21种海南植物粗提物生物活性初步测定

王法红 曹阳 骆焱平

摘要：采用生长速率法测定了21种海南植物粗提物对水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani Kühn）、香蕉炭疽病菌[Colletotrichum musae （Berk & Curt.）]、香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. cubense）、芒果炭疽病菌（C. gloeosporioides Penz）、西瓜枯萎病菌（F. oxysporum f. sp. niveum）、芒果蒂腐病菌（Botryodiplodia theobromae Pat）6种靶标菌的抑菌活性；采用浸渍法测定了粗提物对莴苣蚜虫（Nasonovia ribisnigri）的触杀活性。结果表明，当提取物浓度为5 mg/mL时， 7种植物粗提物对香蕉炭疽病菌的抑制率大于60.00%，特别是黄樟和假臭草粗提物对5种靶标菌的抑制率都在60.00%以上、对水稻纹枯病菌的抑制率都为100.00%；当提取物浓度为4 mg/mL时， 10种粗提物对莴苣蚜的触杀活性（蚜虫死亡率）在60.00%以上，其中5种粗提物的触杀活性不低于80.00%，假臭草杀虫活性最强，蚜虫死亡率为94.55%，与对照药剂0.7%印楝素乳油750倍稀释液杀虫活性相当。

关键词：植物粗提物；抑菌活性；触杀活性；生物学测定；海南

中图分类号：S435 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）08-1829-04

随着农药残留、环境污染问题日益严重，世界各国纷纷提高了农产品进口标准，中国每年因农药残留超标造成农副产品出口损失高达70亿美元[1]。高效低毒、在环境中易分解、在农作物中低残留或无残留的绿色农药成为当今研究的热点[2]。植物源农药具有取材天然、来源广泛、作用平稳、毒副作用相对较小等优点[3，4]。据不完全统计，全世界已报道2 400多种高等植物具有控制有害生物的作用[5]，这些植物所产生的次生代谢物质种类超过40万种。这些植物在分类学上主要集中于楝科、菊科、豆科、卫矛科、大戟科等30多科[6，7]。

海南岛地处热带，湿热多雨，气候条件优越，拥有独特的植物资源，充分利用丰富的植物资源寻找有潜在应用价值的植物源农药具有重要的意义。试验对有特殊气味、受病虫危害较轻的17个科21种植物进行样品采集、粉碎、粗提，以6种植物病原菌作为靶标菌、以蚜虫作为供试害虫，研究21种植物粗提物的抑菌、杀虫活性，以期发现含有较高农用活性物质的植物种类，为新型植物源杀菌剂、杀虫剂的开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试植物 21种植物采自海南大学儋州校区校园及附近农场，具体情况见表1。

1.1.2 供试病原菌 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani Kühn）、香蕉炭疽病菌[Colletotrichum musae （Berk&Curt.）]、香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. cubense）、芒果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz）、西瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. niveum）、芒果蒂腐病菌（Botryodiplodia theobromae Pat）菌种均由海南大学环境与植物保护学院农药学实验室提供。

1.1.3 供试昆虫 莴苣蚜（Nasonovia ribisnigri）采自海南大学校园内菜地，挑选大小一致的无翅蚜供试。

1.1.4 农药 0.36%苦参碱水剂，河北阔达生物制品有限公司；0.7%印楝素乳油，河南鹤壁陶英陶生物科技有限公司。作对照用。

1.2 试验方法

1.2.1 植物粗提物制备 将植物样品用清水洗净，室内阴干，粉碎，过40目筛，分别用适量乙醇浸提3次，浸提时间分别为3、2、1 d。过滤，合并滤液，在（50±1）℃下减压浓缩，干燥得到粗提物（提取物）。

1.2.2 抑菌活性测定 将供试靶标菌分别接种于PDA平板，25 ℃恒温培养3～5 d活化。

采用生长速率法[8]测定粗提物的抑菌活性。将不同粗提物配制成100 mg/mL的母液，移取1 mL至19 mL融化的PDA培养基中，充分摇匀，迅速分装至3个直径为6 cm的培养皿内。冷却凝固后在平板中央分别接入直径为0.5 cm的靶标菌菌饼，以不含粗提物的溶剂为空白对照，以0.36%苦参碱水剂1 500倍稀释液为药剂对照，（25±1）℃恒温培养3 d，十字交叉法测量菌落直径。抑制率= （空白对照菌落直径-处理菌落直径）/（空白对照组菌落直径-菌饼直径）×100%。采用邓肯氏新复极差法分析数据。

1.2.3 触杀活性测定 采用浸渍法测定粗提物对莴苣蚜虫的触杀作用[9]：将不同粗提物配成4 mg/mL的溶液，取带有30头无翅莴苣蚜的莴苣叶片，于药液中浸渍5 s，取出后用滤纸吸去多余药液，放入铺有棉花保湿的培养皿中。以配药溶剂为空白对照，以0.7%印楝素乳油750倍稀释液为对照药剂，每处理重复3次。受药12 h后检查试虫死亡率（触杀活性），死亡率=（处理组死亡率-空白对照组死亡率）/（1-空白对照组死亡率）×100%；采用邓肯氏新复极差法分析数据。

2 结果与分析

2.1 粗提物抑菌活性测定结果

21种植物粗提物对供试的6种靶标菌的抑菌活性测定结果见表2。由表2可知，绝大多数植物粗提物对供试靶标菌有抑菌活性，其中樟科的黄樟提取物抑菌作用最强，对所有供试靶标菌抑制率均大于60.00%，对水稻纹枯病菌抑制率可达100.00%，对香蕉炭疽病菌、芒果炭疽病菌、芒果蒂腐病菌抑制率在80.00%以上，均优于对照药剂，与对照药剂差异显著；其次菊科的假臭草提取物，也表现出较好的抑菌活性，除对芒果蒂腐病菌抑菌效果不理想外，对供试的另5种靶标菌抑制率均大于60.00%，其中对水稻纹枯病菌抑菌效果最好，抑制率为100.00%，优于对照药剂，与对照药剂差异显著。

比较不同靶标菌的抑制率发现，不同靶标菌敏感性不同，其中香蕉炭疽病菌最敏感，对其抑制率大于60.00%的粗提物有7种，分别是黄樟、猪毛蒿、艾蒿、假臭草、雷公根、曼陀罗、野西瓜；其次是芒果炭疽病菌，有4种植物粗提物抑制率大于60.00%，它们是艾蒿、假臭草、黄樟、曼陀罗；其余供试病菌均对2种植物粗提物较为敏感。

比较不同科属的植物粗提物可以发现，同一科不同属的植物粗提物抑菌活性不同，例如菊科的假臭草提取物对水稻纹枯病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜枯萎病菌的抑菌效果显著高于猪毛蒿与艾蒿，而对芒果蒂腐病菌抑菌活性明显低于艾蒿。

2.2 粗提物杀虫活性测定结果

21种植物粗提物对莴苣蚜的触杀活性见表2。由表2可知，不同植物粗提物对莴苣蚜触杀活性不同，其中菊科的假臭草触杀活性最强，蚜虫死亡率达94.55%，与对照药剂的杀虫活性相当；其次是茄科的曼陀罗、菊科的艾蒿、大风子科的刺篱木、葡萄科的厚叶崖爬藤，蚜虫死亡率达到或超过80.00%，与对照药剂无显著差异；其余供试植物蚜虫死亡率大于50.00%的有菊科的猪毛蒿，豆科的平托落地花生、决明子，伞形科的雷公根，樟科的黄樟，三白草科的鱼腥草。

比较不同科属的植物粗提物可以发现，不同科的植物粗提物杀虫活性不同，菊科、茄科、大风子科植物粗提物杀虫活性较强，而旋花科、夹竹桃科、天南星科植物粗提物的杀虫活性不理想；相同科不同属的植物粗提物杀虫活性也不同，例如豆科的决明子粗提物的杀虫活性明显高于牛大力粗提物。

3 小结与讨论

在大力提倡绿色农业、贯彻执行农产品质量安全法的今天，积极研究和扩大农用植物资源的筛选范围具有重要的意义[10]。试验对21种植物粗提物进行抑菌、杀虫活性测定，发现7种植物粗提物对香蕉炭疽病菌的抑制率大于60.00%；黄樟粗提物对6种靶标菌、假臭草粗提物对5种靶标菌的抑制率都在60.00%以上，对水稻纹枯病菌的抑制率都为100.00%；有10种粗提物对莴苣蚜的触杀活性在60.00%以上，其中5种粗提物的触杀活性不低于80.00%，假臭草杀虫活性最强，蚜虫死亡率为94.55%。

试验同时证明，不同科、属的植物提取物抑菌或杀虫活性明显不同，相同科、属的植物提取物抑菌、杀虫活性也有差异，其原因可能是植物产生的次生代谢产物受植物生物学特性、生境、植物采摘时间、采摘部位等多方面因素影响。试验方法的选择也是药效发挥的重要影响因素，研究仅测定了供试植物粗提物对莴苣蚜的触杀活性，有必要进一步研究粗提物对其他害虫的拒食、趋避和杀虫活性，避免农用活性物质漏筛。研究仅对21种植物粗提物抑菌、杀虫作用进行了初步测定，为深入研究植物农用活性物质，有必要对高活性物质进行分离纯化，分析其结构，以发现新的农药先导化合物。

参考文献：

[1] 董培芬.生物农药应用现状及对策[J].安徽农学通报，2010， 16（3）：116-117，188.

[2] 徐凯宏.基于植物源提取绿色农药的研究现状与发展[J].林业科技，2009，34（3）：37-39.

[3] 张 舒.植物源杀虫剂的开发研究综述[J]. 湖北农业科学，2001，40（4）：53-55.

[4] 胡林峰，杨靖华，周 琳，等.植物源抗真菌活性物质研究进展[J].植物保护，2011，37（2）：5-13.

[5] 吴钜文，陈建峰.植物源农药及其安全性[J].植物保护，2002， 28（4）：39-41.

[6] 单承莺，马世宏，张卫明.我国植物源农药研究进展[J].中国野生植物资源，2011，30（6）：14-18，23.

[7] 王 杨，尹 卫.植物源杀菌剂国内外研究进展[J].湖北农业科学，2006，45（3）：382-384.

[8] 骆焱平，郑服从，张 宇.农药学科群实验指导[M].海口：海南出版社，2008.

[9] 薛 莹，胡冠芳，刘敏艳，等.重瓣曼陀罗对粘虫和蚜虫的杀虫活性研究[J].甘肃农业科技，2008（5）：11-14.

[10] 何 军，马志卿，张 兴.植物源农药概述[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2006，34（9）：79-84.