慈菇消脂胶囊对非酒精性脂肪肝病大鼠肝组织P4502E1及血脂代谢的影响

徐 超杨少军*

（1 甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000；2 甘肃中医学院附属医院消化科，甘肃 兰州 730000）

慈菇消脂胶囊对非酒精性脂肪肝病大鼠肝组织P4502E1及血脂代谢的影响

徐 超1杨少军2*

（1 甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000；2 甘肃中医学院附属医院消化科，甘肃 兰州 730000）

目的探讨慈菇消脂胶囊治疗非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的作用机制。方法雄性SD大鼠60只，随机分成6组，正常组喂以标准饲料；其余组给予高脂饲料喂养12周复制NAFLD大鼠模型。对照组喂以吡格列酮0.135mg/kg，慈菇消脂胶囊各组分别喂以0.162g，0.324g，和0.648g/kg。6周后，观察慈菇消脂胶囊对NAFLD大鼠体质量、肝指数、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血清铁蛋白（SF）水平，和细胞色素P4502E1（CYP2E1）表达的影响。结果与模型组相比，慈菇消脂胶囊组及吡格列酮组，TC，TG，SF均不同程度的降低（P＜0.05），肝组织P4502E1的表达与肝细胞脂肪变性程度一致。与吡格列酮组相比，慈菇消脂胶囊高剂量组大鼠肝组织P4502E1的表达显著降低（P＜0.05），同时TC，TG，SF指标也恢复接近正常水平。结论慈菇消脂胶囊可明显抑制NAFLD大鼠肝组织P4502E1的表达，改善血脂代谢异常，从而发挥治疗NAFLD的作用。

慈菇消脂胶囊；非酒精性脂肪肝病；肝组织P4502E1；血脂

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征[1]，现代医学“二次打击”学说认为，以细胞色素P4502E1（CYP2E1）为中心形成的氧自由基、脂质过氧化，导致肝实质损伤是NAFLD的重要发病机制[2]。据此，我们运用慈菇消脂胶囊对高脂饲料诱导的NAFLD大鼠进行干预，观察其对大鼠肝组织P4502E1及血脂的影响作用，以探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选取同批成年雄性SD大鼠60只，体质量约（200±20）g，大鼠（SPF级）均由甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证为：SCXK2004-006。

1.2 药物与试剂

慈菇消脂胶囊（主要以山慈菇、泽泻、山楂、决明子等十五味中药组成）由甘肃中医学院附属医院制剂中心提供（0.5g×60粒，批号：120412）。吡格列酮片：15mg/片，成都恒瑞制药有限公司（批准文号：国药准字H20040631，批号：20120402）。相关生化指标测定试剂盒均购自南京建成生物研究所，兔抗大鼠肝P4502E1抗体，SP免疫组化染色试剂盒（SPkit）均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 复制模型与分组处理

取60只SD雄性大鼠，先以基础饲料适应性喂养1周，然后将所有大鼠按体质量进行编号，使用随机数字表法抽取10只空白组，继续用普通饲料喂养；剩余50只都喂以高脂饲料（2%胆固醇；5%蔗糖；18%猪油；2%蛋黄粉；71.3%基础饲料等）开始造模。自由饮水。至第8周末，随机处死两只造模大鼠，剖肝证实模型复制成功。造模成功后，空白组继续以普通饲料喂养，高脂饲料喂养的48只大鼠，按体质量随机分成模型组、吡格列酮组、慈菇消脂丸组（包括高剂量、中剂量、低剂量组）5组，继续喂以高脂饲料4周，造模时间共12周。根据人与大鼠体表面积比，慈菇消脂胶囊组按等效剂量的12倍，6倍，3倍（分别喂以0.162g，0.324g和0.648g/kg。）灌胃给药。吡格列酮组喂以0.135mg/kg。空白组每日灌胃等剂量的生理盐水。实验期间观察体质量、饮食及尿量。

1.4 样本处理

灌胃6周后处死所有大鼠，取血剖肝。分离血清，测定血清TC，TG，SF含量。称取肝脏湿质量，计算肝指数（肝指数＝肝脏质量/体质量×100%）。常规石蜡包埋切片，HE染色备用。按照试剂盒要求采取免疫组化法（SP）测定肝组织P4502E1含量。

1.5 结果判定

采用BH-2型显微镜（美国，Nikon）拍摄，在高倍镜(×40)下，每张切片随机选择5个视野，图像采用彩色病理图文分析系统（成都泰盟，BI-2000型）分析，表达强度用平均吸光度值（A）表示。

1.6 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件包进行数据分析。计量资料用（χ—±s）表示。显著性检验采用单因素方差分析，检验水准为0.05，差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 慈菇消脂胶囊对NAFLD大鼠体质量和肝指数的影响

与治疗前相比，慈菇消脂胶囊高剂量组治疗后大鼠体质量降低，具有统计学意义（P＜0.05），其余各组治疗后体质量均增高。与对照组相比，模型组肝指数增高。与模型组相比，慈菇消脂胶囊组及吡格列酮组肝指数均降低，具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 慈菇消脂胶囊对NAFLD大鼠体质量和肝指数的影响[（χ—±s），n=10]

2.2 慈菇消脂胶囊对NAFLD大鼠血脂的影响

模型组血清TC、TG、SF水平明显高于正常组(P＜0.05)，与模型组相比，慈菇消脂胶囊组及吡格列酮组均有不同程度的降低（P＜0.05）。慈菇消脂胶囊高剂量组作用显著（P＜0.05），见表2。

2.3 肝组织P4502E1蛋白的表达

空白组可见少量P4502E1蛋白表达；模型组P4502E1蛋白呈高表达；慈菇高剂量组P4502E1蛋白表达与正常组相似，在极少数脂肪滴周围呈少量表达。慈菇中、低剂量组P4502E1的表达与肝细胞脂肪变性程度一致；与吡格列酮组相比，慈菇高剂量组P4502E1的表达显著降低（P＜0.05）。见表3。

表2 慈菇消脂胶囊对NAFLD大鼠血清TG，TC，SF的影响[（χ—±s），n=10]

表3 慈菇消脂胶囊对NAFLD大鼠肝组织P4502E1表达的影响

3 讨 论

近年来，随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，NAFLD的发病率不断攀高，发病年龄也逐渐趋向低龄化，严重威胁着人类健康。目前，西医在治疗上尚缺乏理想药物，主要是他汀类降脂药，但副作用较多。而中药防治该病具有一定优势[3]。慈菇消脂胶囊为我科研制的院内制剂，多年来运用于临床取得了较满意的疗效[4]。

慈菇消脂胶囊主要是以山慈菇为君药，佐以决明子、山楂、泽泻、丹参、土鳖虫等15味中药配伍而成，方中以山慈菇为君药，具有清热解毒，消肿散结的功效，民间用其以化脂肪，已使用良久[5]。泽泻、山楂以化浊消脂，丹参、土鳖虫以化瘀通络，决明子清肝化浊。现代药理研究表明[6]，丹参能有效抑制和减轻肝细胞脂肪变性、坏死以及炎症反应，并可改善肝脏血液循环等作用，泽泻能降低对外源性TG、TC的吸收和抑制肝内TG的合成，决明子可使HDL增高、TC降低，预防脂肪沉积。全方共奏化痰解毒、消降浊脂、祛瘀散结的功效.

细胞色素P450酶是肝脏主要代谢酶，主要存在于肝细胞微粒体中。在正常大鼠肝组织中，表达是很少的。研究发现[7,8]，在NAFLD中P4502E1高水平表达，并参与NAFLD的形成，在非酒精性脂肪肝的发病中起到重要作用。脂肪性肝病发病过程中P4502E1的诱导表达可加重肝内脂质代谢异常，并参与肝细胞的氧应激、脂质过氧化、细胞凋亡、炎性因子形成及星状细胞激活等过程。通过抑制肝P4502E1表达，从而中断肝细胞脂质过氧化损伤的关键环节，从而达到治疗NAFLD的目的。

本研究结果显示慈菇消脂胶囊能显著降低NAFLD大鼠肝细胞P4502E1的表达，高剂量组效果优于吡格列酮组（P＜0.05）。并能下调TC，TG，SF水平，提示其机制是通过减少P4502E1的表达，阻止脂质过氧化物的产生，阻止肝细胞变性和肝脏损伤，提高肝脏分解TG，TC，SF的能力，恢复肝内正常的脂质代谢。从而发挥治疗NAFLD的作用。

[1] 中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性肝病诊疗指南(2010年修订版)[J].中华肝脏病杂志,2010,18(3):163-166.

[2] 王悦之,张玉胃.CYP2E1与非酒精性脂肪肝[J].肠病学和肝病学杂志,2012,21(4):384-386.

[3] 孙晓波.现代方剂药理与临床[M].天津:天津科技翻译出版公司, 2005.

[4] 杨少军,孟陆亮,张立清,等.慈菇消脂丸治疗脂肪肝的临床研究[J].中国中医药科技,2009,16(5):343-344.

[5] 沈瑾秋.山慈菇的临床应用及药理研究纂要[J].实用中医内科杂志,2008,22(10):3-4.

[6] 任萍,鞠萍.对肝脏有保护作用单味中药[J].中国现代药物应用, 2011,5(17):15-17.

[7] 胡辂,陈东风,史洪涛,等.肝细胞色素P4502E1在大鼠非酒精性脂肪肝发生中的作用[J].第三军医大学学报,2004,26(17):1561-1563.

[8] 刘树军,黄静娟,车念聪.活血化痰基础方对大鼠非酒精性脂肪肝模型CYP2E1活性的影响[J].中西医结合肝病杂志,2008,18 (2):109-111.

R575.5

B

1671-8194（2013）12-0076-03

*通讯作者