止咳平喘糖浆中麻黄碱的含量测定方法研究

冯 旭 覃洁萍 梁臣艳 牛晋英 郭 蕊 王 卉

广西中医药大学，广西 南宁 530001

止咳平喘糖浆是由麻黄、石膏、苦杏仁等十一味中药制成的一个成方制剂，收载于国家中药部颁标准4部，具有清热宣肺，止咳平喘等功效，用于风热感冒引起的咳喘，气粗痰多，周身不适，咽痛。止咳平喘糖浆的君药为麻黄，原标准中无含量测定项。麻黄药材中主要含麻黄碱等生物碱类化合物［1］。目前麻黄碱的含量测定应用较广泛的是高效液相色谱法。其药材及制剂含量测定时供试品的处理方法主要有萃取法［2－4］和蒸馏法［5－7］。萃取法操作复杂，所用的萃取液乙醚为麻醉药品，易发生中毒且污染环境;蒸馏法则方便简单，易于操作，提取效率高，但不同文献报道的蒸馏条件不一。为了优化止咳平喘糖浆中麻黄碱含量测定的供试品溶液制备方法，本实验采用正交试验法，考察了不同氢氧化钠浓度、氢氧化钠用量、氯化钠用量及蒸馏液接收量对止咳平喘糖浆中麻黄碱含量测定结果的影响，建立了制剂中麻黄碱的含量测定方法，现将实验结果报道如下。

1 仪器与试药

美国Agilent 1100 Series高效液相色谱仪:四元泵，在线脱气机，自动进样器 (G1313A)，柱温箱，可变波长检测器 (VWD)。

超纯水系统 (MILLIPORE)。

乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。

麻黄碱对照品 (中国药品生物品检定所，供含量测定用，批号:171241－200303)。

止咳平喘糖浆样品及阴性样品由广西三金药业生物制品有限公司提供。

阴性样品为按处方比例及制剂工艺制备的缺麻黄的空白对照样品。

2 方法与结果

2.1 麻黄碱测定条件

2.1.1 色谱条件 美国Phenomenex公司Luna 5μ C18(2)柱 (4.6mmID×250mm);

流动相:乙腈:0.1%磷酸 (含0.1%三乙胺) (3:97)，流速:1ml/min，柱温:30℃，检测波长:210nm。进样量:20μl。理论板数以麻黄碱峰计不低于6000。

按上述色谱条件分别对对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液进行分析，分离效果较好，在与对照品出峰相应的保留时间未出现杂质峰，可见其它成分对主成分测定无干扰，说明本法具有专属性。

2.1.2 对照品溶液的配制 精密称取盐酸麻黄碱对照品12.3mg，加入流动相制成每1ml含0.123mg的溶液即得。

2.1.3 供试品及阴性样品溶液的制备 精密量取本品50ml，加入氯化钠15g，3mol/l氢氧化钠溶液100ml，蒸馏，用预先盛有0.1mol/l盐酸溶液10ml的100ml量瓶收集蒸馏液近95ml，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜 (0.45μm)滤过，取续滤液即得。

2.1.4 线性关系的考察 分别精密吸取对照品储备液0.50、1.25、2.50、5.00、7.50ml，置 10ml量瓶中，加0.1mol/l盐酸溶液并稀释至刻度，即得浓度分别为6.15、15.38、30.75、61.50、92.25μg/ml的对照品溶液。分别吸取上述标准溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定麻黄碱峰面积。以峰面积 (A)为纵坐标，以含量 (C)为横坐标进行线性回归，得回归方程为 A=38.924C+3.167，γ=0.9999(n=5)，线性范围为 6.15 ～92.25μg/ml。

2.1.5 精密度试验 精密吸取上述浓度为15.375μg/ml的对照品溶液20μl，连续进样6次，测定麻黄碱峰面积，得平均峰面积为590.8，RSD为0.18%(n=6)，说明本法精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 精密吸取同一瓶供试品溶液20μl，注入色谱仪，在12小时内测定麻黄碱的峰面积，共测6次，得平均峰面积为595.6，RSD为0.81%(n=6)，表明样品在12个小时内稳定。

2.1.7 重复性试验 按供试品溶液制备项下的方法平行制备供试品溶液6份，在同等色谱条件下测定麻黄碱峰面积，计算其含量，RSD为0.69% (n=6)，说明本法重现性良好。

2.1.8 回收率试验 精密量取同批已知浓度止咳平喘糖浆25.00ml(麻黄碱含量为30.85μg/ml)，置圆底烧瓶中，再精密吸取对照品储备液10.00ml(浓度61.5mg/ml)，以下按供试品制备项下的方法制备，进样20μl，同法测定 (n=6)。结果见表1，说明本法准确度良好。

表1 麻黄碱回收率试验结果

2.2 正交实验优选麻黄碱的提取条件

2.2.1 影响因素考察 参照有关文献［7］，在样品中加入氢氧化钠 (2mol/L)150ml和20g氯化钠，加热蒸馏提取，用装有10ml 0.1mol/L盐酸溶液的100ml容量瓶收集蒸馏液约95ml后定容，制成供试品，按上述色谱条件进行含量测定。分别改变不同条件，其余条件按上述条件进行提取，对影响提取效率的因素进行考察。从测量结果可知，氢氧化钠的加入体积、氢氧化钠溶液的浓度、氯化钠的加入量、蒸馏液接收体积等因素对测量结果均有明显影响，为考察各因素的综合影响结果，以下通过正交设计法来优选麻黄碱的最佳提取条件。

2.2.2 正交实验方案 考察指标:测得的麻黄碱含量。

考察因素:氢氧化钠的加入体积、氢氧化钠溶液的浓度、氯化钠的加入量、蒸馏液接收体积。

采取L9(34)正交试验进行考察，取正交设计表的1，2，3，4列分别对应于A、B、C、D四个因素。其因素水平见表2，结果见表3。

表2 因素水平表

表3 正交实验方案及结果

所在列2 3 4实验1 9 200 3 15 80 66.73均值1 79.513 49.627 63.453 63.447均值2 69.887 71.587 70.387 71.543均值3 54.11 82.297 69.67 68.52极差25.403 32.67 6.934 8.096

2.2.3 结果分析 由麻黄碱含量的直观分析可知，四个因素的极差大小顺序为B＞A＞D＞C。进一步进行方差分析(结果见表4)，B因素和A因素有显著性，C因素及D因素无显著性。因此确定最佳工艺为:A1B3C2D2，即加入3mol/L氢氧化钠的体积100ml，氯化钠15g，蒸馏液接至约95ml。

2.2.4 样品的含量测定 参照正交实验结果采用以氢氧化钠 (3mol/L)100ml和15g氯化钠加热蒸馏提取，用装有10ml 0.1mol/L盐酸溶液的100ml容量瓶收集蒸馏液约95ml后加水至刻度，制成供试品，按上述色谱条件进行含量测定。结果见表5。

表5 含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 本试验曾参照文献用萃取法提取供试品，将制得的供试品溶液注入高效液相色谱仪，同法测定盐酸麻黄碱的含量，将测得的结果与蒸馏法的结果进行比较，结果表明，蒸馏法较萃取法处理时间短，提取效率高，方法简便，易于操作，准确性好;并且不需使用有机溶剂，对环境影响小，故采用蒸馏法作为提取方法。

3.2 按照正交表中的实验3蒸馏时，由于加入氢氧化钠的体积少，氯化钠的量较大，造成蒸馏快结束时氯化钠的浓度相对较高，此时容易出现爆沸现象，并出现氯化钠析出晶体。此现象是氯化钠加入量太大和氢氧化钠溶液体积太少所致，且氯化钠加入量的增加对提取效率影响不大，故最佳提取方法中氯化钠的加入量为15g。

3.3 正交实验得到的结果表明氢氧化钠的加入体积与提取效率之间并非成正比关系，造成此结果的原因可能为由于加入的氢氧化钠体积增大导致氯化钠的浓度降低，从而降低了提取效率的缘故。

3.4 氢氧化钠的浓度越大对其提取效率越高，但氢氧化钠的浓度大于3mol/L后对提取效率的影响不大，且过高浓度的氢氧化钠对玻璃仪器的腐蚀作用很强，因此最佳提取方法中氢氧化钠的浓度为3mol/L即可。

3.5 试验结果表明，氢氧化钠溶液的浓度和体积是影响提取的最关键因素。本结果为含麻黄碱的中药及制剂的含量测定提供了实验依据。

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