参芪扶正注射液对小鼠腋下种植瘤及肝转移灶的影响

周柯鑫 陈晓衍

（北京中医药大学东直门医院，北京 100700）

参芪扶正注射液对小鼠腋下种植瘤及肝转移灶的影响

周柯鑫 陈晓衍

（北京中医药大学东直门医院，北京 100700）

参芪扶正注射液；小鼠；腋下种植瘤；肝转移灶

参芪扶正注射液是一种免疫功能调节剂，对化疗药物有显著的增效减毒作用，其作用机理一直受到医药界的高度重视。目前正在进行作用靶标的基因组学和蛋白质组学的深入研究。

由于参芪扶正注射液是一种多效应的物质库，所以，本药效价将体现中药复方多靶点、多层次的作用特点，这给本药的机理研究带来一定的难点和热点。本实验就不同的治疗干预方案，深入研究肿瘤细胞的病理学变化特点，从而寻找参芪扶正注射液的作用靶位。

1 材料与方法

表1 小鼠皮下种植瘤生长情况（g、cm）

1.1 材料

①小鼠：小鼠为4～6周龄体质量20～24g的雄性BALB/C小鼠（由北京维通利华实验动物技术有限公司提供），在II级动物实验室饲养。②细胞液：选用小鼠结肠癌C26细胞株（美国引进，广安门医院肿瘤实验室惠赠）。经3次皮下接种传代后，无菌条件下摘取瘤体，生理盐水洗涤，剪成小块，匀浆，离心后取沉淀，反复3次，培养于10%新生牛血清和RPMI1640培养液（含青霉素100单位/mL、链霉素100单位/mL），置37℃、含5%CO2培养箱中3天，每日换液。将细胞液机械吹打成单个细胞，离心取沉淀，加生理盐水调整细胞浓度为6 ×105/mL，观察细胞活力＞95%，备用。③光镜：Leica公司生产（德国制造）。TYPE：020-519.511 DM LB 100T。④电镜：天美科技有限公司（日本制造）。TYPE：日立H-7650。⑤参芪扶正注射液（浓缩液）：丽珠集团利民制药厂提供。⑥5-氟脲嘧啶（5-Fu）：上海旭东海普药业有限公司生产，产品批号060402。

1.2 分组

取小鼠16只，分为皮下注射和脾内注射两组，每组8只。又随机分为4组，每组2只。①参芪扶正注射液组（简称参芪组）。②5-Fu化疗组（简称化疗组）。③参芪扶正注射液+5-Fu组（简称联合组）。④造模后未予治疗组（简称对照组）。

1.3 动物造模

①皮下注射：注射区常规消毒后，将0.2mL瘤细胞液注射于小鼠右腋下皮下。②脾内注射：小鼠称重，以0.5%戊巴比妥钠（50mg/ kg）腹腔内注射麻醉，3～5min后麻醉成功，取左侧腋后线肋缘下纵行切口，长约0.5～1cm，安尔碘皮肤消毒，进腹后于腹外侧找到柳叶状脾脏，牵出腹腔外，用1mL注射器从脾下极进针，将瘤细胞液0.2mL注射于脾内，拔针后，酒精棉球压迫注射部位1～2min，0号丝线依次间断缝合肌肉、皮肤关腹。术后继续在II级动物实验室饲养。

1.4 干预治疗

①参芪组和联合组造模5d后，给予参芪扶正注射液0.15mL（相当于生药160mg，为成人用量的12倍），加生理盐水稀释至0.5mL，腹腔内注射，隔日一次，共5次。②化疗组和联合组造模5d后，给予5-Fu 0.02mL（0.5mg），加生理盐水稀释至0.2mL，腹腔内注射，隔日一次，共3次。

小鼠造模后自由进食水，每日每只小鼠给生瓜子约1g，每日记录体质量及活动情况。

1.5 取材及标本制备

①皮下注射造模组：造模前每只小鼠称重。造模后25d，脱颈椎处死小鼠，称重。常规消毒后取右腋下切口约2cm，打开皮肤后见色灰白瘤体，表面血管丰富，中间有软化灶，边界清楚，将瘤体完整取下，用游标卡尺测瘤体长径、宽径；用电子秤称重，取0.2cm直径标本放入电镜固定液中，其余放入10%甲醛固定，备用。②脾内注射造模组：造模前每只小鼠称重。造模后13d，脱颈椎处死小鼠，称重。常规消毒后取腹正中切口约3cm。进腹后找到肝脏，肉眼观察肝脏内转移癌情况，可见肝脏各叶散在转移灶，大者米粒大小，小者如针眼大。取最大转移灶，用游标卡尺测长径、宽径，用电子秤称重。取0.2cm直径放入电镜固定液，其余瘤体连同部分周围肝组织放入10%甲醛固定，备用。

表2 小鼠肝转移瘤生长情况（g、cm）

表3 各组瘤体切片光镜下改变

2 结 果

2.1 小鼠瘤体生长情况

①皮下注射组小鼠瘤体生长情况，见表1。②脾内注射组肝转移瘤生长情况，见表2。

2.2 病理学改变

①光镜检查：光镜下观察各组小鼠肿瘤细胞形态、核分裂像数目、瘤细胞坏死面积、癌周淋巴细胞及中性粒细胞数量、转移瘤周围肝脏组织变性坏死情况，结果发现化疗组肿瘤坏死面积大，肝脏组织变性坏死较重，而参芪组和联合组坏死程度较轻，其他未见明显差异（表3）。因样本数较小，无统计学意义。②透射电镜：超微结构变化如下：癌细胞核染色质凝聚，部分呈微筛孔改变。细胞膜内陷，线粒体数量明显减少，多数肿胀，嵴减少或断裂，甚至消失，有不同程度的变性，部分线粒体呈空泡状。参芪组细胞破坏较轻。见图1。

3 讨 论

3.1 小鼠瘤体生长和转移情况

①皮下注射组小鼠造模后25d处死。4组小鼠体质量有明显差异，参芪组和对照组较造模前体质量略有增加，平均增加1.36g；化疗组和联合组小鼠体质量明显降低，化疗组平均每只下降3.3g、联合组平均下降2.55g；各组瘤重差距不明显，参芪组瘤重平均6.35g，化疗组平均5.15g、联合组平均6.3g、对照组平均6.49g。由表1所见，参芪扶正注射液对小鼠有一定的保护作用，与化疗组对比，荷瘤小鼠体质量无下降，瘤重较化疗组为轻，自然生长状态较活跃。②肝转移瘤情况：8只小鼠脾内注射C26癌株，但未切脾。脾内种植瘤生长迅速，小鼠生存期较短，种植后13天即处于濒死状态。本组小鼠均发生肝转移，其中全部联合组小鼠、部分参芪组较化疗组肝转移瘤体较小，无法单独称重，说明参芪扶正注射液有一定的抑制肝转移的作用。

图1 6号电镜

3.2 病理学检查

送检各组小鼠进行光镜及电镜检查。光镜观察发现化疗组肿瘤坏死面积较大，肝脏组织坏死变性较重，而参芪组和联合组细胞破坏情况较轻；电镜观察癌细胞中单位体积细胞质中线粒体的膜面积和数目明显减少，但参芪组线粒体膜面积和数目减少较其他组程度轻，说明参芪扶正注射液对机体组织有一定的保护作用。因样本数较少，尚需进一步深入研究。

R735.7

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：1671-8194（2013）10-0075-03