSV感染男性与女性的发病率比较，差异不具有统计学意义，与廖金英[10]报道并不一致，这可能与部分标本来源于妇科门诊并且我院皮肤及妇科门诊医师对女性生殖器疱疹足够重视有关。贾晓辉和洪华林[9]对1009例妇女生殖器炎症标本研究发现，HSV-II的感染与宫颈病变程度以及宫颈癌的发生密切相关。通过全面检测查出女性病毒感染或携带者，避免误诊漏诊的发生，对预防宫颈癌的发生有一定意义。本实验采用的FQ-PCR在生殖疱疹病毒感染检测中具有特异性强，准确度高而且步骤简单、自动化程度高、操作快速，结果客观准确等优点，适用于快速诊断的需要，能在数小时内获得结果，为早期临床提供可靠的诊断依据，值得临床推广应用。

综上所述，广州新塘地区HSV总体感染情况比较严重，以HSV-II型为主，临床需重视对疑似生殖器疱疹病毒患者进行HSV检测，避免误诊漏诊。而PCR-荧光探针法在HSV检测中优势突出，具有良好的应用前景，值得临床推广。此外，虽然HSV-I病毒检测结果显示阳性率低，但HSV-I病毒主要由口唇病灶感染，在生殖器部位检出HSV-I病毒可能与近年来口-生殖器性行为方式的出现导致生殖器部位HSV病毒感染有关，因此加强宣传教育，推行标本兼治方案对于本地区HSV的预防控制尤为重要。

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Analysis of genetic detecting in 1202 outpatients with suspected herpes simplex virus infection

YANG Yong1, SUN Wei2, WU Baohua1★
(1.Department of Dermatology, Hydropower Hospital, Guangdong, Guangzhou 511340, China; 2.Department of Clinical Laboratory, Hydropower Hospital, Guangdong, Guangzhou 511340, China)

ObjectiveTo investigate the situation of patients with genital suspected herpes simplex virus (HSV) infection in Xintang, Guangzhou.MethodsTo test herpes simplex virus (HSV-I/II) of 1202 cases of outpatients by fl uorescence quantitative polymerase chain reaction technology (FQ-PCR).ResultsThe positive rate of 1202 casas of outpatients were 0.67% (8/1202) with HSV-I and 23.46% (282/1202) with HSV-II. The total positive rate of HSV infection were 24.13% (290/1202). There was signi fi cant difference between the positive detection rate of HSV-I and HSV-II (P＜0.01). The positive rate of HSV in male and female patients were 24.62% (193/748) and 23.21% (97/418), respectively. There was no signi fi cant difference of the positive detection rate between male and female (P＞0.05).Conclusion①The detection rate of HSV in the outpatients with suspected genital herpes HSV infection was high in Xintang area, which nearly a quarter. The infection rate was difference in different types of HSV, and the main type was HSV-II. The result illustrated that clinical diagnosis should pay attention to detect HSV in outpatients with suspected genital herpes virus in order to avoid misdiagnosis.②There was no difference of HSV infection between male and female. ③The features of FQ-PCR were simplicity, high sensitivity, fast in detection of HSV and it is worth for clinical application.

Genital herpes; Herpes simplex virus; Fluorescence quantitative PCR

1.广东省水电医院皮肤科，广东，广州 511340

2.广东省水电医院检验科，广东，广州 511340

★通讯作者：吴保华，E-mail:wubaohua1978@hotmail.com