海口地区儿童感染流感嗜血杆菌的分布情况及耐药性分析

黄育敏，涂志华

流感嗜血杆菌(Hemophilus influenzae,Hi)是一种苛养革兰阴性菌,常寄居于正常人呼吸道，当人机体抵抗力下降时，可引起人类呼吸道感染，儿童原发呼吸道感染之后可以继发本菌引起的中耳炎、脑膜炎和菌血症等。随着流感嗜血杆菌分离率的不断提高和其耐药性的不断上升，其致病性已受到普遍关注。现对2010—2011年海口地区儿童感染的流感嗜血杆菌进行回顾性分析，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

1.1.1标本来源收集2010年1月—2011年12月海口地区住院患儿临床送检标本2 730份，包括痰液、咽拭子、血液、脑脊液、胸腹水等标本，共分离非重复流感嗜血杆菌158株。

1.1.2仪器及试剂全自动细菌鉴定仪分析仪VITE32及配套试剂，购自法国梅里埃公司。

1.1.3药敏纸片和培养基氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢呋辛、头孢他啶、左氧氟沙星、阿奇霉素、复方新诺明和Ⅴ+Ⅹ、Ⅴ、Ⅹ 因子、头孢硝噻吩(Nitrocefin)纸片为英国Oxoid 公司产品；巧克力培养基和嗜血杆菌试验培养基(HTM)药敏平板购自广州迪景生物有限公司，质控菌株为ATCC49247。

1.2方法

1.2.1细菌培养和鉴定标本接种于巧克力平板，置5%二氧化碳(CO2)、35℃培养箱培养18～24 h，挑取透明或半透明、扁平、湿润的露滴状疑似菌落做革兰染色和卫星试验，同时进行Ⅴ、Ⅹ、Ⅹ+Ⅴ因子需求试验进行筛选，全部菌株用VITEK32系统鉴定到种。

1.2.2β-内酰胺酶测定用Nitrocefin 纸片按说明书测定被试菌株的β-内酰胺酶。

1.2.3药敏试验采用临床实验室标准协会(CLSI)推荐的纸片扩散法(Kirby-Bauer)进行，根据CLSI 2010年颁布的判断标准进行药敏结果判断[1]。

1.3统计学方法采用世界卫生组织(WHO)提供的WHONET 5.6软件进行耐药性统计分析，耐药率比较采用SPSS 11.0软件进行χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1流感嗜血杆菌检出分布情况158株流感嗜血杆菌主要分离自痰标本125株，占79.1%；其次为咽拭子18株(占11.4%)、脑脊液5株(占3.2%)、血标本4株(占2.5%)和其他标本6株(占3.8%)。见表1。

2.2β-内酰胺酶检出情况158 株流感嗜血杆菌中，用Nitrocefin纸片法检测有15株产β-内酰胺酶,产酶率为9.5% (15/158)，药敏纸片法检测氨苄西林的耐药率为10.8%(17/158)；其中产酶株对氨苄西林全部耐药，非产酶株中有2株对氨苄西林显示耐药，但两种方法检测氨苄西林的耐药性比较差异无统计学意义(χ2=0.15,P>0.05)。

2.3药敏结果158株流感嗜血杆菌对复方新诺明的耐药率高达74.1%，对其他6种常用抗菌药物均呈较低的耐药水平，耐药率均<11%。见表2。

表1　流感嗜血杆菌在各种标本中的分布情况

表2158株流感嗜血杆菌对7种常用抗菌药物的敏感性〔n(%)〕

Table2The sensitivity of 158 strains of Haemophilus influenzae to 7 common antibiotics

抗菌药物流感嗜血杆菌耐药率 敏感率 氨苄西林17(10.8)138(87.3)阿莫西林/克拉维酸16(10.1)142(89.9)左氧氟沙星12(7.6)146(92.4)复方新诺明117(74.1)41(25.9)头孢呋辛15(9.5)143(90.5)阿奇霉素10(6.3)148(93.7)头孢他啶11(7.0)147(93.0)

3　讨论

流感嗜血杆菌是儿童呼吸道感染的常见的条件致病菌，但当患儿机体免疫力低下时可进一步引起败血症、脑膜炎等严重全身性感染。本组数据显示：2 730份患儿临床送检标本中共分离非重复流感嗜血杆菌158株，阳性率为5.8%，因该菌人工培养时需要特殊的Ⅴ因子和Ⅹ因子，因此培养较为困难，导致该菌临床检出率较低。本研究结果可见流感嗜血杆菌主要分离自痰标本,高于许浦生等[2]报道；其次为咽拭子、脑脊液和血标本等。

本研究药敏结果显示，流感嗜血杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、左氧氟沙星、头孢呋辛、头孢他啶、阿奇霉素的耐药率均小于11%，这些药物对流感嗜血杆菌具有较好的抗菌活性，可作为临床治疗的首选药物。阿莫西林/克拉维酸、头孢呋辛、头孢他啶对β-内酰胺酶均有抑制或抵抗作用，但作用方式有区别，克拉维酸是β-内酰胺酶不可逆的竞争型抑制剂；头孢呋辛属第二代头孢菌素，对多种β-内酰胺酶较稳定；头孢他啶属第三代头孢菌素，对β-内酰胺酶高度稳定，三者随着对β-内酰胺酶稳定性的升高，对流感嗜血杆菌的敏感率也相应升高，分别为89.9%、90.5%、93.0%，此数据可作为抗菌药物选择参考。

国内外对流感嗜血杆菌的耐药性研究始于20世纪70年代，发现耐氨苄西林的主要耐药机制是细菌产生了质粒介导的β-内酰胺酶，80年代初发现了不产β-内酰胺酶的氨苄西林耐药株。其耐药率呈现出明显的地区差别,在2.3%～58%之间[3-6],并有逐年上升的趋势。本研究结果显示对耐氨苄西林耐药率为10.8%,与俞桑洁等[5]和汪复等[6]的报道接近,但明显低于陈慧莉等[7]和柯永坚等[8]的报道。该菌β-内酰胺酶的产生率为9.5%，明显低于胡艳华等[9]的报道，药敏显示β-内酰胺酶阳性株对氨苄西林全部耐药，有2株β-内酰胺酶阴性而对氨苄西林耐药(BLNAR)菌株出现，但两种方法对氨苄西的耐药性检出无差异，因此用β-内酰胺酶检测来快速预测对氨苄西林的耐药性还是可行的。

1CLSI.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S].2010，M100-S20.

2许浦生,许建邦,王艳明.综合医院下呼吸道感染病原菌分离及动态变化[J].广东医学,2010,31(5):623-626.

3Stratchounski LS,Kretchikova OI,Reshedko GK,et al.Antimicrobial susceptibility of nasopharyngeal isolates of Haemophilus influenzae from healthy children in day-care centers:Results of multicentre study in Russia[J].Int J Antimicrob Agent,2001,18(4):347-351.

4Kwak YH,Jung HS,Park SE,et al.Serotype and antimicrobial susceptibility in clinical isolates of Haemophilus influenzae from Korean children in prevaccination era[J].J Korean Med Sci,2000,15(6):616-622.

5俞桑洁,沈叙庄,袁林,等.儿童社区获得性呼吸道感染的肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药性监测[J].中国抗感染化疗杂志,2005,5(5):297-300.

6汪复,朱德妹,胡付品,等.2009 年中国CHINET细菌耐药性监测[J].中国感染与化疗杂志,2010,9(5):325-334.

7陈慧莉,范红,陶传敏,等.连续3年流感嗜血杆菌对常用抗生素的耐药性监测[J].华西医学,2007,22(2):246-247.

8柯永坚,朱红军,肖亮生,等.流感嗜血杆菌耐药性分析[J].实验与检验医学,2010,6(28):575-576.

9胡艳华，刘东华，鲁艳.孝感地区儿童呼吸道流感嗜血杆菌感染现状[J].中华全科医学,2011,9(10):1549-1550.