青天葵中鼠李柠檬素在大鼠体内的药代动力学研究

蔡周权，袁浩宇，龙恩武

(1．四川省科学城医院药剂科，四川 绵阳 621900;2．核工业四一六医院药剂科，四川 成都 610051;3．四川省人民医院药学部，四川 成都 610072)

青天葵是我国传统出口中药，主要产于广东、广西、云南、四川等地[1]。青天葵清热解毒、清肺止咳效果显著，现代药理研究证实其具有抗病毒、抗肿瘤及免疫增强作用，是一种药理作用显著、临床疗效确切的特产药材[2-3]。目前，青天葵的公开报道不多，其研究多在资源、性状、栽培、成分分析上，尚未见其体内过程的报道。鼠李柠檬素是青天葵中重要的黄酮类化合物[4]，也是质量控制中常用的重要指标之一[5]。本研究中以青天葵中鼠李柠檬素为指标，建立了血药浓度测定方法，并对大鼠口服后的体内情况进行研究，为全面评价青天葵质量、制剂开发及临床应用等奠定药代动力学基础。现报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010C HT型高效液相色谱仪(日本岛津)，紫外检测器、泵及柱温箱;BS210S型电子天平(德国赛多利斯);TGL-16型台式离心机(上海安亭科学仪器厂);YHK-Ⅱ型液体快速混合器(江西医疗器械厂)。鼠李柠檬素对照品(自制，经 UV，IR，MS，NMR确证结构，纯度大于98%);青天葵提取物(自制，鼠李柠檬素纯度大于85%);甲醇、乙腈为色谱纯(美国Fisher公司);水为重蒸水;其余试剂均为分析纯。健康SD大鼠(体重250～300 g，雌雄各半)，购自四川大学实验动物中心，试验前适应性喂养1周。

2 方法与结果

2．1 溶液制备

取鼠李柠檬素对照品约25 mg，精密称定，置25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容，摇匀即得浓度为1 000 μg/mL的贮备液，4℃冷藏保存。取青天葵提取物适量，置25 mL容量瓶中，重蒸水超声溶解，使鼠李柠檬素质量浓度为7．5 g/L，作为大鼠灌胃液。

2．2 血浆样品预处理

精密量取血浆样品 100 μL，加入甲醇 20 μL，10%三氯乙酸溶液100 μL 沉淀蛋白，旋涡混匀 3 min，1．2×104r/min离心 5 min，精密量取上清液20 μL直接进样分析。

2．3 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Hypersil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)，加保护柱;流动相:甲醇-乙腈-0．2%磷酸水溶液(30∶35∶35);检测波长:366 nm;柱温:35 ℃;流速:1 mL/min;进样量:20 μL。在上述色谱条件下，测得空白血浆、空白血浆加鼠李柠檬素对照品及大鼠灌胃后2 h血浆样品，色谱图见图1。可见，鼠李柠檬素保留时间约为14．5 min，血浆中内源性物质不干扰鼠李柠檬素的分离测定。

图1 高效液相色谱图

2．4 方法学考察

标准曲线制备:精密吸取鼠李柠檬素贮备液适量，分别用甲醇稀释成系列质量浓度的工作溶液，各取20 μL加入100 μL空白血浆中，使血浆质量浓度分别为 0．05，0．10，0．25，0．50，1．00，2．50，5．00，10．00 μg/mL，按 2．2 项下方法测定，记录色谱图和峰面积。以药物峰面积(A)为纵坐标血浆中药物浓度(C，μg/mL)为横坐标，进行加权回归，得标准曲线方程 A=1．26 × 103C-8．98 ×102(r=0．999 3，权重为 1/C2)。质量浓度在0．05～10．00 μg/mL范围内，药物峰面积与质量浓度线性关系良好。检测限为10 ng/mL。

方法回收率试验:精密量取鼠李柠檬素工作溶液，各取20 μL加入100 μL空白大鼠血浆中，得低、中、高3个已知质量浓度样品，按标准曲线方法计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

提取回收率试验:精密量取鼠李柠檬素工作溶液，各取20 μL加入100 μL空白大鼠血浆，配制低、中、高3个已知质量浓度样品，按标准曲线方法操作，记录峰面积;另以水代替空白血浆，将低、中、高3个已知质量浓度样品按标准曲线方法操作，记录峰面积。以前后2种处理测定得到的峰面积之比计算提取回收率，结果见表2。

表2 提取回收率试验结果(n=6)

精密度试验:按方法回收率试验项下方法，测定鼠李柠檬素0．10，1．00，10．00 μg/mL 3 个已知质量浓度样品，以 1 d 内 5 次测定结果计算日内精密度，1周内3 d测定结果计算日间精密度。结果表明，日内相对标准差分别为 3．95%，4．33%，3．36%，日间相对标准差分别为 10．58%，9．89%，7．55%。

稳定性试验:配制低、中、高(0．10，1．00，10．00 μg/mL)3 个质量浓度血浆样品数份，按2．2项下方法操作，分别于室温下放置0，1，2，4 h后测定，考察样品在室温条件下的稳定性;放置于-20℃ 冰箱中反复冻融3次，考察冻融对药物稳定性的影响;在-20℃冰箱中冷冻15 d后，考察药物冷冻放置的稳定性。结果的RSD值均小于10%，表明血浆样品在室温下放置4 h、反复冻融3次、-20℃冰箱中冷冻保存15 d后稳定性均良好，满足样品分析检测要求。

2．5 动物试验

SD大鼠8只，雌雄各半，试验前禁食12 h，全程不禁水;按120 mg/kg灌胃给予青天葵供试液，于给药前及给药后0．25，0．5，0．75，1，1．5，2，4，6，8，12，24 h 时尾静脉断尾取血约 0．3 mL，离心分离血浆，置-20℃冰箱中保存待测。血药浓度-时间曲线见图2。用DAS 2．1．1版药代动力学软件进行处理，计算药代动力学参数。结果鼠李柠檬素在大鼠体内过程符合二室模型，药代动力学参数见表3。

图2 鼠李柠檬素血药浓度-时间曲线(n=8)

表3 灌胃给予青天葵后鼠李柠檬素的药代动力学参数(n=8)

3 讨论

鼠李柠檬素是青天葵中主要的黄酮类成分之一，也是表征其质量的重要成分。研究结果显示，大鼠单剂量灌胃给予120 mg/kg青天葵提取物后，鼠李柠檬素体内处置符合二室模型，约1．5 h达峰，吸收较为迅速;消除半衰期为(8．993±2．568)h，消除较慢;中心室分布容积为(196．122±26．983)L/kg，体内分布广泛。

青天葵药用价值高，野生资源较紧缺，而对其药学的研究多集中在资源、生物学、成分分析及疗效上[6]，缺乏物质基础的体内情况报道。本研究以其中代表性成分鼠李柠檬素为指标，初步考察了大鼠口服后的体内运行过程，为青天葵药材的全面质量控制提供生物药剂学指标与方法，也为将来的口服制剂剂型设计、处方筛选、工艺优化和质量评价奠定了基础。

[1]梅全喜．青天葵的资源、栽培与鉴别研究进展[J]．中国药房，2008，19(18):1 426-1 428．

[2]邱 莉，徐灵源，廖建华，等．青天葵植物化学成分和药理活性研究进展[J]．时珍国医国药，2011，22(9):2 258-2 260．

[3]梅全喜．青天葵的化学成分、药理作用与临床应用研究进展[J]．中华中医药学刊，2008，26(10):2 239-2 241．

[4]张 丽，赵钟祥，林朝展，等．青天葵化学成分的研究[J]．中药新药与临床药理，2012，23(4):453-455，479．

[5]周燕园，甄汉深，袁叶飞，等．HPLC法测定青天葵中鼠李柠檬素和鼠李秦素[J]．中草药，2009，40(7):1 152-1 154．

[6]黄 松，陶 艳，蒋东旭，等．青天葵的药学研究概况[J]．时珍国医国药，2007，18(10):2 453-2 454．