正交实验法优化龙眼叶提取工艺

2013-07-09柳贤福孙正伊吕松林

中国民族民间医药 2013年7期

梁洁柳贤福孙正伊吕松林翁翎

广西中医药大学，广西南宁 530001

龙眼叶药材为无患子科龙眼属龙眼Dimocarpus longan Lour．的叶或嫩芽，具有发表清热，利湿解毒之功效，主治感冒发热，疟疾，疔疮，湿疹［1］。龙眼叶主要含有鞣质、酚酸类、黄酮类及挥发油等成分［2－4］，其中黄酮类化合物是龙眼叶的主要化学成分。本实验通过正交设计对龙眼叶超声提取工艺进行了研究，以槲皮素的含量为考察指标，采用高效液相色谱法进行测定，考察了甲醇浓度、溶剂用量和提取时间对提取效果的影响，优选出最佳提取工艺，为龙眼叶的提取工艺研究提供试验参考。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪 (美国Agilent公司);LG 16－W型高速离心机 (北京医用离心机厂);B3500S－MT超声清洗仪 (上海必能信超声有限公司);Millipore Simplicity－185超纯水仪 (美国密里博公司);BP211D电子分析天平 (德国赛多利斯)。

槲皮素对照品 (中国药品生物制品检定所，批号100081－200406，供含量测定用);甲醇 (色谱纯，美国Fisher科学世界公司);水为超纯水。龙眼叶采自广西贺州市，经广西中医药大学中药鉴定教研室滕建北副教授鉴定为Dimocarpus longan Lour．的叶;实验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 槲皮素含量测定方法

2.1.1 色谱条件色谱柱:Hypersil C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);流动相:甲醇－0.2%磷酸 (47∶53);检测波长为360nm;流速:1.0ml·min－1。柱温:30℃;进样量为10 μl。槲皮素理论板数≥5000。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称定经五氧化二磷减压干燥36h槲皮素对照品9.00mg置25ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.36mg·ml－1的槲皮素对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取龙眼叶药材粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇－盐酸 (4∶1)混合溶液20ml，密塞，称定重量，超声提取50min，放冷，再称定重量，用甲醇－盐酸 (4∶1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2 龙眼叶提取正交试验设计与结果

2.2.1 正交试验的设计选择甲醇体积浓度 (A)、甲醇用量 (B)、提取时间 (C)3因素为考察因素，每个因素选3个水平，以L9(34)正交设计表安排试验，以龙眼叶中槲皮素的含量为评价指标。因素水平表见表1，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交试验结果表

表3 方差分析表

2.2.2 结果因素极差R越大，说明因素的水平改变对实验结果影响也越大。由实验结果的直观分析及方差分析可知，影响槲皮素提取效果的因素大小顺序为A＞B＞C，即甲醇浓度＞甲醇用量＞提取时间，其中甲醇浓度对试验结果有显著性影响，根据实验结果确定最佳提取方法为A3B1C3，即用20ml的100%甲醇－盐酸 (4∶1)超声处理50min。

2.2.3 验证实验为了进一步考察优选工艺的可靠性和稳定性，取3份龙眼叶药材粉末1g按上述最佳工艺条件A3B1C3进行验证试验，按“2.1.1”项下所述方法进行测定，结果表明槲皮素含量为 3.6545mg·g－1，RSD=0.72%，与正交试验最佳方案一致，说明优化是成功的。