活血通络口服液提取工艺研究

陈 煜 陕西省富平县医院药剂科（富平711700）

中风（Stroke）是中医学对急性脑血管病的统称，西医称之为脑卒中，分为出血性和缺血性两类。高血压、动脉硬化、脑血管畸形、脑动脉瘤等可导致出血性中风［1］；经过医务工作者多年努力和临床验证，我国传统中药在中风方面的作用已受到了医药界的普遍重视［2］。活血通络口服液为我院院内制剂，由黄芪、当归、赤芍、地龙、川芎、红花、桃仁、全蝎、牛膝、桑枝、䗪虫、川断等12味中药组成，具有益气温阳，活血化瘀之功效，主治气虚血瘀之胸痹心痛心悸之证。方中黄芪为君药，黄芪微温补气，气旺血行；黄芪辛散微寒，祛瘀生新，活血不伤正，寒温并用，瘀去络通。当归、红花辛温发散，活血行气，为血中气药。又得到黄芪的固摄而不致于出现气虚气陷之状。地龙、全蝎祛风通络，再配合牛膝、续断、桑枝，补益肝肾，强骨舒络利关节，以达补气活血、化瘀通络之目的。其组方严谨，益气温阳，活血祛瘀，攻补兼施，祛邪不伤正，相益得彰，治疗虚实夹杂胸痹心痛疗效甚佳。但该制剂的制备工艺未进行系统研究，导致其质量不稳定，影响疗效。为了更进一步保证制剂的质量，笔者本着优化工艺参数，并尽可能降低成本的原则，在旧工艺的基础上，以阿魏酸为考察指标，对活血通络口服液提取工艺中乙醇的浓度、用量及提取时间和次数等工艺参数进行科学系统的考察，筛选出稳定可靠、高效经济的提取工艺，为其生产工艺改造提供科学依据。

1 仪器与试药 LC2010－CHT液相色谱仪（Shimadzu），LCsolution化学工作站；PB3002－S电子分析天平。阿魏酸标准品（中国生物制品检定所）；色谱分析用乙腈购自MERCK公司，其余试剂均为分析纯。

药物提取：按处方比例称取黄芪、当归、赤芍、地龙、川芎、红花、桃仁、全蝎、牛膝、桑枝、䗪虫、川断等12味中药，共9份（药材均购自西安万寿路药材市场，全部符合2010版《中国药典》一部对应药材项下规定）。按正交设计表加入乙醇，回流提取，回收乙醇后，冷却抽滤，滤液待测。

2 方 法 2.1 指标选择 复方中当归活血通络为主药，其含量测定方法成熟，提取物中阿魏酸含量可用液相色谱法检测，故此选为质量控制指标。

2.2 阿魏酸含量测定方法 供试品溶液制备：药物提取所得滤液浓缩至约50mL，转移至50mL量瓶中，加稀乙醇定容摇匀。精密量取滤液0.5mL，置100mL量瓶中，加入稀乙醇稀释至刻度摇匀，过滤取滤液。

对照品溶液制备：精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。

测定：LC2010－CHT 液相色谱仪；C18柱（250mm×4.6mm ，5μm），流动相：乙腈－水（30：70）；检测波长270nm，柱温25℃；流速：1.0mL·min－1；样品处理后自动进样，进样量50μL，记录峰面积，按外标法计算阿魏酸提取量。

标准曲线绘制：制备阿魏酸梯度标准工作液进样，测定并绘制标准曲线。得回归曲线Y＝1367.2X＋24.231，R2＝0.9996，阿魏酸在检测浓度范围内线性良好。

2.3 正交试验 为筛选出活血通络口服液最佳制备工艺，采用正交设计试验对其醇提水沉工艺进行优选：即选取对提取效率最关键的醇浓度（A）、加醇量（B）、提取时间（C）和提取次数（D）4个影响因素，每个因素选3个水平（见表1），按L9（34）正交表进行试验并进行方差分析，确定优化工艺（见表2～3）。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交设计表

表3 阿魏酸方差分析表

3 结果与讨论 由方差分析结果显示，四个因素对阿魏酸的转移率影响主次关系为A＞D＞C＞B，其中A因素影响最为显著（P＜0.01），其次为C、D两因素 （P＜0.05），而B因素的影响无显著性意义（P＞0.05），为了节约能源和时间，我们综合考虑选择A2B1C2D2，即加70%乙醇6倍量提取，每次提取时间1.5h，提取2次做为最佳提取工艺。

本研究以活血通络口服液中当归所含成分阿魏酸为考察指标，保证了制剂质量和药效，文献中有关以阿魏酸为指标的当归提取方法很多，有水蒸气蒸馏后水提工艺［3］、乙醇回流提取工艺［4］、乙醇渗漉工艺［5］、以及近年来出现的SFE－CO2（超临界 CO2）提取工艺［6］。本工艺选取最简便操作的乙醇回流提取工艺进行了考察，在阿魏酸检测中对流动相进行了反复试验，确定乙腈－水（30：70）条件下样品分离良好，并减少以往水相中加酸对仪器和色谱柱的损害。

［1］ Butcher Ken.Inflammation in intracerebral hemorrhage：clearly present，but what is its role ［J］.Neurol India，2006，54（4）：352－353.

［2］ Murphy BD，Fox AJ，Lee DH，et al.Identification of Penumbra and Infarct in Acute Ischemic Stroke Using Compu－ted Tomography Perfusion－Derived Blood Flow and Blood Volume Measurements［J］.Stroke，2006，37（7）：1771－1777.

［3］ 孙代华，芦金清，周祖坤.正交试验优选当归芍药胶囊的提取工艺研究［J］.中成药，2004，6（1）：38－40.

［4］ 胡 杰，冯丽莉，崔福德.当归川芎中阿魏酸提取的研究［J］.时珍国医国药，2004，15（11）：732－733.

［5］ 赵迪加，张水寒，王宇红.妇炎宁中当归渗漉法提取工艺的研究及其与双提法样品的镇痛作用比较［J］.中成药，2007，29（9）：1360－1362.

［6］ 李桂生，马成俊，刘志峰，等.超临界CO2萃取法与水蒸气蒸馏法提取当归挥发油的比较［J］.中草药，2001，32（7）：581－583.