钙剂和硒对饮茶型氟中毒小鼠肝、肾病理形态学改变的影响

李全亮 谭 霞 杨湘彬 黄 巍 刘 丽

（长沙医学院科研实验中心，湖南 长沙 410219）

钙剂和硒对饮茶型氟中毒小鼠肝、肾病理形态学改变的影响

李全亮 谭 霞 杨湘彬 黄 巍 刘 丽

（长沙医学院科研实验中心，湖南 长沙 410219）

目的 研究钙剂和硒对饮茶型氟中毒小鼠肝、肾病理形态改变的影响，从而为防治饮茶型氟中毒提供科学依据。方法以常规饲料饲养小鼠，并给予含氟量为100mg/L的砖茶水，为期3个月，建立饮茶型氟中毒小鼠的病理模型；去除自然死亡的小鼠，按体质量随机分成4组：对照组，砖茶组，钙剂组，硒组。对照组饮用自来水，砖茶组饮用含氟量为100mg/L的砖茶浸出液，钙剂组饮用2mg/L的钙剂和砖茶浸出液，硒组饮用2mg/L的亚硒酸钠溶液和砖茶浸出液，一个月后处理实验动物，通过组织病理学观察钙剂和硒对饮茶型氟中毒小鼠肝、肾病理形态学改变的影响。结果硒组小鼠肝、肾细胞组织的后继损伤较轻，而钙剂组肝，肾病理损伤较重。结论硒对饮茶型氟中毒小鼠的肝、肾细胞的后继损伤有一定的保护作用，但不能明显减轻已造成的小鼠肝、肾病理形态的改变，证明和在一定程度上可拮抗氟的毒性作用，减轻氟中毒病情，减缓氟中毒的进一步的发展。而钙剂加重氟中毒的发展。

钙剂和硒；饮茶型氟中毒

饮茶型氟中毒是我国特有的一种氟中毒类型。主要是由于摄入大量的含氟量极高的砖茶而引起的一种慢性中毒[1]。饮茶型氟中毒症状的出现及对人体的损害是一个缓慢而不易为人察觉的过程。主要与少数民族的饮茶习惯有关。少数民族的饮茶方式是将高氟含量的砖、边茶用水或奶进行煎煮，每餐必用其伴食。砖、边茶是用茶的粗老叶片、叶梗加工而成的，其氟的含量是一般商品的100～200倍[2]。茶叶经沸水浸泡后，叶片中的氟迅速溶出[3]。这使得茶氟的溶出量和摄入量均显著增加。若长期饮用，再加上饮水中的氟，摄入体内的氟就会超过标准（＞50mmol/L或＞4mg/d），引起慢性中毒，而氧自由基在这个过程中起着重要的作用，它的增加会导致或加剧氟中毒的产生，甚至导致氧中毒[4]，从而影响人体各个器官系统的结构和功能。通过复制饮茶型氟中毒小鼠病理模型进行动物实验，研究小鼠在应用钙剂和硒剂处理后肝肾组织病理形态的变化及差别，从而了解硒剂是否可以对抗氟中毒的氧自由基，为临床预防和治疗饮茶型氟中毒提供实验依据和理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

长沙医学院机能实验室提供的大鼠58只，体质量60～100g，雌雄各半。基础饲料和自来水适应性饲养1周，去除自然死亡的大鼠后按体质量随机分为4组，每组10只，分笼饲养。

1.2 饲料

饲料是由长沙医学院科研实验室提供的。饲料的营养保证值是：水分≤10%、粗蛋白≥21%、粗脂肪≥4%、粗纤维≤5%、粗灰分≤8%、钙1.0～1.8、磷0.6～1.2、赖氨酸≥1.32%、蛋氨酸±胱氨酸≥0.78%、饲料含氟量为6.32mg/kg。

1.3 饮水

实验组小鼠饮用含氟量为100mg/L。每天进行灌胃。对照组饮用自来水，氟含量为0.425 mg/L。

1.4 实验方法

图1 小鼠肝细胞×400（A：对照组，B：砖茶组，C：钙剂组，D：硒组）

表1 动物分组及处理因素

1.4.1 动物分组及处理因素见表1。实验期间全部动物均自由进食水，实验期限为期3个月。

1.4.2 光镜标本制备

取小鼠肝脏和肾脏，10%甲醛固定，梯度蔗糖溶液脱水，冰冻切片包埋剂，冰冻切片，HE染色后供组织学观察。

2 结 果

2.1 光镜下肝脏和肾脏组织器官的病理形态学改变

2.1.1 肝脏

肝细胞锁排列紊乱，肝细胞浊肿变性，部分肝细胞胞浆透明，成气球样变，可见大量脂肪空泡，肝细胞轮廓不清，有的细胞膜消失并有核碎裂。各实验组肝细胞受损情况见图1，与对照组相比统计结果见表2。

结合图1各实验组肝细胞受损情况：钙剂组＞氟茶组＞水组＞硒组与对照组相比，在应用钙剂和硒处理后肝细胞受损情况统计结果见表2。

表2 钙剂和硒对饮茶型氟中毒小鼠肝细胞受损情况的比较

在应用钙剂和硒后小鼠肝细胞损伤差异有统计学意义（根据Fisher确切概率法计算P＜0.05）

2.1.2 肾脏

砖茶组小鼠肾小球和肾小管尚能分清，但是近曲小管上皮细胞核明显萎缩，浆核比例增大。细胞核形态不一，呈椭圆形，肾形，三角形，排列紊乱，个别可见核固缩，部分细胞核向官腔突出，有的已位于官腔内，钙剂组小鼠近曲小管上皮细胞核改变同砖茶组，但是程度略重。细胞核形态较砖茶组好。硒组小鼠近曲小管上皮细胞核形态较好，细胞轻度肿胀。如图2所示，统计结果见表3。

图2 小鼠肾细胞×400（A：对照组，B：砖茶组，C：钙剂组，D：硒组）

结合图2各实验组肝细胞受损情况：钙剂组＞氟茶组＞水组＞硒组与对照组相比，在应用钙剂和硒处理后肝细胞受损情况统计结果见表3。

表3 钙剂和硒对饮茶型氟中毒小鼠肾细胞受损情况的比较

在应用钙剂和硒后小鼠肾细胞损伤差异有统计学意义（根据Fisher确切概率法计算P＜0.05）

3 讨 论

氟中毒的治疗是当今氟中毒研究领域中一个较为关注的问题。饮茶型氟中毒已成为严重危害我国西部少数民族地区人群健康的公共卫生问题。解决该类型的氟中毒主要从两个方面入手：①降低茶的含氟量；②加强营养。本实验主要从营养方面出发，研究钙剂与硒两种微量元素对中毒小鼠肝肾病理形态学的影响。与对照组相比，通过光镜下的对比观察可以看到硒组对肝肾组织的损伤最小，自来水次之，氟茶组较小，钙剂最甚。其原因可能是因为氟中毒时，氟通过自由基的作用造成肝肾损害，硒是抗氧化剂，可以是自由基减少，减轻氟对组织的损害。而钙剂加重自由基的作用对肝肾造成损伤，其具体作用机制还有待进一步研究。

[1] 高彦辉,孙殿军,周令望,等.亚慢性氟中毒对大鼠骨组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响[J].中国地方病学杂志,2008,27(2):124.

[2] 孙玉富,滕国兴,赵新华.地方性氟中毒病区划分指标和标准的研究进展[J].中国地方病学杂志,1996,15(3):169-170.

[3] Duck worth SC,Duck worth RM.The ingestion of fluoride in tea [J].BrDentJ,1978,145(12):368-370.

[4] Rzeuski R,chlubek D,Machoy Z.Interaction of fluoride and biological free radicals reaction[J].Fluoride,1998,31(1):43-45.

R155.3

B

1671-8194（2013）18-0094-02

湖南省教育厅大学生研究性学习和创新性实验资助项目（编号：2012441）