自制凝血质控物稳定性及复融方式探讨

华丽姿（辽宁省朝阳市建平县医院检验科 122400）

凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶时间（TT）是临床血栓与止血以及用药监测的常用筛查项目，不仅要求报告迅速，而且要准确可靠[1]。目前多数实验室采用自制正常混合血浆代替商品质控物。其有文献报道，自制混合血浆作为实验室凝血筛查试验项目的质控物，其采集方便，制作简单，结果较稳定，精密度高，且费用低廉，特别适合基层医院[2]。本文就自制正常混合血浆稳定期限及其复融方式对结果的影响进行探讨，报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取门诊健康体检者110例，其中男55例，女55例，年龄18～85岁。无用药史，无贫血，无出血及血栓类疾病，排除妊娠或行经期女性。检测乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒抗体和人类免疫缺陷病毒（HIV）1/2抗体均阴性。

1.2 仪器与试剂 日本希森美康医用电子有限公司生产的Sysmex CA－50血凝仪；上海长岛生物技术有限公司生产的PT、APTT、TT试剂。上海长岛生物技术有限公司生产的正常质控血浆。

1.3 实验方法

1.3.1 标本采集 门诊健康体检者处于平静与空腹状态，采血要求顺利。109mmol/L枸橼酸钠作为抗凝剂，与血液按1∶9混合，采血后立即轻轻颠倒混匀，避免用力振荡。3 000 r/min离心10min，分离血浆，收集无黄疸、脂血及溶血血浆于灭菌大塑料容器中，充分混匀，避免产生气泡。取0.20mL混合血浆分装于1.5mL带盖离心管内，－80℃冰箱冰冻保存备用。

1.3.2 自制正常质控血浆定值 仪器在正常工作状态，商品正常凝血质控物在控情况下，取容器中混合血浆测定PT、APTT、TT值，连续20次，求其均值、标准差，作为混合血浆定值及取值范围。

1.3.3 自制正常凝血质控物不同复融方式测定及稳定性观察 取完全冰冻混合血浆40支，20支为一组，一组用流水冲洗复融，另一组37℃水浴复融，分别测定PT、APTT、TT。以后每天实验前37℃水浴复融一支自制凝血质控物，测定PT、APTT、TT，连续10个月，观察自制凝血质控物稳定性及测定结果的精密度。

1.4 统计学方法 使用SPSS11.5软件包对所有数据进行统计处理，各项参数以±s表示，采用t检验进行分析。

2 结 果

2.1 自制正常凝血质控物流水冲洗复融的测定结果与37℃水浴复融的测定结果差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两种复融方式3项结果比较（±s，s）

表1 两种复融方式3项结果比较（±s，s）

组别 n PT APTT TT 37℃水浴复融组20 12.4±0.31 31.1±1.10 16.3±0.47流水冲洗复融组20 12.3±0.32 31.3±1.09 16.2±0.49

2.2 自制正常凝血质控物连续测定10个月，每个月测定结果与对照比较，PT、TT在9个月后差异有统计学意义（P＜0.05）；APTT在8个月后差异有统计学意义（P＜0.05）。每个月精密度均较好，见表2。

表2 自制正常凝血质控物连续测定10个月其测定值与定值比较

3 讨 论

血栓与止血涉及临床许多疾病的发生和发展，并与临床治疗和预后有非常密切的关系。血凝4项（PT、APTT、TT、纤维蛋白原）是临床进行止血和血栓方面检查的常用筛查试验项目，报告PT、APTT和TT测定结果的同时必须报告正常对照组。因购买质控品价格昂贵，许多医院都自制正常混合血浆代替商品质控物[3]。用于质控过程的质控物最低要求包括2点：（1）具有均一性，将质控物的批内差减到最小，才能保证更好地体现检测体系的波动；（2）具有适当的稳定性[4]。在有效期内质控物的性能或浓度基本不变是质量控制的前提。

本实验结果表明，自制正常凝血质控物－80℃保存，PT和TT在9个月内稳定性较好，9个月后凝血时间延长，与对照血浆相比差异有统计学意义（P＜0.05）。APTT在8个月内稳定性较好，8个月后凝血时间也延长，与对照血浆相比差异有统计学意义（P＜0.05）。由表2可见，PT在保存6个月后，APTT在保存3个月后，TT在保存5个月后，测定值有延长趋势，这主要是因为随着保存时间的延长，凝血因子促凝活性逐渐减低，从而使PT、APTT和TT结果延长[5]。血凝标本原则上应立即检测，若不能立即检测，应将血浆贮存。在－20℃条件下可放置2周，在－70℃条件下可放置6个月[6]。本次实验把自制正常凝血质控物于－80℃深冻冰箱保存，维持新鲜冰冻血浆的凝血性质等同于新鲜血浆，保证了凝血因子、抗凝物质的活性，可至少稳定8个月。说明－80℃冰箱保存效果更好些。通过对自制正常凝血质控物的精密度观察，每个月混合血浆的PT、APTT值均符合《临床检验管理与技术规范》中规定的PT、APTT值（应在均值±15%以内），且PT、APTT的CV值均低于美国临床实验室标准化委员会所规定的CV（3.5%，5.5%），说明本实验室自制正常凝血质控物的精密度较好。自制血浆不能反复冻融，复融时从冰箱取出要迅速放入37℃水浴中并轻轻摇晃，使其迅速溶化[7]。本实验通过对流水冲洗复融与37℃水浴复融对结果的影响观察，证明采用流水冲洗复融与37℃水浴复融对结果的影响差异无统计学意义（P＞0.05）。由此说明只要遵循快速融化的原则，就能充分保存凝血因子的生物活性，从而保证PT、APTT和TT结果的稳定性。

总之，自制正常凝血质控物精密度高，使用方便，配置不需要特殊设备，且价格低廉，适合在国内实验室推广使用[8]。

[1] 孔立新，张道杰，孙黎，等.凝血检验室内质控血浆的制备与评估[J].临床检验杂志，2006，24（2）：146.

[2] 方国华，李萍，陈校锋，等.自制凝血质控品的应用与体会[J].实用医学杂志，2011，27（21）：3991－3992.

[3] 王文工，邓凤琳，马杰.用正常人混合血浆制作凝血质控物的探讨[J].中国误诊杂志，2008，8（30）：7361.

[4] 张淑琼，杨映华，孙武，等.临床凝血－止血功能检验质控物的研制与应用[J].现代检验医学杂志，2007，22（5）：115.

[5] 蒋灵霓.凝血及纤溶实验室检验的影响因素及临床应用[J].国际检验医学杂志，2009，30（2）：196－198.

[6] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京：东南大学出版社，2006：211.

[7] 葛学顺.常规凝血检查室内质控血浆的制备与评价[J].检验医学与临床，2007，4（3）：184－185.

[8] 李曼辉，杨宇勤，姚元超.健康者混合血浆制备凝血质控物及其稳定性的探讨[J].国际检验医学杂志，2011，32（7）：809.