噪声致听力损伤豚鼠穴位注射神经生长因子疗效分析

苏洁明 谢金城 欧满灿 曾 斌 赖肖芬

广州市番禺区何贤纪念医院耳鼻喉科，广东广州 511400

噪声能够导致听力损伤，耳蜗毛细胞对噪声损害最敏感，也是噪声损害是主要因素[1]。但是目前国内外仍缺乏真正根治的方法，最近有报道外源性神经生长因子（NGF）能够减轻噪声对其损害，从而对噪声性听力损伤具有较明显的保护作用[2]。本文通过设计对比实验，依据对照原则，在穴位处对有听力损伤的豚鼠注射神经生长因子，观察其NGF对听力损伤的修复作用，由畸变产物耳声发射（DPOAE）针对听力变化予以表示。

1 资料与方法

1.1 一般资料

体重在250～350 g（购自广州中医药大学动物中心）的健康雄性豚鼠48只，随机分为4组，每组12只（24只耳），经系统检测，耳廓反射正常。将其分为对照组（正常组）、腹腔注射组、穴位注射组、模型组（听力损伤），除对照组以外，剩下3组豚鼠均24小时放置在声压级100dB（A）的白噪声中，共7 d；在暴露前、暴露后、治疗后3个时间区域内，用畸变产物耳声发射观察每组豚鼠于噪声中三个阶段的幅值和信噪比。

1.2 听力损伤模型制作

白噪声经由纯音听力计发出，在声场扬声器作用下，向动物箱内发出暴露声压级100 dB（A）的噪声，声场不均匀度为±1 dB（A）。 每天 24 h，连续 7 d。

1.3 治疗方法

（1）模型组：每天1次腹腔注射1 mL0.9%NaCl溶液；（2）腹腔注射组：按3000 U/kg冻干粉针NGF加1 mL 0.9%NaCl溶液稀释腹腔注射，每天1次；（3）穴位注射组：按3 000 U/kg冻干粉针NGF（厦门北大之路生产 “恩经复”，卫药试字S20020116）加1 mL注射用水稀释，分别以剂量0.5 mL双耳隔日交替注射翳风、完骨二穴；（4）对照组：无治疗动作。治疗时间均为28 d。

1.3.1 测试仪器 仪器：丹麦Madsen Capella型耳声发射仪；检测环境：环境噪声≤20dB（A）的声屏蔽室，上海康德听力技术有限公司生产。

1.3.2 DPOAE测试 测试内容为DP-gram幅值，叠加平均次数为200次，确认标准为高于本底噪声6 dBSPL，f0为0.75~8.0 KHz， f2/f1=1.220，L1=70 dB SPL，L2=60 dB SPL。测试前，在无菌条件下用苯妥英钠杀菌后，校准探头，去除外耳道内耵聍，经适宜耳塞后，将探头放入外耳道内密封，测1 000～8 000 Hz七个频谱。判断标准：有两个频率引出的DPOAE波形的重复性>65%为正常。

1.4 统计学方法

用SPSS 11.5统计软件作数据处理，所有数据以均值±标准差表示，各组数据采用方差分析进行比较，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组信噪比测试结果

4组DPOAE信噪比测试结果提示说明各组DPOAE信噪比测试结果均差异有统计学意义，模型组DPOAE信噪比测值明显降低，穴位注射组仅次于对照组，对照组最好。见表1。

2.2 4组幅值测试结果

对照组、模型组、腹腔注射组、穴位注射组DPOAE幅值测试结果提示除f0为0.25 Hz处P>0.05外，其余频区P<0.01，说明各组DPOAE幅值测试结果差异有高度统计学意义，同样的，穴位注射组改善最明显，腹腔注射组和穴位注射组听力有一定程度的改善，模型组听力效果最差。见表2。

2.3 穴位注射神经生长因子对各组豚鼠的耳蜗听觉通路上GJB2基因、SLC26A4基因表达的影响结果

GJB2基因、SLC26A4基因在听力损伤下充分表达，注射过NGF的两组豚鼠耳蜗听觉通路上两组基因表达明显降低，并且穴位注射组下降更加显著，详见表3。

3 讨论

噪声所致听力损伤是由于长期接触噪声而发生的一种缓慢进行的以高频听力下降为主的感应神经性聋，是在基底膜振荡的基础上，伴有内耳机械性损伤和功能代谢障碍[3]。增加血氧供量，提高对噪声的耐受力等方法是噪声听力损伤防护的主要研究内容[4]。研究表明NGF家族成员可使残留神经元复活，并对其功能进行重塑[5]。中医认为针刺腧穴可激发经气抵抗疾病，调节气血，通经活络，在耳部疾患中如耳聋耳鸣的治疗中已经应用广泛，在天宗穴注射维生素B族、利多卡因、川芎嗪等药物可取的良好疗效[6-7]。

表1 4组信噪比测试结果（x±s）

表2 4组幅值测试结果（x±s）

表3 穴位注射神经生长因子对各组豚鼠的耳蜗听觉通路上GJB2基因、SLC26A4基因表达的影响结果

耳声发射（OAE）检测可了解和分析耳蜗的功能状态，主要反应耳蜗外毛细胞的功能状态，检测值与耳蜗整体功能和损伤程度成负相关[8]。DPOAE是OAE的一种，绝大多数正常耳均能引出，是耳蜗主动机制的表现[9]，稳定性好，在临床上已作为一种客观听觉生理测听的方法，有临床应用价值[10]；当由噪声导致的耳蜗功能损害时，耳蜗基底膜上的听觉感受器外毛细胞受损，相应的DPOAE能量信号发射减少，因此，DPOAE主要反映了耳蜗外毛细胞功能状态，其测值与耳蜗整体功能成正比；经过研究表面，未受噪声损伤的对照组听力最好，受噪声损伤，但经治疗的穴位注射组和腹腔注射组，听力有明显改善，而受噪声损伤，又未给予治疗的模型组听力最差。第二个实验中，GJB2基因、SLC26A4基因在听力损伤下充分表达，注射过NGF的两组豚鼠耳蜗听觉通路上两组基因表达明显降低，并且穴位注射组下降更加显著，间接说明穴位注射对听力损伤的修复作用更佳，具有发展推广的意义。研究显示，通过穴位注射的药物，可进入内耳外淋巴，作用时间明显加长，对内耳微环境和组织细胞缺血缺氧状态有良好的改善作用，与本研究结果一致[11-13]。

综上所述，从这次研究中不难发现，穴位注射组治疗效果明显优于腹腔注射组，说明神经生长因子穴位注射是一种治疗噪声性听力损伤安全有效的新方法，可配合听觉语言康复训练，可加速听觉功能恢复[14-15]。但对药物的作用机制和疗效与病程之间的关系有待进一步做临床验证，从而使治疗最优化。

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