贲门癌组织中Midkine蛋白的表达及其临床意义

呼秀峰 姚 俊 冯笑山* 茹 艺 刘 刚

（河南科技大学第一附属医院肿瘤中心，河南 洛阳 471003）

贲门癌组织中Midkine蛋白的表达及其临床意义

呼秀峰 姚 俊 冯笑山* 茹 艺 刘 刚

（河南科技大学第一附属医院肿瘤中心，河南 洛阳 471003）

目的 检测贲门癌组织中 Midkine 蛋白表达情况，探讨 Midkine 蛋白与贲门癌生物学行为的关系及意义。方法 采用免疫组织化学SP 法检测 Midkine 蛋白在正常贲门黏膜、贲门不典型增生组织、贲门癌组织中的表达情况，将检测结果与贲门癌临床病理资料进行统计学分析，并对所有病例进行随访，探讨其与贲门癌预后的关系。结果 Midkine 蛋白在贲门癌中表达上调，且表达率（76.4%）显著高于贲门不典型增生组织（26.9%）及正常贲门黏膜（5%），其表达强度与患者年龄、性别、肿块大小、组织分化程度无关（P ＞ 0.05），而与浸润深度、淋巴结转移及预后正相关，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。结论 Midkine 蛋白高表达显示贲门癌恶性程度高、分期晚、预后不良 ; Midkine 蛋白在贲门癌的发生、发展中起重要作用。

贲门肿瘤；Midkine 蛋白；免疫组织化学；预后

贲门腺癌（Gastric cardiac adenocinoma GCA）是上端胃临近食管部位发生的腺癌，流行病学调查显示其发病率呈逐年上升趋势，是增长速度最快的恶性肿瘤之一[1]。近年来贲门癌的诊断及治疗方面取得较大进展，但由于缺乏敏感、特异的早期诊断指标，所以贲门癌仍是预后差，病死率相当高的恶性肿瘤之一。Midkine蛋白（MK）是一种肝素结合性生长因子，通过促细胞增殖及血管生成、诱导细胞恶性转化、抗凋亡等功能影响恶性肿瘤细胞的生长增殖、分化凋亡，与恶性肿瘤的发生密切相关。研究显示，Midkine蛋白在肝癌、胃癌、结直肠癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌、神经母细胞瘤等许多恶性肿瘤中过表达，并与肿瘤浸润及预后密切相关[2]，但MK在贲门癌中的表达尚未见报道。本研究采用免疫组织化学方法（SP法）对贲门癌组织中Midkine蛋白表达情况进行检测，分析其在贲门癌中的表达及与临床病理的关系，探讨其在贲门癌发生发展及侵袭、转移中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

72例贲门癌均取自2007年～2009年河南科技大学第一附属医院病理科手术切除后经病理诊断明确的存档蜡块。其中贲门癌组织72例，男56例，女16例，平均年龄（55.4±7.56）岁。癌旁不典型增生组织26例，男17例，女9例，平均年龄（54.2±7.9）岁。距癌组织10cm以上癌旁正常组织40例，男28例，女12例，平均年龄（55.3±8.3）岁。患者术前均未接受放疗和化疗。

1.2 主要试剂

兔抗人Midkine蛋白多克隆抗体购自SantaCruz公司，抗兔及抗鼠SP超敏试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3 方法

将原石蜡包埋的蜡块作4μm切片，每例作连续切片5张，分别作HE染色、Midkine蛋白和syndecan-1免疫组织化学SP法染色，2片备用。各组织切片常规脱蜡及水化后，依次按说明书完成免疫组化染色各步骤。用已知阳性对照片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判断

阳性结果判断标准：Midkine蛋白阳性染色定位于细胞膜和（或）细胞质内。凡细胞质和/或细胞膜出现清晰的棕黄色染色的细胞即为阳性细胞。先在低倍镜下观察，随机读取5个高倍视野下的阳性细胞数。并将阳性细胞计数分为四个等级，分别为：无阳性细胞计0分，≤25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分。并将着色强度分为三个等级分别为：无色计0分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。最后将两项评分相乘，得出结果并分为四个等级：0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（+），3～4分为中度阳性（++），大于4分则为强阳性（+++）。

1.5 统计学处理

采用SPSS17.0统计软件包作统计分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，生存分析应用单变量Log-rank检验。

2 结 果

2.1 MK的表达

MK在正常贲门黏膜组织中多呈阴性表达，少部分为弱阳性，阳性率为5.0%。MK在贲门癌组织中的表达呈细胞浆或膜分布，阳性信号为棕黄色颗粒，阳性率为76.4%（55/72），显著高于在贲门不典型增生组织及贲门正常组织中的表达，三者相比结果具有明显差异（P＜0.01）（表1）。

表1 不同贲门黏膜组织中Midkine蛋白的表达

2.2 Midkine蛋白表达与贲门癌临床病理学特征关系

72例贲门癌中MK的阳性表达表达率为76.4%。MK的表达与TNM分期（χ2=12.231，P＜0.05）、有无淋巴结转移（χ2=8.50，P＜0.05）及浆膜浸润（χ2=5.073，P＜0.01）显著相关，差异有统计学意义；其表达与患者年龄、性别、肿块大小、组织分化程度无关（P＞0.05）（表2）。

2.3 贲门癌组织中Midkine蛋白表达与预后的关系

本组患者随访时间为48个月，72例贲门癌患者中，Midkine蛋白阳性表达患者中位生存时间为27.0个月，3年生存率为37.5%。Midkine蛋白阴性表达组的中位生存时间及3年生存率均高于Midkine蛋白阳性表达组（P=0.029）。经检验Midkine蛋白与患者预后相关，即Midkine蛋白阴性患者总体生存期长，见。

3 讨 论

表2 Midkine蛋白表达与GCA临床病理学特征关系

贲门癌是一种在胃贲门部发生的恶性肿瘤，是我国北方地区常见的消化道恶性肿瘤之一，流行病学调查显示其发病率呈逐年上升趋势，是增长速度最快的恶性肿瘤之一[3]。在西方国家，随着远侧部胃癌发病率的逐年下降[4，5]，贲门腺癌的发病率已接近全部胃癌的50%[6]。流行病学和人群研究提示，贲门癌的诱发因素、病理特征、以及临床特征与胃远侧部位肿瘤明显不同[7]。肿瘤侵袭、转移的机制很复杂，是多阶段、多步骤、多因素、多基因的发展过程，近年来虽然贲门癌在诊断与综合治疗方面取得较大进展，肿瘤切除率和生存率有所提高，但由于早期症状不典型，加之缺乏敏感、特异的早期诊断指标，大多数患者就诊时已为中晚期，综合治疗后的五年生存率不超过24%[8]，因此深入研究贲门癌的发生、发展、浸润和转移机制，对于诊断及制定合理治疗方案，具有重要的理论意义和临床价值。

Midkine蛋白（MK）即肝素结合生长因子。1988年，Kadomatsu等人通过差异杂交方法在小鼠胚胎肿瘤细胞（HM-1）中发现的一种新基因，并报道其在胚胎性癌细胞分化早期强烈表达[9]。人类MK基因（MDK）定位于11P11.2上，由5个外显子和4个内含子组成。其编码蛋白质分子量为13-kDa，富含碱性氨基酸和半胱氨酸[10]。目前已发现的MK受体包括syndecan家族成员、蛋白多糖受体型酪氨酸激酶、低密度脂蛋白（LDL）、受体相关的蛋白（LRP）以及间变性淋巴瘤激酶（ALK）等[11]。研究显示MK具有多种生物学功能，与多种疾病的发病有关，然而MK最引人注目的特点是其在癌症晚期频繁并且强烈表达[2]。MK在癌变过程中显示肿瘤的相关活性，包括转化、纤维蛋白溶解、细胞转移、细胞存活、抗凋亡等作用，但是到目前为止，MK促进肿瘤生长的确切的作用机制尚不清楚[12]。研究显示MK在许多恶性肿瘤如食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、wilms瘤、神经母细胞瘤及硬脊膜瘤中高频率、高强度表达，并与肿瘤发展进程及严重程度密切相关[13]。Obata等[14]报道，胃贲门癌患者血清中MK含量显著提高，而且晚期癌的血清MK含量高于早期瘤。赵志国等[15]报道胃贲门癌组织中MK表达阳性率达76.6%，其表达水平与胃贲门癌的浸润深度、淋巴结转移、临床分期及微血管密度密切相关，与患者年龄、肿瘤的大小、性别，胃贲门癌分化程度无关，患者血清中MK水平亦明显高于正常人。然而，MK在贲门癌中的表达尚未见报道。本研究显示，在72例贲门癌患者中有55例Midkine蛋白过度表达，阳性率为76.4%。贲门癌组织中Midkine蛋白的阳性表达显著高于癌旁正常组织（χ2=52.437，P＜0.01），与文献报告的胃癌Midkine蛋白表达率一般在65%～80%相仿，（III+Ⅳ）期贲门癌组织中MK阳性表达率显著高于（I+II）期（χ2=12.630，P＜0.05），有淋巴结转移组MK阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（χ2=8.5，P＜0.05）。有浆膜浸润组MK阳性表达率高于无浆膜浸润组（χ2=5.073，P＜0.01）。结果显示Midkine蛋白过表达患者往往分期较晚，预后较差，提示Midkine蛋白可能促进肿瘤细胞增殖、浸润及转移。研究未能发现MK表达与年龄、性别及肿瘤细胞分化程度的相关性。

由于MK受体种类繁多，多种受体可能单独或联合调节MK生物活性，这些受体之间的相互作用及复合物组成的详细情况尚未见确切报道，所以目前还不清楚它们之间通过怎样的机制相互作用，值得我们进一步研究。综合本实验结果认为MK可能与胃贲门癌的发生、发展有关，并能反映出胃贲门癌组织的恶性程度及侵袭能力，提示可作为胃贲门癌早期诊断及预后分析的指标之一，在临床诊断及指导术后治疗方面有一定价值。

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R735.2

：B

：1671-8194（2013）10-0083-03

洛阳市新技术研发计划项目（编号：NO.1002238B）

*通讯作者：E-mail： 1009574887@qq.com