急性淋巴细胞白血病治疗前后血清sE－cad测定的临床意义

许媛媛，吴广胜，王晓敏，郎涛

（1石河子大学医学院第一附属医院，石河子 832008；2新疆自治区人民医院，乌鲁木齐 830000）

急性白血病（acute leukemia）是血液系统的恶性克隆性疾病。研究表明钙粘蛋白与肿瘤的分级、侵袭和预后等有关。上皮细胞钙粘蛋白（epithelial cell cadherin，E－cad）成为研究热点之一，其中可溶型上皮细胞钙粘蛋白（soluble epithelial cell cadherin，sE－cad）是存在于血液、细胞培养液中的片段。国内已有文献报道［1］，sE－cad在急性髓系白血病（acute non－lymphocytic leukemia，AML）患者血清中存在高表达。本实验通过检测急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）治疗前后血清中sE－cad的表达水平，并结合临床指标，为急性淋巴细胞白血病的预后评估和疗效观察提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2011年7月～2012年7月石河子大学医学院第一附属医院血液科急性淋巴细胞白血病（ALL）患者29例为病例组及健康体检人员30例为对照组。对照组均血象正常，无血液系统及感染、肿瘤、心、肝病、肾病、糖尿病、免疫性疾病，其中男14例，女16例，年龄（19～65）岁，平均年龄41.5岁。

1.1.1 病例组按FAB诊断标准再分组

ALL患者29例，均经临床及骨髓细胞形态与细胞化学染色确诊，其中L1 8例、L2 15例、L3 6例；ALL患者达完全缓解（complete remission，CR）者20例，未完全缓解（non－complete remission，NR）者9例，其中男16例，女13例（年龄（18～64）岁，平均年龄45岁）。

1.1.2 病例组按外周血白细胞计数再分组

高白细胞血症组（7例）和非高白血病血症组（22例）。高白细胞血症的判断标准：外周血白细胞计数 ≥10×1010／L。

1.2 方法

1.2.1 外周血标本采集

清晨采集肘静脉空腹血2mL，2000r／min离心10min，取上清置－80℃冰箱冻存。

1.2.2 sE－cad检测

采用ELISA法测定，人sE－cad Elisa试剂盒购自上海西唐公司，实验操作严格按照说明书进行，用酶标仪测450nm波长吸光度（A），用不同浓度的标准品按A值和sE－cad浓度绘制标准曲线，根据被测标本的A值在曲线上查寻相应的sE－cad质量浓度（ng／mL）。

1.3 统计学方法

应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。数据用均数±标准差（¯）表示，多组比较采用方差分析，两组比较用两独立样本t检验和配对样本t检验，两变量间关系用直线相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ALL患者各组血清sE－cad水平比较

ALL患者初治组血清sE－cad水平及NR组血清sE－cad水平明显高于对照组及CR组，差异均有统计学意义（P＜0.01），结果见表1。

表1 ALL患者各组血清sE－cad水平比较Tab.1 The serum level of sE－cad in different acute lymphoblastic leukemia groups

2.2 ALL患者治疗前后血清sE－cad水平比较

ALL患者血清sE－cad水平治疗达CR后血清sE－cad水平较治疗前明显下降，差异有统计学意义（P＜0.01），NR组治疗前后差异无统计学意义（P＞0.05），结果见表2。

表2 ALL患者CR组与NR组治疗前后血清sE－cad水平比较The serum levels of sE－cad in CR group and NR group before and after the treatment

2.3 ALL患者FAB各亚型比较

ALL患者FAB各亚型血清sE－cad水平无显著差异（P＞0.05）。结果见表3。

表3 ALL各亚型血清sE－cad水平比较Tab.3 The serum level of sE－cad in different acute lymphoblastic leukemia types

2.4 ALL患者高白细胞血症组和非高白细胞血症组比较

ALL患者高白细胞血症组血清sE－cad水平明显高于非高白细胞血症组，差异有统计学意义（P＜0.01），见表4。

表4 高白细胞血症组与非高白细胞血症组血清sE－cad水平比较Tab.4 The serum levels of sE－cad in high white blood cell viremia group and non－high white blood cell viremia group

2.5 相关分析

ALL患者治疗前后血清sE－cad水平与与骨髓原始幼稚细胞百分数呈正相关关系（r＝0.687，P＜0.01）；但sE－cad水平与年龄、外周血白细胞计数、血小板计数及血红蛋白含量差异均无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

E－cad是一种钙离子依赖的细胞间粘附分子，存在于上皮细胞，参与细胞的粘附和信息传导过程［2］。E－cad有两种存在形式：胞膜型E－cad和可溶型上皮细胞钙粘蛋白（sE－cad）。胞膜型E－cad是一种相对分子质量为120ku的跨膜糖蛋白，在一定的条件下，经蛋白酶降解可以产生80ku左右的片段，即sE－cad。sE－cad与肿瘤的分级和预后均有一定的相关关系［3］。Chung等［4］及 Weiss等［5］分别对食管癌、大肠癌患者血清sE－cad进行观察，发现病人组血清sE－cad水平明显高于正常对照组，术后血清sE－cad水平下降，因此血清sE－cad水平可能成为预后监测的一项重要指标。

肿瘤细胞间的粘附下降是导致肿瘤发生、发展的重要原因之一［6］。E－cad的粘附功能在肿瘤中丧失［7］。胞膜型E－cad可介导造血细胞与基质间的粘附、具有调节祖细胞和造血微环境（HME）的作用，胞膜型E－cad的下调可能参与了白血病的发生和发展，导致不成熟细胞释放入血［8］。高峰等［9］应用RT－PCR方法证明了白血病细胞株E－cad基因100%发生甲基化，从而引起E－cad表达降低或缺失，由于骨髓血单个核细胞（BM－MNC）表面E－cad的脱落、进入血循环后即降解为sE－cad导致血清sE－cad的高表达，故外周血中存在sE－cad的高表达提示细胞间粘附力下降。急性髓系白血病患者血清sE－cad水平显著地高于正常人组，复发组又明显高于未复发组对照组sE－CAD含量为（2.1±0.58）ng／mL，AML患者治疗前sE－CAD 含量为（8.8±5.4）ng／mL，治疗后3个月sE－CAD含量为（4.1±2.3）ng／mL，复发者sE－CAD 含量为（8.6±5.5）ng／mL，未复发者sE－CAD含量为（2.3±0.61）ng／mL［1］。sE－cad可能是一个早期诊断、鉴别、判断复发、预后和疗效观察的良好指标。

本研究发现，初治ALL患者sE－cad水平显著高于正常对照组，治疗后未完全缓解者sE－cad水平较治疗前无变化，治疗后完全缓解者sE－cad下降至正常水平对照组sE－CAD含量为（25.74±7.79）ng／mL，初治组sE－CAD 含量为（83.98±22.62）ng／mL，完全缓解组治疗前sE－CAD含量为（84.26±22.49）ng／mL，治疗后sE－CAD含量为（27.77±10.21）ng／mL，未完全缓解组治疗前sE－CAD含量为（83.35±24.27）ng／mL，治疗后sE－CAD含量为（75.68±14.01）ng／mL。本研究说明，ALL患者sE－cad水平与患者的疾病状态有关，提示监测、观察血清sE－cad水平对判断患者病情及观察疗效有重要意义。

ALL患者血清sE－cad水平与骨髓原始幼稚细胞比例呈正相关（相关系数r＝0.687，P＜0.01）。提示升高的sE－cad可能主要来源于白血病细胞，说明sE－cad与白血病患者的肿瘤负荷具有良好的相关性，可以作为白血病细胞负荷的一项重要指标。FAB各亚型间sE－cad水平无显著差异，提示sE－cad水平不能作为ALL分型的指标，且sE－cad水平与患者年龄、外周血白细胞计数、血小板计数及血红蛋白含量无直接相关，但高白细胞血症患者血清sE－cad显著高于非高白细胞血症患者高白细胞血症组sE－CAD含量为（111.18±21.23）ng／mL，非高白细胞血症组sE－CAD含量为（75.32±15.11）ng／mL。胞膜型E－cad表达下调导致白血病细胞之间及细胞与基质之间的黏附能力降低，从而使白血病细胞获得从骨髓中迁移出去的动力，白血病细胞释放到外周血中并进一步发生发展，导致高白细胞血症的发生。赵文海等［8］报道，胞膜型E－cad表达下调可能是导致高白细胞血症发生的重要分子病理学机制之一，且胞膜型E－cad的表达与血液中sE－cad的表达呈反比。本实验初步揭示了ALL患者血清sE－cad水平的升高与高白细胞血症的发生关系密切。

在实体瘤中，肿瘤细胞产生的基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）不仅参与结缔组织细胞外基质（ECM）的降解，而且还对肿瘤细胞的黏附和能动性有影响，Symowicz J等［10］研究认为，基质金属蛋白酶－9（matrix metalloproteinase－9，MMP－9）可降解细胞膜 E－cad，致血清sE－cad片段的水平增高，而sE－cad又可上调MMP－9水平，这样便形成恶性循环。在白血病中是否也存在类似的机制有待进一步研究。

目前，sE－cad在实体瘤的研究成为热点。sE－cad在多种实体瘤的血清中高表达，并与肿瘤的诊断、分期、转移、复发、疗效及预后关系密切。检测sE－cad在血清中的高表达与急性淋巴细胞白血病的预后具有重要意义。随着相关研究的深入，能进一步探索白血病的发病机制，从而为白血病特异性的诊断和治疗靶点提供更加可靠的依据。

［1］刘惠杰.急性髓系白血病患者治疗前后血清VEGF和sE－cad检测的临床意义［J］.放射免疫学杂志，2006，19（6）：535－536.

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［3］Schmalhofer O，Brabletz S，Brabletz T.E－cad，beta－cate－nin，and ZEB1in malignant progression of cancer［J］.Cancer Metastasis Rev，2009，28（1－2）：151－166.

［4］Chung Y，Law S，Kwong D L，et al.Serum soluble E－cad is a potential prognostic marker in esophageal squamous cell carcinoma［J］.Dis Esophagus，2011，24（1）：49－55.

［5］Weiss J V，Klein－Scory S，Kubler S，et al.Soluble E－cadherin as a serum biomarker candidate：elevated levels in patients with late－stage colorectal carcinoma and FAP［J］.Int J Cancer，2011，128（6）：1384－1392.

［6］David J M，Rajasekaran A K.Dishonorable Discharge：The Oncogenic Roles of Cleaved E－Cadherin Fragments［J］.Cancer Res，2012，72（12）：1－7.

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［8］赵文海，韩树海，马琳娜，等.E－cad在中枢神经系统白血病患者骨髓中的表达及意义［J］.中国老年学杂志，2010，（36）：246－247.

［9］高峰，李艳，刘巍，等.急性髓系白血病E－cad基因表达和CpG岛甲基化状态的研［J］.中华血液学杂志，2006，27（1）：25－27.

［10］Symowicz J，Adley B P，Gleason K J，et al.Engagement of collagen－binding integrins promotes matrix metalloproteinase－9－dependent E－cadherin ectodomain shedding in ovarian carcinoma cells［J］.Cancer Res，2007，67（5）：2030－2039.