含洁尔灭类消毒剂微生物限度检查方法的探讨

2013-07-01邢亚非沈莉莉

中国医药指南 2013年27期

关键词：硫代硫酸钠氯化钙菌液

邢亚非* 张健黄波沈莉莉

（南京白敬宇制药有限责任公司，江苏南京 210038）

含洁尔灭类消毒剂微生物限度检查方法的探讨

邢亚非* 张健黄波沈莉莉

（南京白敬宇制药有限责任公司，江苏南京 210038）

目的建立含洁尔灭类消毒剂微生物限度检查方法并对方法进行验证。方法薄膜过滤法，采用2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液作中和剂0.1%蛋白胨水溶液作为冲洗剂，消除洁尔灭的杀菌性。结果与结论本方法能有效的检出检品的微生物状况。

洁尔灭类消毒剂；中和剂；回收率

含洁尔灭类消毒剂为阳离子表面活性剂，其特点是易于水，无色，无刺激性，无腐蚀性，性能稳定，使用方便，广泛使用于医疗卫生各区域[1]。能改变细菌胞质膜通透性，使细胞丧失摄取营养物质的能力，并抑制菌体的代谢及许多酶系统的活力[2,3]，对革兰阳性细菌作用较强[2,3]，对绿脓杆菌、抗酸杆菌和细菌芽孢无效[1]。能与蛋白质迅速结合，遇有血、棉花、纤维素和有机物存在，作用显著降低[3]。主要用于手术前皮肤消毒、黏膜和伤口消毒，手术器械消毒[4]。使用中的消毒剂细菌超标量最早的是新洁尔灭[5,6]，因而有必要对含洁尔灭类消毒剂进行微生物检查。因本公司处方中含有EDTA、碳酸氢钠类，故在拟定方法中我们加入了美国药典附录61[7]中推荐的中和剂”硫代硫酸钠及氯化钙”以消除该产品的抑菌性，参照中国药典附录[6]及USP34附录[7]中外用制剂微生物限度标准，该消毒剂微生物限度标准细菌总数不得过100cfu/mL（TAMC）、霉菌酵母菌总数不得过10cfu/mL（TYMC）、金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌不得检出。

1 试验材料

1.1 菌种

金黄色葡萄球菌【MCC（B）26003】，大肠埃希菌【CMCC（B）44102】，铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】，枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】，白色念珠菌【CMCC（F）98001】，黑曲霉菌【CMCC（F）98003】。以上菌种均来自江苏省食品药品检验所的第三代传代菌。

1.2 培养基

营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、胆盐乳糖培养基，上述培养基均来为北京三药科技开发公司产品。冲洗剂：0.1%蛋白胨水溶液、0.9%氯化钠、稀释剂：2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液（取20g硫代硫酸钠10g氯化钙混合加水溶解加水至1000mL），聚山梨酯80（上海申宇医药化工有限公司）、1%亚碲酸钾溶液（青岛高科园海博生物技术有限公司）。

1.3 药品

百多邦创面消毒喷雾剂 120401。

2 方法和结果

2.1 菌液的制备

2.1.1 取大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面培物一铂金饵，加入营养肉汤培养增菌液中置30～35℃培养箱中培养，取经30～35℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7使每mL菌液中含50～100CFU的备用。

2.1.2 取白色念珠菌的改良马丁琼脂斜面培养物，加入改良马丁增菌液中置20～25℃培养箱中培养24～48h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7使每mL菌液中含50～100CFU的备用。

2.1.3 取黑曲霉的新鲜培养物接种子改良马丁琼脂斜面上，20～25℃培养5～7d，加入3～5mL含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-5～10-7使每mL菌液中含50～100CFU的备用。

2.2 培养基适用性检查

2.2.1 计数培养基的适用性检查

营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基分别按中国药典2010片附录ⅩⅠ J微生物限度检查法计数培养基适用性检查要求，被检培养基上的平均菌落数大于过去使用经过试验并获批准的培养基上的平均菌落数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，故该培养基的适用性检查符合规定。

2.2.2 控制菌检查用培养基的适用性检查

亚碲酸钾肉汤培养基、胆盐乳糖培养基分别按中国药典2010片附录ⅩⅠ J微生物限度检查法控制菌培养基适用性检查要求，结果显示促生长能力检查和抑制能力检查均符合要求。

2.3 验证方法

2.3.1 计数菌检查验证

①试验组：取本品10mL加2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液至100mL，分别加入1mL的含50～100CFU/mL的5种试验菌，作为试验组。②菌液组：取约10mL的0.1%蛋白胨水溶液润湿滤膜，分别加入1mL的含50～100CFU/mL的5种试验菌，作为菌液组。③供试品对照组：取本品10mL加2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液至100mL，作为供试品对照组。④稀释剂对照组：取2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液至100mL，分别加入1mL的含50～100CFU/mL的5种试验菌，作为稀释剂对照组。⑤试验组的菌数回收率：试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率。⑥稀释剂对照组的菌数回收率：稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率。⑦薄膜过过滤法：2000mL0.1%蛋白胨水溶液作为冲洗剂冲洗滤膜。⑧回收率结果均应＞70%且RSD＜15%统计。见表1。

表1 回收率结果RSD统计表

2.3.2 控制菌方法验证

①供试液组：取本品10mL加2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液至100mL，过滤，用3000mL的0.1%蛋白胨水溶液冲洗后加入50～100CFU/mL的2种试验菌，取出滤膜接入相应培养基中置规定温度培养。②阳性对照组：取10mL的0.1%蛋白胨水溶液润湿滤膜，用3000mL的0.1%蛋白胨水溶液冲洗后加入50～100CFU/mL的2种试验菌，取出滤膜接入相应培养基中置规定温度培养。③阴性对照组：取本品10mL加2%硫代硫酸钠的1%氯化钙溶液至100mL，过滤用3000mL的0.1%蛋白胨水溶液冲洗后，取出滤膜接入相应培养基中置规定温度培养。④薄膜过过滤法：3000mL0.1%蛋白胨水溶液作为冲洗剂冲洗滤膜。⑤结果：供试液组和阳性对照组均检出相应的控制菌，阴性对照组无菌生长。