Pax9在非小细胞肺癌患者血清中的表达及临床意义

莫晓能 龚蕊

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌是肺癌中最常见的类型，其发病率和死亡率逐年上升。因肺癌起病隐匿，早期可无任何症状，多数患者首次确诊时已为晚期，失去了手术治疗机会，预后较差，因此寻找一种灵敏、特异且操作简便的检测方法对肺癌的诊断及预后具有重要意义。Pax基因是一类在进化上高度保守的基因家族，广泛存在于从果蝇到人类的脊椎动物和无脊椎动物中，其编码的蛋白是一组重要的转录因子，它们调节很多基因的转录表达，从而进一步影响细胞的生长、分化、浸润等生物学行为。Pax9是Pax基因家族的一员，研究表明，Pax9在人类涎腺肿瘤、口腔黏膜鳞状细胞癌等多种肿瘤组织中表达增强［1，2］。且已有研究显示Pax9对肺的发育具有潜在的功能，若运用RNA干扰技术降低PAX9的shRNA水平，会降低肺癌细胞株的致癌性［3］。本研究通过检测NSCLC患者血清中Pax9的浓度，初步探讨Pax9基因在肺癌发生、发展及诊断、预后中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 35例NSCLC患者血清标本取自2009年1月至2010年12月在我院就诊并确诊为NSCLC的患者，其中男19例，女16例，年龄46～78岁，平均(66.7±9.5)岁。按2009年WHO肺癌组织学分类标准和IASLC的TNM临床分期，鳞癌21例，腺癌14例，Ⅰ期7例、Ⅱ期 12例、Ⅲ期10例，IV期6例。42例肺良性病变患者血清标本取自我院2012年1月至2012年9月的住院患者，其中男25例，女17例，年龄42～85岁，平均(73.1±11.1)岁。30例健康者为健康体检人员，男19例，女11例，年龄38～55岁，平均(46.7±6.1)岁。

1.2 临床资料 所有NSCLC患者均有完整的临床资料和随访资料。末次随访至2012年5月。总生存时间为1个月至41个月(从确诊时间开始到死亡时间或末次随访时间)，中位生存时间为26个月。

1.3 标本收集 所有患者及健康者均抽取空腹5 ml静脉血置于肝素抗凝管，室温静置半小时后1000 rpm离心5 min，立即分装上清液，置于-20℃ 冰箱内保存。

1.4 方法与试剂 血清中Pax9蛋白含量的测定采用酶联免疫吸附(ELISA)法，人Pax9 ELISA试剂盒购自上海蓝基生物科技有限公司，检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学方法 所测数据采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析。定量资料以均数±标准差()表示，两组定量资料组间比较采用t检验。采用Kaplan-Meier和log-rank检验进行生存分析。采用Cox比例风险模型进行预后的多因素回归分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清中Pax9表达水平的比较 NSCLC患者血清Pax9的浓度显著高于肺良性病变患者和健康者(P＜0.05)(见表1)。

表1 各组血清Pax9表达水平的比较(，例)

表1 各组血清Pax9表达水平的比较(，例)

注:▲NSCLC组与肺良性病变组比较;▲▲NSCLC组与健康组比较

组别 例数 血清Pax9(ng/ml) P值NSCLC组35 144.6±87.4肺良性病变组 42 94.8±44.4 0.004▲健康组 30 103.3±58.3 0.032▲▲

2.2 NSCLC患者血清Pax9的表达水平与患者临床病理特征之间的关系 结果显示，NSCLC患者血清Pax9的表达水平与患者性别、年龄、吸烟史及淋巴转移等临床病理特征无相关性(P＞0.05)，与肿瘤病理分型、TNM分期显著相关(P＜0.05)。腺癌患者血清中Pax9的浓度高于鳞癌患者。血清中Pax9的浓度随TNM分期而升高，Ⅲ-Ⅳ 期明显高于Ⅰ-Ⅱ期。(见表2)。

表2 Pax9的表达与肺癌临床病理特征之间的关系

2.3 Pax9表达与NSCLC患者预后的关系 根据NSCLC患者血清中Pax9的浓度平均值144.6 ng/ml将35例NSCLC患者分为低表达组(＜144.6 ng/ml)和高表达组(≥144.6 ng/ml)。Kaplan-Meier分析结果显示:高表达组的中位生存时间为23.0个月，明显低于低表达组的中位生存时间29.0个月，差异有统计学意义(P=0.014)(见图1)。

图1 非小细胞肺癌不同Pax9表达水平的生存分析

采用Cox比例风险回归模型进行多因素分析，引入模型的因素有性别、年龄、吸烟史、肿瘤病理分型、TNM分期、淋巴转移和Pax9表达等，结果显示:肿瘤TMN分期、淋巴转移和Pax9表达对NSCLC患者预后具有统计学意义(P＜0.05)(见表3)。

表3 多因素分析临床病理因素对总生存时间的影响

3 讨论

Pax9是Pax基因家族的一员，其编码的蛋白由两部分组成，一部分为成对结构域(Paired domain，PD)，由配对盒编码，含128个氨基酸，由两个独立的子域构成:氨基末端PAI域和梭基末端RED域，PAI可直接与DNA结合，在进化过程中保持高度保守，RED则间接参与DNA的连接，在种属间有较大差异;另一部分为八肽域(Octapeptide，OP)［4，5］。Pax9 基因编码的转录因子在胚胎发育中的作用已十分明确，它在颅面和肢体发育中起重要作用，还与牙齿的发生、分化密切相关［6］，目前已知几种Pax9基因的突变导致一些牙齿发育相关的畸形，如Pax9的基因的错义突变83 g→C，使得Pax9成对结构域N末端pro替代了arg，导致了包括少牙畸形在内的牙齿发育畸形［7］。研究显示，Pax9在人类多种肿瘤组织中表达异常，如Pax9与食管鳞癌的发生、发展及恶性程度相关，与子宫内膜样腺癌的组织学分级、临床分期、浸润程度相关［8，9］。Lee J C等研究表明Pax9一方面能够上调BCL-2表达使caspase-3失活，从而抑制凋亡发生，另一方面可以降低bax蛋白表达，促使凋亡相关蛋白(PARP)下调导致caspase-3失活，抑制凋亡发生［10］。Pax9导致肿瘤发生的机制尚未完全清楚，还有待于进一步研究。

本研究检测了35例NSCLC患者、42例肺良性病变患者及30例健康对照者血清中Pax9的浓度，结果显示，NSCLC患者血清Pax9的表达水平明显高于肺良性病变患者及健康者，差异有统计学意义(P＜0.05)，表明Pax9在肺癌发生发展中起一定作用，检测其血清含量有助于NSCLC的诊断。同时，本研究还对NSCLC患者血清中Pax9的表达水平与其临床病理特征的关系进行了分析，结果表明，NSCLC患者血清Pax9的表达水平与患者性别、年龄、吸烟史及淋巴转移等临床病理特征无相关性(P＞0.05)，与肿瘤病理分型、TNM分期显著相关(P＜0.05)。采用Kaplan-Meier法进行生存分析，结果显示，高表达患者生存时间明显低于低表达患者(P＜0.05)。同时COX回归分析显示，肿瘤TMN分期、淋巴转移和Pax9表达对患者预后具有明显意义，Pax9在血清中的高表达有可能提示肺癌患者预后不良。但Pax9在血清中的高表达影响因素较多，Pax9的表达与肺癌的关系有待于在以后的研究中进一步证实。

［1］苗雷英，李祥伟，刘超，等.涎腺肿瘤中Pax9基因的表达及其意义.口腔医学研究，2006(1).

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［6］赵计林，陈扬熙，鲍朗，等.中国先天性缺失牙患者PAX9基因的新突变.中华口腔医学杂志，2005(4):266-269.

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［10］Lee J C，Sharma M，Lee Y H，et al.Pax9 mediated cell survival in oral squamous carcinoma cell enhanced by c-myb.Cell Biochem Funct，2008，26(8):892-899.