近三年某院分离肺炎链球菌的耐药性监测

2013-04-29江镜全郭旭光陈琼夏勇

中国保健营养·下旬刊 2013年7期

江镜全　郭旭光　陈琼　夏勇

【摘要】目的统计和分析2010年1月至2012年12月本院临床分离的肺炎链球菌的耐药性，为临床合理应用抗生素提供依据。方法对临床分离的81株肺炎链球菌菌株，用VITEK-2细菌鉴定药敏系统进行鉴定及药敏试验。结果共收集到肺炎链球菌81份，主要为痰液。肺炎链球菌对抗菌药物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉维酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉宁、万古霉素的敏感率均为100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、泰利霉素、头孢曲松、氯霉素、厄他培南替、敏感率均大于90%。结论肺炎链球菌主要引起呼吸道感染，阿莫西林/克拉维酸和莫西沙星可作为治疗的首选药物，临床医生应根据本院的药敏结果经验作为经验用药的指导。

【关键词】肺炎链球菌；耐药；肺炎；链球菌；感染

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）是一种球状的革兰氏阳性菌，是链球菌属下的一种细菌。作为一种重要的人类致病菌，肺炎链球菌于1880年已被发现能引起肺炎，亦是体液免疫研究的对象。肺炎链球菌最初名字是肺炎双球菌，因它在革兰氏染色中的特征[1]。1974年，研究发现它在液体媒介中呈链状的生长，而被重新命名为肺炎链球菌。因它是肺炎的致病因子，一般都会称它为肺炎球菌。肺炎链球菌亦会导致不同种类的疾病，包括有急性鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、腹膜炎、心囊炎、蜂窝组织炎及脑脓肿。

近年来随着青霉素耐药肺炎链球菌及多重耐药菌株的增加[2-4]，给临床治疗带来一定的困难[5]。为更好的指导临床用药，为临床经验用药提供实验室依据，了解该菌在我院的分布及耐药情况，对2010年1月——2012年12月临床送检标本分离的肺炎链球菌药敏结果进行回顾性分析。

1材料与方法

1.1菌株来源及培养方法81株肺炎链球菌均自本院2010年1月——2012年12月住院患者及门急诊患者。包括痰液、血液、脑脊液等。标本接种血平板和巧克力平板，放入5%CO2培养箱，35℃，24h培养。对于疑似肺炎链球菌的菌株，转血平板，加奥普脱欣纸片筛选，敏感的菌株进一步做鉴定和药敏试验。

1.2仪器与试剂标本送到实验室后，按《全国临床检验操作规程》（第3版）要求处理，经培养获得单个菌落后，经初筛后，疑似肺炎链球菌的菌落增菌后，用Vitek-2全自动细菌鉴定仪及其配套的鉴定卡和药敏卡进行鉴定及药敏试验，结果判定按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的方案和标准，以敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告结果。抗菌药物包括阿莫西林/克拉维酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉宁、万古霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、泰利霉素、头孢曲松氯霉素、厄他培南、头孢呋辛钠、亚胺培南、喹努普汀/达福普汀、头孢噻肟、美罗培南、青霉素G、复方新诺明、红霉素、四环素。

1.3统计软件药敏结果的导出采用东方旗云软件，药敏结果分析采用Excel2003软件。

2结果

2.1肺炎链球菌临床菌株的分布81株肺炎链球菌分别来自呼吸道、分泌物、脓液、血液等标本，其中以痰液标本检出率最高，其次为分泌物，见表1。

2.2药敏结果本次试验分离出的81株肺炎链球菌对抗菌药物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉维酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉宁、万古霉素的敏感率均为100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、泰利霉素、头孢曲松、氯霉素、厄他培南替、敏感率均大于90%.头孢呋辛钠、亚胺培南、喹努普汀/达福普汀、头孢噻肟的敏感率在80%-90%之间；美罗培南的敏感率为61.54%；青霉素的敏感率为55.56%；复方新诺明的敏感率为40.00%；红霉素的敏感率为23.68%；四环素的敏感率为21.74%。具体药敏检测结果，见表2。

3讨论

肺炎链球菌是一种普遍导致成人感染细菌性脑膜炎的病菌，亦是首两种在中耳炎发现的分离株。由肺炎链球菌引致的肺炎是在年幼或年长的人中最经常出现。肺炎链球菌与同是γ溶血性的草绿色链球菌是有所分别，因肺炎链球菌是对奥普托欣较敏感，所以能透过奥普托辛测试验出它们的分别。肺炎链球菌的粒状体是有荚膜包裹及呈革兰氏阳性，与草绿色链球菌在革兰氏染色有型态上的不同（肺炎链球菌染色型态的是呈针刺状）。它有着一个多糖荚膜，是一种重要的致病因子[6]。

本次试验分离出的81株肺炎链球菌对抗菌药物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉维酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉宁、万古霉素的敏感率均为100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、泰利霉素、头孢曲松、氯霉素、厄他培南替敏感率均大于90%.头孢呋辛钠、亚胺培南、喹努普汀/达福普汀、头孢噻肟的敏感率在80%-90%之间；美罗培南G的敏感率为61.54%；青霉素的敏感率为55.56%；复方新诺明的敏感率为40.00%；红霉素的敏感率为23.68%；四环素的敏感率为21.74%。

根据药敏结果，对于肺炎链球菌的感染首选阿莫西林/克拉维酸和莫西沙星，虽然利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素的敏感率也为100%，但是其价格昂贵，而且为以后其他细菌的感染以及多重耐药菌的感染用药留下余地。次选左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、厄他培南替等。

肺炎链球菌的常规检测费时费力，目前快速检测的方向之一就是分子诊断。肺炎链球菌的检测技术很多，分为基于核酸水平的检测技术、基因芯片技术以及其他检测技术。而基因芯片这一类检测技术尚处研究阶段并不成熟[7]。因此，应用最广的为基于核酸水平的PCR定性检测技术。当前我国对细菌DNA的检测，主要是通过提取DNA，再进行PCR+凝胶电泳（初筛），对于阳性结果采用实时荧光PCR、Southern杂交或测序方法进行确证，或对提取的DNA直接采用实时荧光PCR方法检测。这些常见检测基因的分子生物学方法目前比较成熟，但不可避免具有消耗昂贵，方法耗时较长等缺点。随着分子生物学理论和技术的快速发展，以聚合酶链式反应（PCR）技术为基础的新型鉴定技术已日益得到广泛应用。恒温基因扩增方法（LAMP，Loop-mediated Isothermal Amplification）是在PCR基础上创建的一种较理想的手段，其特点是：①只需一恒定温度就能扩增反应，不需要特殊试剂，不需要预先进行双链DNA的变性；②高特异性：采用六个区段，四条引物，扩增特异性高，可以根据是否扩增来判断目标基因的存在与否；③快速、高效扩增：扩增在不到1h即可完成，且产率高；④灵敏度高：扩增模板可达10拷贝或更少；⑤鉴定简便：在核酸大量合成时，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物-焦磷酸镁沉淀，可用肉眼观察判断扩增与否；总体而言，LAMP法是一种简便、快速、高特异的基因扩增法[8-10]。

而实时荧光LAMP是在在LAMP基础上引入ESEQuant Tube Scanner及荧光染料，实现LAMP法实时监测扩增的目的，不仅结果易于观察和判断，同时避免因开盖导致假阳性的出现，实现快速、准确检测的目的[11]。下一步，我们将继续收集临床菌株，建立检测肺炎链球菌的Rea-LAMP检测方法。

参考文献

[1]梁建芬，吴开进.基层医院肺炎患儿肺炎链球菌的分离及耐药性分析.国际检验医学杂志，2012，（23）：2919-2920.

[2]廉荣镇，肖能.脑膜炎患儿脑脊液中肺炎链球菌的耐药性初步分析.当代医学，2011，（03）：138-139.

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[4]沈定树，许春燕.侵袭性肺炎链球菌病的实验诊断进展.中国卫生检验杂志，2012，（11）：2792-2794.

[5]蒋圣灿.儿童社区获得性肺炎（CAP）病原构成及肺炎链球菌的耐药性分析.中国医药指南，2012，（20）：487-488.

[6]陈国华，刘会彩，张浩宇.158例肺炎链球菌耐药现状分析.中国实用医药，2013，（08）：42-43.

[7]颜善活，孙雷，符可鹏，等.实时荧光定量PCR快速诊断肺炎链球菌.检验医学，2013，（03）：221-224.

[8]李红海，李向阳，杨锦红，鲁勇，陈丽.环介导恒温扩增方法检测痰液标本中的肺炎链球菌.中国卫生检验杂志，2009，（03）：589-591.

[9]罗欲承，杜蓬，赵建忠，等.多重降落PCR检测痰标本肺炎链球菌与b型流感嗜血杆菌.江苏大学学报（医学版），2012，22（3）：251-254.

[10]戴然然，刘嘉琳，万欢英.环介导等温扩增技术在检测细菌性肺炎常见致病菌中的应用.国际呼吸杂志，2011，31（8）：576-580.