鬼针草属六种植物的同工酶电泳实验研究

刘红燕

(山东中医药大学，山东 济南250355)

鬼针草为我国民间常用中草药，来源于菊科(Compaositae)鬼针草属(Bidens Linn.)多种植物，具有清热解毒、活血、散淤、消肿之功效，用于治疗痢疾、腹泻、感冒、炎症等［1］。全球约有230种，我国有9个种、2个变种，其中山东省内有6个品种。为进一步探讨鬼针草种内变异的关系，揭示其变异规律，本研究采用过氧化物酶同工酶电泳生化标记方法对来源于山东省内6个品种鬼针草进行了分析研究，以期为种质资源的收集和药效成分研究提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

DYY－24A型恒流电泳仪、DYY－IH型垂直电泳槽、凹槽玻璃板一套(均为北京市六一仪器厂)、LGR16－W型冷冻离心机(北京医用离心机厂)、PHS－SD型数显酸度计(上海电子光学技术研究所)、FA1104型电子天平(上海天平仪器厂)微量进样器、研钵、离心试管。

1.2 试剂

三羟甲基氨基甲烷、丙烯酰胺、过硫酸铵、N，N－亚甲基双丙烯酰胺、甘氨酸、40%蔗糖溶液、考马斯亮蓝R250、醋酸联苯胺、四甲基乙二胺、溴酚蓝等，所用试剂均为分析纯。

1.3 实验材料

鬼针草属大狼杷草(Bidens frondosa L.)、金盏银盘(Bidens biternata Merr.et Scherff)、小花鬼针草(Bidens parviflora Willd.)、婆婆针(Bidens bipinnata L.)、狼杷草(Bidens tripartita L.)、矮狼杷草［Bidens tripartita L.var.repens(D.Don.)Sherff］的成熟新鲜叶片。

2 实验方法与结果

2.1 电泳实验

样品制备、凝胶制备、电泳操作、染色与保存参照文献［2］进行。

2.2 PAGE 图谱处理

胶板用EDAS－290凝胶成像紫外分析仪成像(图1)。根据各样品谱带形态及出现的先后顺序，绘制电泳图谱(图2)。根据谱带泳动率Rf值(泳道中各谱带与溴酚蓝前沿的位置比值)计算鬼针草谱带泳动率(表1)。

表1 鬼针草过氧化同工酶电泳谱带Rf值

图1 鬼针草属药材植株POD图谱

图2 鬼针草属药材植株POD图谱示意图

六个样品电泳谱带存在显著差异，其中共有谱带11可作为特征鉴别谱带;谱带4，5，6，7，8是大狼把草所特有，可作为鉴别谱带;矮狼把草只有2条谱带，可区别于其它品种;金盏银盘、小花鬼针草、婆婆针均有3条谱带，但谱带Rf的显著差异可用于3种植物的鉴别。谱带强度的显著差异，可能与样品有效成分含量不同有关。总之，鬼针草POD图谱谱带模式(数目、位置)能够把6种植物区分开来。

3 讨论

本实验所用样品于同一时间采集。预试验发现成熟叶片酶谱较为清晰，所以采样部位为鬼针草植株茎的成熟叶。

鬼针草药材形态学特征显示6个种质在叶形、果实形状与芒刺数目上有显著差异。大狼把草、金盏银盘、小花鬼针草、婆婆针、狼把草、矮狼把草的叶形分别为羽状、羽状、条状披针形、三角状或菱状披针形、矩圆状披针形、披针形;果实分别为扁平、条状略扁具4棱、条形具4棱、条形具3～4棱、扁，楔形，或倒卵状楔、楔状条形;果实顶端芒刺分别为2枚、3～4枚、2枚、3～4枚、2枚、2～3枚。6个品种的形态学差异显著，与过氧化物酶同工酶谱差异显著结果相吻合。外在形态学特征结合内在酶谱特征可作为鬼针草种质划分的一种手段。

聚丙烯酰胺凝胶过氧化物酶同工酶电泳技术根据同工酶的结构差异能够稳定地遗传给后代的规律，可以鉴别诸多遗传变异，如生物的类别、品种的地理分析、演化关系等［4］。此方法操作简单、快速准确，直观性强，且成本低，可用于鬼针草品种之间的鉴别。

［1］江苏新医学院.中药大词典:上册［M］.上海:上海人民出版社，1997:1354.

［2］徐凌川，卢燕，辛学梅，等.白首乌蛋白质及同工酶电泳实验研究［J］.时珍国医国药，2003，14(12):3 －4.

［3］石俊英.中药电泳鉴别法及其在药用植物、动物中的应用研究［J］.山东中医学院学报，1995，19(2):74 －75.

［4］李明，田永云，耿杰.山东玫瑰花的过氧化物酶同工酶分析［J］.时珍国医国药，2009，20(7):1624 －1625.