不同体质SD大鼠在脑缺血再灌注损伤后血清中VEGF的表达

刘健威

（辽宁中医药大学2010级研究生课程进修班，辽宁 沈阳 110032）

不同体质SD大鼠在脑缺血再灌注损伤后血清中VEGF的表达

刘健威

（辽宁中医药大学2010级研究生课程进修班，辽宁 沈阳 110032）

目的 探讨不同体质SD大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后血清中VEGF的表达。方法 构建寒、热、常体等3中不同体质的SD大鼠模型，给予急性局灶性脑缺血再灌注损伤，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同体质大鼠脑缺血再灌注 24h 后血清中 VEFG 的表达情况。结果 不同体质大鼠在脑缺血再灌注 24h 后血清中 VEGF 均有表达，3 种体质大鼠 VEFG 表达与假手术组比较，C、D 两组差异明显（P＜ 0.05），寒体质大鼠血中 VEGF 表达与其他两种体质大鼠比较，血清中 VEGF 表达水平低（P＜ 0.05）。结论 不同体质 SD 大鼠脑缺血再灌注损伤后，血清中 VEGF 均有表达，寒体组 VEFG 表达水平明显低于其他体质组，说明寒体组大鼠预后较差。

体质；VEGF；脑缺血再灌注

中医学强调“不治已病，治末病”。近年来，随着对中医文献的信息挖掘，有很多学者发现单纯“辨证论治”不能全面地概括中医的诊疗模式。提出“辨体—辨证—辨病”诊疗模式[1-3]。其中，“辨体”将人作为研究的主体，指出人的体质对相关疾病的诊断、治疗、预防以及对亚健康的干预具有独特的优势。这一诊疗模式的提出，促进了现代中医学对中医体质学说的研究。近年来随着对中医体质的研究不断深入，认为中医体质与脑卒中的发病关系存在一定的关系[4]。本文通过酶联免疫吸附法检测不同体质SD大鼠脑缺血再灌注损伤后24h血清中VEGF的表达水平，探讨不同体质对脑卒中的影响，为临床脑卒中的治疗提供一点理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

清洁级SD大鼠，雌雄各半，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。将经过四代体质强化繁育后的大鼠，寒性体质中随机选取10只作为寒体组；热性体质中随机选取10只作为热体组；常性体质中随机选取10只作为常体组；另随机选取10只未经过体质筛选的SD大鼠作为假手术组。

1.2 寒、热、常体大鼠模型的建立

根据匡调元《中医实验病理学》的理论，复制3种不同体质的SD大鼠模型[5]。具体步骤如下：①根据大鼠肛温高低，自然状态下筛选寒、热、常体三种体质的SD大鼠（185±50）g，每组各30只。按体质类型及性别分笼饲养。寒性体质大鼠0.5mL/（只·d），黄连解毒汤煎液灌胃，热性体质大鼠0.5mL/（只·d），附子理中汤煎液灌胃，常体质大鼠0.5mL/（只·d），生理盐水灌胃，时间为1个月[6]，达到对不同体质大鼠进行体质强化的效果。1个月后同组之间雌雄大鼠进行交配，所产子代大鼠按体质类型及性别继续分笼饲养至体质量（185±50）g时，各组子代采用上述同样方法分组给予灌胃处理，重复亲代大鼠体质强化过程并且1个月后继续进行交配，以进一步强化培育体质表象，直至子四代鼠体质量（185±50）g时，进行脑缺血再灌注模型制备。

1.3 脑缺血再灌注模型制备

三种体质组大鼠参照Longa法，采用改良的血管内栓线技术制备大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型[7]。在室温（22 ℃）条件下，10%水合氯醛（330 mg/kg）腹腔麻醉，消毒颈部皮肤，沿颈正中线做一长度约2 cm的切口，仔细钝性分离暴露出右侧颈总动脉（CCA）、右颈外动脉（ECA）和右颈内动脉（ICA）。在ECA远端距CCA分叉3 mm处结扎ECA。再用电凝器在结扎点远心端电凝ECA，用眼科手术剪在结扎点和电凝点之间剪断ECA。然后将ECA向鼠尾方向牵拉，使ECA和ICA成一条直线。动脉夹夹闭CCA近心端和ICA远心端，在ECA结扎点前端剪一“V”形小口，缓慢将栓塞线经ECA插入ICA，打开ICA远心端的动脉夹。根据栓塞线上的标记，判断栓塞线插入的深度。当CCA分叉进入栓塞线1.9 cm处标记，在“V”形切口近心端结扎ECA，使栓塞线和ECA固定在一起。剪断各结扎点上的手术线，消毒并逐层缝合切口，将栓塞线多余的部分缝合在创口之间，暴露于皮外。栓塞2 h后，缓慢拔出尼龙线进行再灌注。假手术组在同等手术环境下，只作颈部皮肤切开以及血管暴露，然后给予缝合。

1.4 标本采集

脑缺血再灌注模型制作成功24h后，各组大鼠经断髓处死后，均采用腹主动脉才学进行血清标本采集，无菌条件下采集5mL/只，放于促凝管中，室温放置2h，低温离心机3000转/min，离心10min，用移液器吸取上清液，放入EP管中，-80℃冰存，待用。

1.5 指标检测

各组采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清中VEGF的含量。

1.6 统计学方法

数据以均数±标准差（χ—±s）表示，采用SPSS10.0统计软件的单因素方差分析进行统计处理。

2 结 果

表1 各组大鼠脑缺血再灌注24h后血清中VEGF含量（χ—±s)

不同体质大鼠在脑缺血再灌注24h后血清中VEGF均有表达，且3种体质大鼠与假手术组比较，B组表达水平低，P＞0.05,不具有统计数意义；C、D两组表达水平均较高，P＜0.05具有统计学意义。不同体质组大鼠组间比较，寒体组VEGF表达最低，与其他两组比较存在明显差异，P＜0.05具有统计学意义。提示不同体质SD大鼠脑缺血再灌注损伤后，血清中VEGF均有表达，寒体组VEFG表达水平明显低于其他体质组，说明寒体组大鼠预后较差。见表1。

3 讨 论

血管内皮生长因子（VEGF）是一种是高度保守的同源二聚体糖蛋白，由两个亚基以二硫键相联而成。它以特异的旁分泌方式作用于血管内皮细胞[8]。其具有促使内皮细胞增殖、迁移，诱导新生血管的生成，并可显著增加微血管的通透性的功能。有研究表明当大鼠大脑缺血再灌注损伤后，可以诱导VEGF表达增强在梗死灶周围可见VEGF免疫阳性着色血管，说明VEGF可以促进血管的增生[9]并能减轻缺血造成的神经细胞损害[10]。

中医理论认为疾病的发生与正气盛衰有关。《素问·刺法论》“正气存内，邪不可干。”而正气是由体质产生，现代中医研究表明体质是发病的内在依据，体质的不同人群在脑卒中的发生率上存在明显差异。在缺血性脑卒中的患者内中医体质类型多以气虚质、阴虚质和痰湿质为多[11]。中医理论认为“因人制宜”是根据不同个体的体质特点，制定适宜的治疗、预防、保健等措施。体质对于个体而言具有独特性。

本实验通过探讨不同体质SD大鼠急性局灶性脑缺血再灌注后血清中VEGF的表达，试论不同体质对实验性大鼠脑缺血再灌注损伤后的恢复是否有一定的影响。通过实验发现在不同体质SD大鼠中，当脑缺血再灌注损伤24h后，寒体组的血清中VEGF的表达水平明显低于其他体质组表达水平。可以推测当寒体组大鼠发生脑缺血再灌注后，由于VEGF表达水平较低使得缺血区域内新生血管数量减少不利于脑缺血再灌注后缺血区域的恢复。本实验验证了不同中医体质对疾病恢复存在差异。为从调节体质角度达到对疾病预防治疗目的，提供了一定的实验基础。

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[5]匡调 元 .中医 实 验 病 理 学 [M].上 海 :上 海 科 学 普及 出版社 ,1995: 105-115.

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The Different of Constitution of SD Rats Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury Serum VEGF Expression

LIU Jian-wei
(2010 Postgraduate Course, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110032, China)

ObjectiveTo investigate the different physical SD rats acute focal cerebral ischemia reperfusion serum VEGF expression.MethodsCold, Heat, Normal body 3 different physical build SD rat model, given the acute focal cerebral ischemia-reperfusion injury, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect different constitution rat brain ischemia after 24h of reperfusion the serum VEFG the expression.ResultsPhysique rats 24h after reperfusion serum VEGF expression in cerebral ischemia, three kinds the physique expression of rat VEFG in comparison with the sham group differences are significant (P＜0.05), cold constitution rats blood in the expression of VEGF and The other two physical rats, serum VEGF levels (P＜0.05).ConclusionThe physique SD rat brain after ischemia-reperfusion injury, serum VEGF expression, the cold body the group VEFG expression levels were significantly lower than that of other physical group, cold body of rats with poor prognosis.

Constitution; VEGF; Cerebral ischemia

R541

：B

：1671-8194（2013）10-0051-03