黄芪注射液对H22荷瘤小鼠抑瘤作用的细胞免疫机制

范双莉王志举* 任亚丽

（1 郑州大学基础医学院，河南 郑州 450001；2 济源职业技术学院，河南 济源 459000）

黄芪注射液对H22荷瘤小鼠抑瘤作用的细胞免疫机制

范双莉1,2王志举1* 任亚丽2

（1 郑州大学基础医学院，河南 郑州 450001；2 济源职业技术学院，河南 济源 459000）

目的探讨黄芪注射液体内抑瘤作用的细胞免疫机制。方法将昆明小鼠移植H22肝癌细胞后，分为五组：模型组，5-氟尿嘧啶组，黄芪注射液低、中、高剂量组。分别测定各组小鼠肿瘤生长抑制率（IR）和腹腔巨噬细胞的吞噬指数；采用MTT法测定各组小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果5-氟尿嘧啶组和高、中剂量黄芪注射液实验组小鼠H22实体瘤IR分别为59.45%、50.62%和40.47%，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05）；黄芪注射液实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分数、吞噬指数和脾脏淋巴细胞增值指数都明显高于模型组小鼠（P＜0.05）。结论黄芪注射液在荷瘤小鼠体内具有一定的抑瘤作用，其机制可能与其提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能有关。

黄芪；H22荷瘤小鼠；细胞免疫；抑瘤率

黄芪是豆科多年生草本植物，其味甘，性微温，是重要的补益类中药。据报道，黄芪中含有大量微量元素，如Fe2+、Mn2+、Zn2+、Se等。黄芪注射液是从黄芪中提取的有效成分精制而成，含有五十多种皂甙和数种黄芪多糖，具有提高机体免疫能力的作用[1]。本研究通过观察黄芪注射液对H22肝癌实体瘤的抑瘤效应，探讨黄芪注射液抗肿瘤作用的细胞免疫机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及瘤株

昆明种健康小鼠100只，体质量18～22g，雌雄不拘（由本院动物中心提供）；选用H22肝癌实体瘤为动物模型，瘤株（由本学院药理学教研室提供）。

1.2 药品、试剂及仪器

黄芪注射液，每5mL含生药10g；5-氟尿嘧啶（5-FU），25mg/支；噻唑蓝（MTT）；刀豆蛋白（ConA）；DJ5031酶联免疫检测仪。

1.3 方法

1.3.1 模型制备与动物分组

每一只小鼠左腋皮下注射0.2mL的瘤悬液，形成实体瘤，移植后将动物随机分为模型组，5-氟尿嘧啶组，黄芪注射液低、中、高剂量组，每组10 只小鼠。24h后开始给药。低、中、高剂量实验组小鼠分别腹腔注射黄芪注射液0.1、0.2、0.4mL/d，剂量分别为2g、4g、8g/kg，1次/d；5-氟尿嘧啶组小鼠腹腔给予5-氟尿嘧啶30mg/kg，1次/d；模型组小鼠腹腔给予氯化钠注射液0.2mL，1次/d。连续给药7d为1个疗程。

1.3.2 实验方法

①抑瘤率的测定：给药7d后颈椎脱臼处死小鼠，剥瘤称量，计算各组肿瘤生长抑制率（抑瘤率，IR）。IR =（模型组平均瘤重量-实验组平均瘤重量）/模型组平均瘤重量×100%。②腹腔巨噬细胞功能的测定：给药7 d后，测定各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数[2]。③脾脏淋巴细胞增殖指数：给药7d后颈椎脱臼处死小鼠，摘取脾脏，MTT法测定各组小鼠脾淋巴细胞转化指数[3]。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS13.0统计软件进行分析，计量数据用均数±标准差（χ—±s）表示，两组间比较采用配对资料的t检验，计数资料进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 黄芪对各组小鼠瘤重的影响

疗程结束后取出肿瘤，比较各组瘤重，结果显示5-FU组和黄芪注射液高、中剂量组小鼠H22肝癌实体瘤瘤重与模型组比较明显减轻，差异有显著性（P＜0.05），抑瘤率分别为59.45%、50.62%和40.47%；但黄芪注射液低剂量组与模型组比较，瘤重差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

表1 H22荷瘤小鼠各组瘤重的比较（n=10，χ—±s）

表2 各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数及脾淋巴细胞增殖指数（n=10，χ—±s）

2.2 黄芪对各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数及脾淋巴细胞增殖指数的影响高、中剂量实验组和5-FU组荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数及脾淋巴细胞增殖指数均显著高于模型组小鼠（P＜0.05）。结果见表2。

3 讨 论

现代药理学研究表明，黄芪有提高和调节机体的免疫功能的作用，其活性成分为皂苷和多糖。多糖作为生物效应调节剂可影响网状内皮系统、外周血T淋巴细胞、NK细胞及巨噬细胞，并影响补体的形成以及细胞因子的分泌。单核巨噬细胞系统广泛参与免疫应答、免疫效应和免疫调节，在机体维持内环境稳定方面起到了关键性的作用。巨噬细胞的吞噬功能是机体细胞免疫清除突变细胞、抑瘤抗瘤的重要因素，是衡量机体细胞免疫水平的一个重要标志。T淋巴细胞在免疫应答全过程中起着重要调节的作用，是介导机体细胞免疫的免疫活性细胞，T淋巴细胞要转化为淋巴母细胞后才能发挥免疫调节作用，T淋巴细胞转化率（增殖指数）的高低直接反映机体细胞免疫的水平[4]。

小鼠H22肝癌实体瘤是抗肿瘤药物研究中常用的动物移植性肿瘤模型。本实验利用此模型观察了黄芪注射液的体内抑瘤作用，结果表明黄芪注射液对小鼠H22肝癌实体瘤的生长有明显的抑制作用，抑瘤率达50.62%。同时黄芪各治疗组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能、脾淋巴细胞的增殖指数均显著高于模型组小鼠，说明黄芪可能通过提高细胞免疫功能，达到治疗小鼠肿瘤的作用。

[1] 张慧,韩志红.黄芪注射液对荷瘤小鼠免疫功能的影响[J].时珍国医国药,2002,13(3)∶132-133.

[2] 昊雄文,梁智辉.实用免疫学实验技术[M].武汉∶湖北科技出版社,2002∶29-35.

[3] 巴德年.当代免疫学技术与应用[M].北京∶北京医科大学/中国协和医科大学联合出版社,1989∶303-135.

[4] 梅龙,董晓慧,段刚,等.参芪注射液对H22荷瘤小鼠抑瘤作用的细胞免疫机制[J]. 西安交通大学学报(医学版),2007,28(3)∶279-282.

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1671-8194（2013）13-0076-02

*通讯作者：E-mail:273395862@qq.com