高效液相色谱法测定麻杏石甘合剂中甘草酸的含量*

2013-04-18马兰

天津药学 2013年6期

马　兰

(天津市北辰区药品检验所，天津　300400)

麻杏石甘合剂是天津市北辰区中医院研制的制剂品种，由麻黄、炙甘草、苦杏仁等5味药组成，具有镇咳、祛痰的作用。甘草酸是炙甘草中主要成分，甘草酸对该制剂的功效具有很大的支持作用。本实验建立了高效液相色谱法测定麻杏石甘合剂中甘草酸含量，可作为控制麻杏石甘合剂质量的有效手段。

1　仪器与试验

1.1仪器美国LabAlliance高效液相色谱仪，分析之星工作站；色谱柱：Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Sartorius BP190S、BP211D型电子天平。

1.2试药甘草酸铵对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110731-200306，供含量测定用，以甘草酸计含量为91.23%)，甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)，水为纯化水(自制)，醋酸铵、冰醋酸均为分析纯(天津金汇太亚化学试剂有限公司)；麻杏石甘合剂(由天津市北辰区中医医院提供，批号20121224、20121226、20121228，规格：100 ml/瓶)。

2　方法与结果

2.1色谱条件的确定

2.1.1检测波长的确定《中国药典》2010年版一部有关甘草酸含量测定方法，大多数采用250 nm[1]波长检测。采用甘草酸铵对照品的甲醇稀溶液在波长为200～400 nm进行紫外光谱扫描，在252 nm处有最大吸收峰。故采用《中国药典》检测甘草酸常用波长250 nm为本实验的检测波长。

2.1.2流动相的考查本品采用了甲醇-0.2 mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸[1，2](62∶37∶1)，参照《中国药典》2010年版一部启脾丸项下的规定及相关文献，选择和《中国药典》相同的流动相甲醇-0.2 mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(62∶37∶1)作为本实验的流动相。

2.1.3色谱条件与系统适用性试验参照《中国药典》2010年版一部有关含量测定方法并根据以上考查制定了本含量测定方法的色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.2 mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(62∶37∶1)为流动相，检测波长：250 nm，柱温：40 ℃，流速：0.9 ml/min，理论塔板数按甘草酸峰计算应不低于2500。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品18.66 mg，置100 ml量瓶中，加60%甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮备液3 ml，置10 ml量瓶中，加60%甲醇制成每1 ml含甘草酸0.051 07 mg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备精密量取供试品(20121224)3 ml，置25 ml量瓶中，加60%甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性样品溶液的制备按照处方比例，取除去炙甘草的其他药味，按制备工艺制得阴性样品。按上述“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，进样20 μl进行测定，结果阴性无干扰。见图1。

2.3标准曲线的制备精密吸取甘草酸铵对照品贮备液(0.1866 mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml，分别置10 ml的量瓶中，加60%甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1.3”项下色谱条件分析，分别精密吸取20 μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以甘草酸对照品进样量(μg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果甘草酸在17.02～85.12 μg范围内线性关系良好,其回归方程为Y=12 473.6X-21 219.6(r=0.999 9，n=6)。

2.4精密度试验取对照品溶液(0.051 07 mg/ml)20 μl，按“2.1.3”项下色谱条件分析，连续进样6次，测定甘草酸峰面积，测得甘草酸峰面积的RSD为0.66%，符合要求。

1.甘草酸

2.5重现性试验取样品(批号20121224)按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液5份，按“2.1.3”项下色谱条件分析，精密量取供试品溶液20 μl进样，分别计算甘草酸含量，样品中甘草酸平均含量为0.5054 mg/ml，RSD为0.61%，符合要求。

2.6稳定性试验精密量取供试品溶液(批号20121224)20 μl，于0、2、4、6和8 h进样，测定甘草酸含量，其RSD为0.43%，结果表明供试品在8 h内稳定。

2.7回收率试验精密量取甘草酸铵对照品贮备液(0.1866 mg/ml)9份，每份5.0 ml，分别置25 ml量瓶中，各精密加入已测知含量的样品(批号20121224)0.5、1和1.5 ml，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1.3”项下色谱条件分析，计算回收率，结果平均回收率为102.1%，RSD为0.39%。结果见表1。

2.8样品的测定取3个批号的供试品(20121224、20121226、20121228)，按照“2.3.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1.3”项下色谱条件分析，进样量20 μl，注入液相色谱仪，测定甘草酸含量。结果见表2。

表1　回收率测定结果

表2　样品测定结果

3　讨论

3.1提取溶剂的考查本品采用60%甲醇作溶剂，参照《中国药典》2010年版一部胃舒宁颗粒项下的规定，选择和《中国药典》相同的溶剂60%甲醇作为本品的溶剂。

3.2取样量考查取样品(20121224)，分别精密量取1、3和5 ml至25 ml量瓶中，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，取续滤液，按“2.1.3”项下色谱条件分析，测定样品中甘草酸含量。结果见表3。

表3　不同取样量测定结果

上述结果显示，取样量为3 ml时甘草酸溶出更完全，故选择3 ml为本实验取样量。

3.3溶剂用量考查取上述同一批号样品，分别精密量取3 ml至25 ml和50 ml量瓶中，用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，按“2.1.3”项下色谱条件分析，测定样品中甘草酸含量。结果见表4。

表4　不同溶剂用量测定结果

上述结果显示，溶剂用量25 ml甘草酸溶出更完全，故溶剂用量选择25 ml。

3.4不同色谱柱及不同仪器对含量测定的影响

3．4.1不同色谱柱对含量测定的影响取样品溶液，使用美国LabAllianceTM高效液相色谱仪，分别使用 Lanbo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)与Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，按照“2.1.3”项下色谱条件分析，测定样品中甘草酸含量。结果见表5。