液相色谱串联质谱快速测定牛奶中氟甲喹残留量

黄卫红　孙棣

【摘 要】建立快速简便的牛奶中氟甲喹的测定方法；以乙腈为提取剂，正己烷除脂后LC-MS/MS测定；氟甲喹线性范围为0.2～50ng/mL，检出限为0.2μg/kg，加标平均回收率为84.3～101.0%，RSD小于10%。该方法定量准确可靠，可用于牛奶中氟甲喹的测定。

【关键词】牛奶；氟甲喹；LC-MS/MS

氟甲喹（flumequine）为第二代氟喹诺酮类抗菌药，其抗菌谱广，杀菌力强，对治疗革兰氏阴性菌感染，特别是对大肠杆菌、支原体、嗜水气单胞菌引起的畜、禽及水生动物疾病有较好疗效[1-2]。由于其具有高安全性和渗透性，在无公害养殖、出口畜产品和水产品中得到广泛应用，但其产生的毒副作用仍会对人体产生直接的危害，在食品中才残留问题已经引起人们的关注。有关生物样品中氟甲喹的测定已有报道，主要是高效液相色谱法[3-4]，前处理过程也较为复杂繁琐，本文建立了牛奶中氟甲喹的液相色谱-串联质谱测定法，选择乙腈提取样品后正己烷除脂，结果表明，该法简单快速，灵敏度高，适用于牛奶中氟甲喹的快速测定。

1.实验部分

1.1仪器设备

TSQ Quantum Ultra三重四级杆质谱联用仪，ThermoFisher公司；氮气发生器，PEAK公司；Mnltireax振荡混匀器，Heielolph公司；milli-QAcademic超纯水系统，密理博中国有限公司；TufboVap自动氮吹仪，BIOTAGE公司。

1.2标准品及试剂

氟甲喹购自于Dr.Ehrensforfer GmbH Germany。甲酸、乙酸、乙腈、正己烷：色谱纯，Merck公司；超纯水。

1.3标准溶液的配制

储备溶液（1mg/mL）准确称取10mg氟甲喹标准品，分别用乙腈定容至10mL，配制成1mg/mL的标准储备液-20℃冰箱保存；中间溶液（10μg/mL）分别准确量取标准储备液1.00mL置于100mL容量瓶中，用乙腈定容后-20℃冰箱保存；标准工作使用液配制，将中间溶液用初始流动相逐级稀释配制成氟甲喹分别为0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL，-20℃冰箱保存。

1.4样品处理

取样品2g，加入1%乙酸乙腈6mL振荡提取后4000转离心，取上清液于离心管中，重复提取一次，合并上清液，加入6mL正己烷涡旋提取后离心取下层于离心管中。45℃下氮气流吹干，2mL初始流动相复溶后加入2mL正己烷涡旋离心后取下层过膜进样。

1.5液相色谱及质谱条件

液相色谱条件：色谱柱为Thermo-Hypersil GOLD柱（3μm×2.1mm×100mm）；柱温40℃；流速0.5mL/min；进样量10μL；梯度条件见表1。

质谱条件：离子源ESI（+）参数：喷雾电压3000V；鞘气40arb、辅助气5arb、离子传输毛细管温度为350℃。MRM优化参数见表2。

2.结果及讨论

2.1标准曲线和检出限

配制氟甲喹标准工作液为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mL，线性方程见表3。

2.2加标回收率和精密度

以三组阴性样品为测试样品，氟甲喹，高、中、低分别为0.5、2.0、10.0ng，每一水平在相同实验条件下做6个平行样，计算回收率及相对标准偏差，结果见表4。

表4 加标回收率及精密度（n=6）

2.3 LC-MS/MS分析

通过对流动相梯度洗脱和离子源参数的优化，使氟甲喹在色谱柱上有合适的保留并获得较好的检测灵敏度，通过对准分子离子二级质谱扫描，发现主要碎片离子为262.0/244.0、262.0/202.0、，三组子离子中262.0/244.0的丰度最强，但其信噪比却最低，可能是因为该子离子的产生是由于母离子脱水形成，基线噪音比较高，故最终确定定量离子为262.0/202.0、定性离子为262.0/126.0，三个离子对的相对丰度图和色谱图见图1。

本文在参照现行的国内氟甲喹检测方法的基础上对样品前处理和检测方法进行改进，方法简单易行，有利于批量样品的测定。

3.结论

采用1%乙酸乙腈作为提取剂，正己烷脱脂后，用LC-MS/MS方法测定牛奶中氟甲喹的含量，结果表明方法前处理简单快速，回收率好，检出限低，满足牛奶中进出口的检测要求，目前将该方法扩展到动物组织中氟甲喹的检测中也获得满意的方法学。

【参考文献】

[1]沈建忠，谢联金.兽医药理学[M].北京：中国农业大学出版社，2000，162-167.

[2]王祖兵.兽药市场指南[J].2005，9：14.

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[6]SN/T1921-2007.进口动物源性食品中氟甲喹残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法[S].