槲皮素锗抑制多种肿瘤细胞增殖的效果分析

丁聪聪

中药配伍学理论认为，中药中的作用成分不只是微量元素和有机分子，也是微量元素与有机分子的相互结合物。医学研究结果表明，多种金属离子与槲皮素螯合而成的配合物具有较高的稳定性，能够对肿瘤细胞生长起到抑制作用。本次临床研究对槲皮素锗抑制多种肿瘤细胞增殖的效果进行了分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 试剂 氧化锗试剂，自制槲皮素，培养基为北京赛默飞世尔化学生物制剂公司生产的RPMI1640(HyClone)，Signa公司生产的四甲基偶氮唑蓝(MTT)，Signa公司生产的二甲基亚砜(DNSO)，吉诺生物医药公司生产的胰蛋白酶，杭州四季青生物技术材料公司生产的胎牛血清(低内毒素，无噬菌体)，SH40003-12链霉素、青霉素(HyClone);其他试剂选用分析纯。

1.1.2 细胞株 从中国科学院上海生命科学研究所细胞库中购买的人前列腺癌细胞PC-3、人食管癌细胞EC9706、人肺腺癌细胞SPC-A-1、人子宫颈癌细胞Hela。

1.1.3 仪器 美国Dynex公司生产的Spectra Mr全波长酶标仪，德国莱卡公司生产的倒置显微镜，美国SM公司生产的二氧化碳培养箱，苏州冯氏实验动物设备公司生产的CJ-2-F超净工作台，日本岛津公司生产的UV-240可见光-紫外光光度仪，德国耐驰公司生产的STA 409型PC/PG差热分析仪，CHN Perkins400型元素分析仪，FTS 3000红外光谱仪。

1.2 槲皮素锗的制备 甲醇50 ml，氧化锗1 mmol，槲皮素1 mmol，调节甲醇钠pH值为8.5，用带冷凝管和磁力搅拌器的三口烧瓶，连续6 h回流加热。用硅胶G板对反应过程进行监控，完成反应后，停止回流。在聚酰胺层析柱中加入反应液，用水冲洗，用浓度不同的甲醇溶液进行梯度洗脱，将特定区间内的洗脱液收集起来，将有机溶液使用旋转蒸发仪蒸发，获得橘黄色固体物质，重新提取甲醇，以获得深橘黄色固体。元素分析所获得的固体，对目标产物实施热分析以及红外、紫外光谱分析鉴定，使用灭菌水将其调制为10 mmol/L的液体，并在4℃的冰箱中保存该原药储存液，使用前以RPMI1640培养基进行稀释，使用0.22 μm的微孔过滤液对其进行过滤处理。

1.3 槲皮素锗对多种肿瘤细胞增殖的作用 选择处于对数生长过程的PC-3细胞、EC9706细胞、SPC-A-1细胞、Hela细胞，将细胞密度设置为每孔6×103个，在96孔板中接种，饱和湿度37℃、体积分数为5%的孵育箱中进行培养。发生细胞贴壁后，将培养液吸弃，用RPMI1640培养基稀释液的槲皮素锗加入实验组，浓度为10 μmol/L和100 μmol/L，再加入对照组溶剂中，每组6个复孔，每孔体积为200 μL。将培养板于72 h后取出，用倒置显微镜观察记录其形态学。分别加入20 μL/孔和5 g/LMTT后进行4 h培养，上清液吸弃后加入250 μL/孔 DMSO，振荡10 min，保证结晶完全溶解，波长 570 mm处的每孔光密度值用酶标仪进行检测。细胞增殖抑制率(IR)计算方法为:1-(药物组光密度值/对照组光密度值)×100%。

1.4 统计学方法 通过SPSS 17.0软件对所有实验数据进行统计学处理，对患者数据资料进行χ2检验，计量数据用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

浓度不同的槲皮素锗对于多种肿瘤细胞增殖的作用效果对比差异统计学意义(P＜0.05)。如表1所示。

表1 浓度不同槲皮素锗对于四种肿瘤细胞增殖的作用分析(%)

3 讨论

本次研究结果表明，锗和槲皮素在碱性环境下，能产生槲皮素锗的配合物，经过热分析、红外光谱分析、紫外光谱分析和元素分析，可确定为目标产物［1］。MTT实验结果显示，槲皮素锗合成物体外作用，对于人前列腺癌细胞PC-3、人食管癌细胞EC9706、人肺腺癌细胞SPC-A-1、人子宫颈癌细胞Hela等多种肿瘤细胞的增殖过程具有明显抑制作用，且随着槲皮素锗浓度的提高［2］，抑制作用效果也会逐渐提高。槲皮素有助于耐药细胞在ADM中分布的恢复，但无法完全恢复肿瘤细胞自身耐药性，对化疗药物的敏感株和敏感性对比仍存在一定差异［3］，其原因可能是肿瘤细胞自身的耐药机制较为复杂，在同种类细胞中会同时出现不同的多种作用机制［4］。可见，槲皮素锗具有较好且较广泛的肿瘤抑制作用，可作为抗肿瘤药物进行开发研究［5］。

［1］方武.槲皮素对前列腺癌细胞的放疗增敏性研究.四川医学，2012，33(4):591-592.

［2］李洪福.抑制HSP 70表达对体外培养的脑胶质瘤细胞生长的影响. 江苏医药，2010，25(5):385-386.

［3］范宗荣.槲皮素对人肾癌细胞株细胞增殖、侵袭及其VEGF表达的影响.安徽医科大学学报，2012，47(8):889-890.

［4］单保恩.槲皮素对人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)多药耐药基因mdrl及p-gp蛋白表达的影响.癌变·畸变·突变，2009，21(5):256-257.

［5］钟喜明.槲皮素对食管癌细胞侵袭和中期生长因子基因表达的影响.世界华人消化杂志，2008，16(22):2504-2505.