HPLC法测定紫地宁血散中没食子酸的含量

林颖怡 张 雪

（广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州 510450）

HPLC法测定紫地宁血散中没食子酸的含量

林颖怡 张 雪

（广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州 510450）

目的 建立测定紫地宁血散中没食子酸含量的方法。方法 采用HPLC法，色谱柱为Diamond diamonsil C18柱，乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（1∶99）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为273nm，柱温为30℃。结果 没食子酸在20.475～2047.5ng范围内与其峰面积线性关系良好，平均回收率为100.5%，分析方法精密度（RSD）为0.4%（n=6）。结论 所用方法简便、准确，能有效的控制该制剂的质量。

紫地宁血散；没食子酸；HPLC

紫地宁血散来源于（90）卫药准字Z-43号。主要由大叶紫珠、地菍2味药材组成。具有清热凉血，收敛止血的作用，主治胃及十二指肠溃疡或胃炎引起的吐血、便血，属胃中积热型者。本品种原执行标准中无含量测定项，为确保质量标准能够更好地控制质量，本文建立了测定地菍中没食子酸含量的方法[1]，结果表明，本方法可操作性强，稳定性好，可以用于控制紫地宁血散含量的质量。

1 仪器与试剂

岛津LC-20AT VP高效液相色谱仪；SPD-M10A VP检测器；LC-Solution色谱工作站；色谱柱：Diamonsil C18（200×4.6mm，5μm），柱编号：8022889；没食子酸（中国药品生物制品检定所，批号:110831-200302）；紫地宁血散（由广州某药店提供，批号：J00001；G00001；G00003）；乙腈为色谱纯，其他均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取没食子酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50Hz）30min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2]。

2.2 色谱条件及系统适应性试验

色谱柱为C18柱（Diamond Diamonsil C18柱（200×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液（1∶99）；流速为1mL/min；检测波长为273nm；柱温为30℃。分别取对照品溶液、供试品溶液各10μL注入色谱仪，见图1。

2.3 线性关系考察

精密称取没食子酸对照品4.095mg，用80%甲醇定容到20mL量瓶中，浓度为204.75µg/mL（对照品溶液母液），再精密吸取上述对照品溶液母液，移入20mL量瓶中，用80%甲醇定容到刻度，即得对照品溶液，浓度为20.475µg/mL。按上述色谱条件，分别精密吸取没食子酸对照品溶液1µL、2µL、5µL、10µL及对照品溶液母液（204.75µg/mL）2µL、5µL、10µL，注入液相色谱仪，测定其峰面积。以峰面积积分值为纵坐标（y），对照品的进样量（ng）为横坐标（x），进行回归分析，得回归方程：没食子酸 y＝2929.9x-14896，r＝0.9999。结果表明没食子酸在20.475～2047.5ng范围线性关系良好。

2.4 重现性试验

精密称取同一批紫地宁血散（批号：J00004）样品约1.5g，共6份，按“2.2”项下的制备方法制备供试品溶液并测定，6份样品没食子酸含量平均值为0.692mg/g（RSD=0.9% n=6）。

2.5 稳定性试验

图1 HPLC色谱图（依次为对照品、样品、阴性）

表1 没食子酸回收率试验结果

取同一供试品溶液（批号：J00004），分别于0、2、4、8、12、 24、48h依法测定样品，结果没食子酸含量的RSD为1.0%，表明供试品溶液在48h以内稳定。

2.6 加样回收率试验

精密称取已知含量的紫地宁血散(批号：J00004，平均含量为0.692mg/g)样品0.75g，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入已知浓度的没食子酸对照品溶液(21.035µg/g)25mL，按“2.2”项下供试品溶液制备方法制备供试液，依上述色谱条件测定，计算，结果见表1，平均回收率为100.5%，RSD为0.4%（n=6）。结果说明本方法准确度好。

2.7 三批样品测定结果

按照“2.2”项下的制备方法制备供试品溶液，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，计算，测定结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨 论

3.1 本研究结果显示，该法具有较好的线性关系、重复性与回收率，操作方便、迅速，结果准确。说明反相高效液相色谱法测定紫地宁血散中没食子酸含量的可行性良好。

3.2 曾分别采用热回流和超声浴处理法和加酸水解法进行比较，结果显示：超声浴提取方法与其他提取方法并无显著性差异，从操作简便性考虑，选择超声浴提取方法。

3.3 曾对提取溶剂进行考察，取同一批号的紫地宁血散（批号：J00004）约1.5g，分别用甲醇、80%甲醇、50%甲醇、30%甲醇和水作为提取溶剂，制成供试品溶液，分别测定没食子酸的含量。结果表明80%与50%甲醇作为提取溶剂所得结果最高，考虑到80%甲醇所得供试品溶液杂质较少，选择80%甲醇作为提取溶剂。

[1] 国家药典委员会.《中国药典》2005年版一部[S].北京:化学工业出版社,2005:214-215.

[2] 史伟国,王丽敏,刘翠娟,等.地榆不同部位没食子酸的含量测定[J].黑龙江医药科学,2011,34(1):14-15.

Determination of Gallic Acid in Zidiningxuesan

LIN Ying-yi, ZHANG Xue
(Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited, Guangzhou 510450, China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of gallic acid in Zidiningxuesan. Methods A Diamond diamonsil C18column was used, with the mobile phase of a mixture of acetonitrile and 0.1% solution of phosphoric acid containing 0.1% triethylamine (1∶99). The flow rate was 1.0mL/min and the detective wavelength was 265nm. The column oven was 30℃. Results The standard curves were linear from 20.475 to 2047.5ng for gallic acid. The average recoveries was100.5%, RSD of the analysis method was 0.4% (n=6). Conclusion This method was simple, accurate and reliable for quality control of Zidiningxuesan.

Zidiningxuesan; Gallic acid; HPLC

R917

B

1671-8194（2013）23-0048-02