苗药秤钩风中青藤碱的提取工艺研究

徐定平

（湖北省恩施土家苗族自治州中心医院，湖北 恩施 445000）

苗药秤钩风中青藤碱的提取工艺研究

徐定平

（湖北省恩施土家苗族自治州中心医院，湖北 恩施 445000）

目的 研究苗药秤钩风中青藤碱的最佳提取工艺，扩展土家苗药的应用领域。方法 以酸碱法提取苗药秤钩风中的青藤碱成分，考察提取溶剂用量、提取酸液的 pH、碱化液的 pH 和碱化时间对青藤碱提取率的影响，用高效液相色谱法测定含量。结果 对秤钩风中青藤碱的提取率的影响因素大小依次是提取溶剂 pH 值、碱化 pH 值、提取溶剂用量，最佳的提取工艺为以 1 ∶ 10 的量加入 pH 为 3 的提取溶剂，碱化的氨水 pH 值为 8。结论 以最佳提取工艺提取的青藤碱含量稳定，该方法合理可行。

秤钩风；青藤碱；正交实验；最佳提取工艺

苗药秤钩风系防己科秤钩风属秤钩风Diploclisia affinis （Oliv.）Diels的木质茎和根，又名穿墙风、九层皮和追骨风等，湖北省恩施土家苗族自治州是其主要分布产地之一[1,2]。秤钩风性味苦寒，具有祛风除湿，清热解毒，活血，利尿等功效，民间常用于治疗风湿骨痛、 尿路感染、毒蛇咬伤等症[2,3]。有研究表明，其藤茎中含有多种化学成分如三萜、三萜皂苷、生物碱、蜕皮甾酮等，青藤碱是其中一种生物碱成分[4,5,6]。青藤碱具有显著的镇静、镇痛、消炎、抑制免疫和降血压等作用，是一种效果好、副作用小的非甾体类消炎止痛药物，并有望用于戒除药物成瘾性的治疗[7,8]。本研究通过考察不同因素对苗药秤钩风中青藤碱提取率的影响，筛选出最佳的提取工艺，为其进一步研究提供参考依据。

1 仪器与材料

1.1 供试材料

秤钩风采集于湖北省恩施土家苗族自治州利川市汪营镇，经恩施州药检所鉴定为防己科秤钩风属植物秤钩风（Diploclisia aff inis（Oliv.）Diels）。

1.2 仪器

RE252A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SH22D（Ⅲ）循环水式真空泵（郑州长城科工贸易有限公司）；GU21901双光束紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电子分析天平（日本岛津AUW120D，十万分之一）；waters高效液相色谱仪（Waters515泵，2487检测器）等。

1.3 药物与试剂

色谱乙腈（美国TE-DA），色谱甲醇（美国TEDA），其他试剂如浓氨试液、石油醚、氯仿、甲醇等均为分析纯；含量测定用青藤碱对照品（中国药品生物制品检定所,批号:0774-9904）。

2 实验方法建立

2.1 青藤碱的提取工艺

秤钩风干燥根茎粉碎，过40目筛，备用。精密称取秤钩风粉末50g，加石油醚浸泡24h，过滤。滤渣用一定pH值的酸水提取12h。提取3次，过滤，滤液浓缩后加甲醇溶解，以一定pH值的氨水碱化2h，过滤，保留浸膏，加甲醇溶解，以氯仿萃取，挥去溶剂，得青藤碱粗提取物。

2.2 检测方法的建立

2.2.1 色谱条件

ODS-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；水（用磷酸及三乙胺调整pH至7.8）：乙腈（40∶60）；柱温：室温；流速：1.0mL/min；检测波长：262nm；进样量：10μL。

2.2.2 标准品溶液的配制

精密称取60℃下干燥至恒重的青藤碱对照品5mg，置25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得0.2mg/mL的标准品溶液。2.2.3 标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液0.5、1、2、4、6、10mL的标准品溶液分别至10mL棕色容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，经0.45μm微孔滤膜滤过后按照2.2.1项下色谱条件进样，以峰面积A对进样浓度C进行线性回归，得A=10114.6C+9833.7，r=0.9997。表明青藤碱浓度在10～200μg/mL的范围内线性关系良好。

2.2.4 精密度实验

精密吸取浓度为40μg/mL的青藤碱对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜滤过后按照2.2.1项下色谱条件进样6次，每次3针，计算平均峰面积的RSD为1.05%，显示一起的精密度良好。

2.2.5 稳定性实验

精密吸取浓度为40μg/mL的青藤碱对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜滤过后分别于2、4、6、8、12、16、20、24h进样，每次进样3针，计算平均峰面积的RSD为0.92%，显示青藤碱溶液在24小时内稳定。

2.3 正交实验设计

根据预试验结果，对青藤碱提取率影响较大的因素包括提取溶剂用量（A）、提取溶剂酸水pH值（B）、碱化pH值（C），且提取溶剂的pH值和碱化的pH值分别应在2～4，8～10的范围内。采用正交实验的方法L9（34），每个因素选取3个水平进行试验（表1）。

表1 正交实验的因素和水平

3 结果与分析

3.1 正交实验结果分析

正交实验结果见表2。由表2的极值R可以看出3各因素对青藤碱提取率的影响，其影响主次顺序是B＞C＞A，即主要的影响因素是提取液酸水的pH值，其次是碱化pH值和提取溶剂用量，并得出该正交实验的最佳组合是A2B2C2。对表2中的数据进行方差分析，表明各因素对青藤碱的提取率的影响有显著性意义，即提取溶剂用量和pH、碱化溶剂的pH均对青藤碱的提取率有较大影响。

3.2 正交实验结果验证实验

按照最佳工艺条件进行5批验证试验，即精密称取秤钩风粉末50g，加石油醚浸泡24h，过滤。滤渣用500mL pH3的酸水提取12h，提取3次，过滤，滤液浓缩后加甲醇溶解，以pH8的氨水碱化2h，过滤，保留浸膏，加甲醇溶解，以氯仿萃取，挥去溶剂，得青藤碱粗提取物。粗提取物加甲醇溶解后过0.45μm微孔滤膜后进样，按2.2.1项下色谱条件测定其含量，计算青藤碱的提取率分别为0.033%，0.031%，0.035%，0.033%，0.036%，其平均值为0.0336%，即秤钩风中青藤碱的含量约为0.336mg/g。实验结果比较稳定，与正交实验结果接近。

表2 L9（34）正交实验结果

表3 方差分析结果

4 讨 论

本实验对秤钩风碎末用石油醚做了脱脂处理，降低了脂溶性物质对实验结果的影响，采用酸碱法针对青藤碱这一生物碱成分进行了提取和精制，并以氯仿萃取洗去杂质，使得粗提取物中青藤碱含量较高。此外本实验以高效液相色谱法测定粗提取物中生物碱的含量，此法更为灵敏，简单可靠，在实验中较紫外法可以更好的排除其他物质的干扰。

[1]方志先.湖北恩施药用植物志[M].武汉:湖北科学技术出版社, 2006.

[2]中国科学院华南植物研究所.广东药物志[M].广州:广东科技出版社,1987:36.

[3]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社, 2006.

[4]Miller RW,Clardy J,Kozlowski J,et al.Phytocedy steroids of Diploclisia glaucescens[J].Planta Med,1985,51(1):40-42.

[5]Jayasinghe ULB,Wannigama GP,Macleod JK.Glucuronides of Diploclisia glaucescens[J].J Chem Soc Pakistan,1998,20(2):131-137.

[6]Bandara BMR,Jayasinghe ULB,Karunaratne V,et al.Triterpenoidal constituents of Diploclisia glaucescens.[J].Planta Med,1990, 56(3):290-292.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:155-158 .

[8]Lei HM,Zhu R,Weil X.Chemical constituents of Patrinia heter ophylla[J].Chin Pharm J,1997,32(5):2712-2731 .

Study on the Optimum Extraction Process of Sinomenine Existed in Miao Medicine Named Diploclisia Affinis

XU Ding-ping
(Central Hospital of Enshi Tujia and Miao Autonomous Prefecture, Enshi 445000, China)

ObjectiveTo study the optimum extraction process of sinomenine which exist in Miao medicine named Diploclisia affinis,and to extend the applications of minority medicine.MethodsUsing Acid-alkali method to extract sinomenine from the Diploclisia affinis,investigating the effects of extract solvent’s dosage and pH value,the alkalify solvent’s pH value on extraction rate of sinomenine,HPLC was used as detection method.ResultsFactors influencing sinomenine’s extraction rate followed a descending order of extract solvent’s pH value, alkalify solvent’s pH value and extract solvent’s dosage. It showed that the optimum extraction process was extract solvent’s pH value was 3,lkalify solvent’s pH was 7 and extract solvent’s dosage was 1∶10.ConclusionWhen applied the optimum extraction process to extract the sinomenines,the extraction rate was stability and closed to the orthogonal experimental results.The extraction method is rational and feasible.

Diploclisia affinis; Sinomenines; Orthogonal experiment; The optimum extraction process

R284.1

：B

：1671-8194（2013）08-0030-02