酸枣多糖的提取及对免疫功能影响的初探

郎杰

（河北经贸大学生物科学与工程学院，河北石家庄050061）

酸枣（Ziyphus spinesu（Bunge）Hu.）为鼠李科枣属植物，原产于中国，多分布于北方。酸枣种仁（酸枣仁）是常用的中药材。酸枣除去果核的果肉部分仍具有丰富的营养成分和保健功能。对酸枣果肉部分有待深入研究与开发。近年来对植物多糖的研究报道日趋增多，多糖具有多种生物活性[1]。尤其是多糖在免疫方面的作用研究的更为深入，发现了很多多糖具有促进免疫器官的发育和促进免疫细胞的生成以及促进免疫细胞的吞噬功能，甚至还促进细胞因子的产生等[2]。为了对酸枣果肉部分进行综合利用，本文对酸枣多糖进行了提取研究以及对酸枣多糖的免疫调节功能进行了动物实验。

1 材料与方法

1.1 酸枣多糖的制备

新鲜酸枣剥离果核，将果肉于105℃烘30 min灭其酶活性，于75℃烘干后粉碎过100目筛，放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸乙酯混合液在80℃恒温中回流抽提色素至抽提液颜色呈微黄色。将回流后的酸枣果肉粉取出，加入蒸馏水（1∶10），分别调至 pH5.0、6.5、8.0 浸泡 10 h，放入 60、70、80、90 ℃恒温水浴中浸提2 h，冷却后离心（4 000 r/min）20 min，取上清液加入木瓜蛋白酶（1 U/mL）37℃水浴加热1 h脱蛋白[3]，再分别加入2、3、4、5倍量无水乙醇，4℃下静置后再离心20 min，弃去上清液，沉淀物以蒸馏水溶解后加入10%活性炭，60℃脱色30 min，过滤除去活性炭，得到微黄色多糖溶液，用苯酚硫酸法测定含量后[4]，再减压干燥用于下一步实验。

1.2 酸枣多糖对小鼠免疫影响实验

小白鼠（昆明种）：购于河北医科大学动物室，体重25 g～30 g雄性小鼠64只，随机分为空白对照组、小剂量组、中剂量和大剂量组各2组，一组用于测定免疫器官指数（10只重复），另一组用于测碳粒廓清指数（6只重复）。

将酸枣多糖配成所需浓度，每日灌胃一次。大、中、小剂量分别为每千克体重500、350、200 mg多糖，空白对照组灌以蒸馏水。连续灌胃60 d。

1.2.1 免疫器官重量的测定

末次给药24 h后，将小鼠用乙醚麻醉，迅速取出胸腺和脾脏，用滤纸吸干血液后称重，计算出脾脏、胸腺指数单位。

1.2.2 吞噬细胞的吞噬指数测定

末次给药24 h后对小鼠用乌拉坦麻醉，将印度墨汁用含1%明胶的生理盐水稀释5倍，由尾静脉注射（1.0 mL/100 g），注射后15 min、24 h分别由眼后静脉丛取血，用比色法测血浆中碳粒浓度（μL/mL），计算吞噬指数[5]。

2 结果与分析

2.1 不同提取条件对酸枣多糖的提取效果比较

在不同温度、不同提取pH及对提取物用不同比例乙醇沉淀其效果见表1。

表1 不同提取条件对酸枣多糖的提取效果比较Table 1 Comparison on extraction effect of jujube polysaccharide of different conditions μg/mL

不同温度下对酸枣多糖的浸提液进行吸光度测定并折算为多糖含量，结果表明多糖提取量随温度增高而增加，经方差分析显示，90℃与80℃提取差异不显著。而90℃和80℃提取效果与70℃及60℃差异显著。提取液pH对浸提效果影响较为明显，在pH5.0、6.5、8.0条件之间差异显著，其中以pH8.0效果最好。对酸枣多糖提取液用不同体积比例乙醇进行沉淀结果表明乙醇比例增大沉淀量增加。四种乙醇比例之间差异显著。由此认为在90℃的中性偏碱（pH8）条件提取效果较好及5倍乙醇沉淀较好。

2.2 酸枣多糖对小鼠免疫功能的影响

用酸枣多糖给小鼠灌胃60 d后，小鼠胸腺和脾重与对照相比结果如表2，对小鼠免疫细胞吞噬能力的影响结果如表3。

表2 酸枣多糖对小鼠免疫器官的影响Table 2 The index of thymus and thymus of mice after taking jujube polysaccharide for 60 d

通过表2数据分析比较，酸枣多糖灌胃处理，可增加实验小鼠的免疫器官重量，提高小鼠的胸腺指数和脾指数。经统计分析（T－检验）表明，中剂量组、大剂量组与空白对照组之间胸腺指数差异显著；小剂量组、大剂量组与空白对照组比较，脾脏指差异也达显著水平，大剂量组和小剂量组之间差异不显著。

通过碳粒廓清指数测定结果分析（表3），酸枣多糖灌胃处理各剂量组碳粒廓清指数均高于对照组，差异显著。从灌胃剂量效果来看，大剂量效果明显高于小剂量。由此表明酸枣多糖具有提高小鼠免疫细胞吞噬能力的作用。

表3 酸枣多糖灌胃小鼠60 d后的碳粒廓清指数Table 3 The carbon clearance index of mice after taking jujube polysaccharide for 60 days

3 讨论与结论

对于多糖类物质可提高免疫系统功能，过去已有很多报道[6]。本研究以小鼠为实验动物，利用提取的酸枣多糖进行灌胃，结果表明酸枣多糖具有提高小鼠免疫器官重量和提高碳粒廓清指数的作用，由此可初步认为酸枣多糖在增强免疫方面具有一定的作用。

在本实验中多糖大剂量效果大于小剂量。其效应是否为直接作用还有待进一步研究。推测其效应不是直接的，可能是间接作用。胸腺对淋巴T细胞增殖分化有重要作用，脾脏对T淋巴细胞和B淋巴细胞，以及巨噬细胞增殖分化作用较大。本实验中酸枣多糖能增加胸腺和脾的重量，可能酸枣多糖具有促使T淋巴细胞及B淋巴细胞增值的作用，从而进一步提高了吞噬能力。

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[2] 谢明勇,聂少平.天然产物活性多糖结构与功能研究进展[J].中国食品学报,2010,10(2):1-11

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[4] 徐志祥,李刚,李宝健.苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的条件研究[J].食用菌,2000(3):6-8

[5]陈奇主编.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社,1993:712-759

[6] 管敏强.多糖与动物免疫的研究现状[J].中兽医学杂志,2006,129(2):43-46