GP73、AFU 及AFP 联合检测在原发性肝癌诊断中的应用

马丽敏，贾德兴，冯静，李萍

(1.潍坊医学院;2.潍坊市人民医院感染科，山东 潍坊 261041)

原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高、侵袭性强、死亡率高，严重影响患者的生活质量，近年来发病率有上升趋势，但临床发现时往往已是晚期，失去最佳治疗时机，因此早发现、早治疗对提高患者生存率具有重要意义，甲胎蛋白(alpha－fetoprotein，AFP)作为HCC 高特异性、高灵敏性指标在临床上占有一席之地，目前在临床上HCC 的诊断中得到广泛应用，但在检测早期肝癌或者小肝癌时亦存在一定的假阴性［1］。因此寻找新的肿瘤标记物迫在眉睫，近年来研究发现a－L－岩藻糖苷酶(α－L－fucosidase，AFU)及高尔基体蛋白73 (GP73)在肝癌患者血清中过度表达，多种研究显示在AFP 阴性的肝癌患者中活性亦明显增加，可作为HCC 早期诊断的血清学指标［2－3］。本研究通过检测血清中AFP、GP73 及AFU 的含量进而探讨三者联合检测在HCC 的诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 检测对象 将研究对象共分为4 组:原发性肝癌组、乙型肝炎肝硬化组、慢性乙型肝炎组及健康对照组，各组对象均来自2012 年1 月至2013 年7 月在潍坊市人民医院住院、门诊患者及健康查体者，其中原发性肝癌组48 例，男30 例，女18 例，平均年龄(53.76 ±12.58)岁，乙型肝炎肝硬化组60例，男42 例，女18 例，平均年龄(53.23 ±11.15)岁，慢性乙型肝炎组60 例，男44 例，女16 例，平均(47.34 ±9.87)岁，健康查体组60 例，男33例，女27 例，平均(52.53±11.67)岁。

1.2 诊断标准 HCC 诊断符合2001 年9 月第8 届全国肝癌学术会议修订的诊断标准［4］，慢性乙型肝炎和肝硬化的诊断参照2001 年全国肝病学会指定的《病毒性肝炎防治方案》和2011 年中华医学会、中华医学会感染病学分会共同讨论修订的《慢性乙型肝炎防治指南》。

1.3 检测方法

1.3.1 所有研究对象均抽取清晨空腹血3 mL 置于生化管中，统一离心(3000 r/min，离心半径15 cm)分离血清，并于当天检测。

1.3.2 试剂与方法 AFP、GP73 及AFU 均采用酶联免疫分析(ELISA)法进行检测，三者试剂盒分别由上海科华生物工程股份有限公司、北京热景生物技术有限公司提供、武汉贝茵莱生物有限公司提供。

1.3.3 判定标准 AFP ＞20 μg/L，GP73 ＞150 ng/mL，AFU ＞24 U/L 为阳性。

2 结 果

2.1 各组检测对象血清中AFP、GP73、AFU 检测结果，见表1。HCC 组三项指标均明显高于后3组，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

表1 各组检测对象血清中AFP、GP73、AFU 检测结果()

2.2 各组检测对象AFP、GP73 及AFU 阳性率及三者联合检测阳性率 各指标在HCC 组阳性率均明显高于肝硬化组、肝炎组及健康查体组，经统计学分析P ＜0.05，差异有统计学意义。在HCC 组三项指标单独检测GP73 阳性率最高，但联合3 种检测指标对HCC 的阳性率可达95.83%，明显高于任一指标单独检测，经统计学分析P ＜0.05，差异有统计学意义，见表2。

表2 各组血清AFP、GP73、AFU 阳性率及三者联合阳性率比较

3 讨 论

HCC 是我国多发恶性肿瘤，目前为止具体发病机制尚未完全清楚，多认为其发生发展过程相当复杂，包括致癌基因激活、抑癌基因失活等多个步骤［5］，早期多无临床表现，发现时多已是中晚期从而失去最佳治疗时机，因此早发现、早诊断并及早针对性治疗可有效改善患者生活质量并提高生存率。

AFP 作为一种糖原蛋白，在胚胎时期由肝脏实质细胞和卵黄囊细胞合成，目前已作为原发性肝癌公认的最重要的血清指标，在该病的筛查、临床诊断、判断疗效及复发预测等环节中已得到广泛应用［6］。但AFP 对HCC 的灵敏性只有60%～70%，并不能达到预想的理想状态，而且在肝癌的早期尤其是小肝癌AFP 存在一定程度的假阴性，而且肝细胞在遭到损害再生过程中也会引起血清中AFP的升高［7］，在本研究中AFP的阳性率仅为64.58%。彩超、CT 及MR 检测对肝癌的诊断有较好的临床价值但均存在各自的不足，因此临床工作中需继续寻找高灵敏度和高特异性的肝癌指标以提高HCC 检出率。

GP73 是近年来发现的一种较新的血清学指标，定位于人染色体的9q 21.33，是一种跨膜蛋白，位于细胞高尔基体上。越来越多的研究证明，GP73的表达与HCC 的发生有密切关系，其敏感性和特异性均超过了AFP［8］，毛一雷［9］等首先采用Western blotting 测定HCC 患者与良性肝病患者及健康人的血清GP73 含量，提示HCC 患者血清GP73 水平显著升高，认为GP73 可成为临床上比AFP 更有效的肝癌标志物，这一结论在Hu［10］、Sun［11］等的研究中也得到证实。在本研究中GP73 在HCC 组的阳性率达83.33%，明显高于AFP 阳性率。另外，众多研究提示GP73 的表达与肿瘤大小、测试对象的年龄等因素无明显相关，虽在肝炎、肝硬化中也均有不同程度升高，但在肝癌时出现过表达，均证实其对肝癌的诊断有明确的诊断价值［12－13］。

AFU 是一种溶酶体酸性水解酶［14］，在哺乳动物的细胞、体液中广泛存在，肝肾组织中活性尤高，参与各种含岩藻糖基的各种糖脂、糖蛋白等生物活性大分子的水解代谢是其主要生物活性。近年来发现HCC 患者血清中AFU 明显升高，但对此现象的机制尚不完全清楚，但研究结论基本一致，即AFU 可作为HCC 的预测指标［15］，尤其在AFP 检测阴性和小细胞肝癌患者的诊断价值更大，本次研究由于时间等条件限制关于小肝癌暂未展开特殊分析，但在48 例原发性肝癌患者中AFU 的阳性率达75%，高于AFP，提示AFU 在HCC 的临床诊断中有一定意义。

本次研究中，HCC 组AFP、GP73、AFU 灵敏度分别为65.96%、81.63%、73.47%，阳性率分别为64.58%、83.33%、75% 而三者联合检测原发性肝癌的阳性率可达95.85%，与既往文献报道基本一致［16－18］，因此AFP 联合AFU、GP73 共同检测可提高HCC 的阳性检出率，减少漏诊，从而在HCC 的早期诊断中发挥重要临床价值。

［1］Arrieta O，Cacho B，Morales ED，et al.The progressive elevation of alpha fetoprotein for the diagnosis of hepatocellular carcinoma in patients with liver cirrhosis ［J］.BMC Cancer，2007，8 (7):28.

［2］el－Houseini ME，Mohammed MS，Elshemey WM，et al.Enhanced detection of hepatocellular carcinoma ［J］.Cancer control，2005，12 (14):248－253.

［3］Riener MO，Stenner F，LiewenH，et a1.Golgi phosphopr 0 tein2 (GOLPH2)expression in liver tumors and its value as a serummarker in hepatocellular carcinomas ［J］.Hepatology，2009，49:1602－1609.

［4］中国抗癌协会肝病专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准［S］.中华肝脏病杂志，2001，9:324.

［5］陈洪，王智，吴建.肝癌循环肿瘤细胞的研究现状［J］.临床肝胆病杂志，2011，27:796－800.

［6］王英，黄文成，朱波，等.血清肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌的诊断价值［J］.中华实用诊断与治疗杂志，2009，23 (11 ):1110－1111.

［7］徐万菊，韩玉刚，张芊，等.甲胎蛋白异质体与高尔基体蛋白73 在甲胎蛋白低浓度肝细胞癌诊断中意义［J］.中华医学检验杂志，2012，35:174－176.

［8］巢映晖，傅华群.肝癌新的血清标记物高尔基体蛋白73［J］.中华肝胆外科杂，2011，17 (12):1027－1029.

［9］毛一雷，杨华瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清标记物GP73在肝癌诊断中的初步研究［J］.中华医学杂志，2008，88(14):948－951.

［10］Hu JS，Wu DW，Liang S，et al.GP73，a resident Golgi glycoprotein，is sensibility and specificity for hepatocellular carcinoma of diagnosis in a hepatitis B－ endemic Asian population［J］.Med Oncol，2010，27 (2):339－345.

［11］Sun YL，Yang HY，Mao YL，et al.Increased Golgi protein73 expressing in hepatocellular carcinoma tissue correlates with tumoraggression but not survival ［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26 (7):1207－1212.

［12］Zinkin NT，Grall F，Bhaskar K，et al.Serum proteomics and biomarkers in hepatocellular carcinoma and chronic liver disease［J］.Clin Cancer Res，2008，14:470－477.

［13］Wang M，Long RE，Comunale MA，et al.Novel Fucosylated Biomarkers for the Early Detection of HCC ［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2009，18:1914－1921.

［14］徐天祥.联合检测血清AFU 和AFP 对原发性肝癌的诊断价值［J］.南京医科大学学报(自然科学版)，2008，28(2):242－243.

［15］Bertino G，Ardiri A，Malaguarnera M，et al.Hepatocelluar carcinoma serum markers［J］.Semin Oncol，2012，39 (4):410－433.

［16］Mao Y，Yang H，Xu H，et al.Golgi protein 73 (GOLPH2)is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma［J］.Gut，2010，59 (12):1687－1693.

［17］陶立玉.肿瘤标记物联合检测诊断肝癌的临床价值研究［J］.实用心脑肺血管病杂志，2012，20 (7):1114.

［18］许文芳，费迎明，周建康，等.血清GP73、AFP 和AFPL3 联合检测在原发性肝癌诊断中的价值［J］.中华实验和临床病毒学杂志，2011，25 (4):286－288.