桑姜感冒胶囊中总黄酮含量的测定

朱坤宁，陈园园，周洋，杨永寿

（大理学院药学与化学学院，云南大理671000）

桑姜感冒胶囊中总黄酮含量的测定

朱坤宁，陈园园，周洋，杨永寿*

（大理学院药学与化学学院，云南大理671000）

目的：建立桑姜感冒胶囊中总黄酮含量的测定方法。方法：采用紫外-可见分光光度法，以芦丁为对照品，以506 nm作为测量波长进行测定。结果：芦丁在0.5~3.0 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系（r=0.999 7），平均回收率为96.63%，RSD为1.91%。结论：该方法操作简便、准确、重现性好，可用于测定桑姜感冒胶囊中总黄酮的含量。

桑姜感冒胶囊；总黄酮；紫外-可见分光光度法

桑姜感冒胶囊收载于中药部颁标准（试行，标准编号：YBZ01242005）中，由桑叶、菊花、紫苏、连翘、苦杏仁、干姜等药材制备而成的胶囊制剂，具有散风清热、祛寒止咳等功效，用于风热感冒、咽喉疼痛等并发症〔1〕。处方中的桑叶、菊花、紫苏、连翘等四味药材均含有大量的黄酮〔2-5〕，黄酮类化合物是该制剂中的主要有效成分之一。研究证明，黄酮类成分具有抗癌防癌、抗病毒的作用〔6-7〕，且对心血管系统有显著效果〔8〕。但现行的质量标准并未对桑姜感冒胶囊中的总黄酮进行测定，为更好地控制桑姜感冒胶囊的质量，确保药品的疗效，本实验采用紫外-可见分光光度法对该制剂中总黄酮的含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器紫外-可见分光光度计（TU-1901，北京谱析通用仪器有限责任公司），电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9420A，上海-恒科技有限公司），梅特勒电子天平（AE240，梅特勒-托利多仪器有限公司），超声波清洗器（SK5200H，上海科导超声仪器有限公司），离心机（TGL-16G，上海安亭科学仪器）。

1.2 试药芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-2010128），桑姜感冒胶囊（四川好医生制药股份有限公司，批号：110127、112706、110148），水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品25.00 mg置25 mL量瓶中，加60%乙醇适量，超声溶解，定容、摇匀，即得浓度为1.00 mg/mL的芦丁对照液备用。

2.2 供试品溶液的制备精密称取本品内容物0.2 g，置圆底烧瓶中，加入60%乙醇25 mL，摇匀，超声提取30 min，离心，取上清液用0.45 μm的滤膜过滤，即得。

2.3 测量波长的选择分别精密取“2.1”、“2.2”项的对照品、供试品溶液各2.0 mL，分置25 mL量瓶中，加5%NaNO2溶液1 mL，摇匀，静置6 min，再加入10% Al（NO3）3溶液1 mL，摇匀，继续静置6 min，加1mol/L NaOH溶液10mL，摇匀，静置15min显色〔9-12〕，取出，放冷，定容至25 mL，摇匀，以显色后的60%乙醇溶液作空白，在400~700 nm下扫描光谱图，测得供试品与对照品最大吸收峰均为506 nm〔13-14〕（图1），故确定本实验的测定波长为506 nm。

图1 对照品和供试品的紫外吸收光谱图

2.4 乙醇浓度考察分别考察了0%、40%、50% 60%、70%、80%、90%、100%的乙醇对总黄酮的提取效率，结果表明用60%的乙醇在相同时间内提取效率最高，因此采用60%的乙醇作为提取溶剂。

2.5 超声提取时间考察分别考察了超声提取（功率250 W，频率50 KHz）10、20、30、40、50、60 min结果表明超声提取30 min供试品中总黄酮即可提取完全，故提取时间设定为30 min。

3 实验结果

3.1 标准曲线的制备精密量取“2.1”项的芦丁对照品溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，均加入60%乙醇使成3.0 mL，按“2.3”项的显色方法显色在506 nm波长下测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.2874X+0.0208，r=0.9997，实验结果表明：芦丁对照品在0.5~3.0 mg内线性关系良好。

3.2 精密度试验精密量取“2.1”项下制备的对照品溶液2.5 mL，按“2.3”项下方法显色，在506 nm波长处连续测定6次吸光度值，结果RSD为0.13%表明仪器精密度良好。

3.3 稳定性试验精密量取“2.2”项所制备的供试品溶液2.5 mL，按“3.1”项方法分别于0、15、30、45 60、75、90、105、120 min显色，在506 nm波长处分别测定吸光度值。结果总黄酮含量的RSD为0.41%，表明供试品在2 h内稳定性良好。3.4 重复性试验精密称取同一批号的（110127）供试品，按“2.2”项平行制备6份供试液，按“2.3”项方法显色，记录吸光度值，计算得总黄酮含量为7.088 9 mg/g，RSD为1.40%，表明方法的重复性良好。3.5加样回收取同一批号（110127）已知含量供试品（n=6），按“2.2”项供试品制备方法处理，按表1精密加入对照品1.5 mg。按“2.3”项方法显色，在506 nm波长下测定，结果见表1。

表1 加样回收试验（n=6）

3.6 供试品测定取批号为110127、112706、110148的桑姜感冒胶囊，照本实验所建立的方法测定供试品中总黄酮含量，结果分别为7.088 9、6.958 1、7.484 3 mg/g。

4 讨论

本实验分别以不同提取时间、不同乙醇浓度优化总黄酮的提取工艺，最终得出60%乙醇超声提取30 min可将总黄酮提取完全。含量测定结果显示，同一生产厂家不同批号的桑姜感冒胶囊中，总黄酮的含量有一定的差异，这可能与不同批号药材的来源不同有关，为确保胶囊中总黄酮含量的一致性，建议药品在生产过程中采购相同产地的药材。本实验操作简单、方便、快捷、重复性好，能较全面地控制桑姜感冒胶囊的质量。

〔1〕国家药典委员会.YBZ01242005，中国药品部颁标准中药分册〔S〕.2008：Z6-157.

〔2〕杨虎，马燮，陈虹，等.分光光度法测定桑叶中总黄酮含量的研究〔J〕.应用化工，2006，35（10）：812-813.

〔3〕杨铭，吴志谊，吴川，等.可见光及紫外光分光光度法测定菊花总黄酮含量的研究〔J〕.广东化工，2007，34（9）：112-114.

〔4〕马尧，庄云.紫苏不同部位总黄酮含量测定〔J〕.安徽农业科学，2010，38（33）：18775-18776.

〔5〕程力惠，李晓蒙.贯叶连翘叶总黄酮提取工艺的研究〔J〕.中药材，2008，31（6）：904-907.

〔6〕孔繁晟，严春艳，贲永光，等.紫外分光光度法测定云南红豆杉枝叶中总黄酮的含量〔J〕.时珍国医国药，2009，20（2）：471-472.

〔7〕李云鹏，黄芸，魏春娥，等.紫外分光光度法测定黄芩中总黄酮含量〔J〕.河北中医药学报，2007，22（1）：36-37.

〔8〕刘玉芬，夏海涛，杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含量〔J〕.食品科学，2005，26（9）：418-419.

〔9〕李春红，田吉，何兵，等.紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量〔J〕.重庆医科大学学报，2011，36（8）：954-956.

〔10〕苏东林，单杨，李东阳.紫外分光光度法测定柑桔皮中总黄酮的含量〔J〕.食品研究与开发，2007，28（8）：124-128.

〔11〕朱华，唐桂兴，张可锋，等.基于紫外分光光度法的金花茶叶中总黄酮含量的测定〔J〕.安徽农业科学，2010，38（9）：4559-4561.

〔12〕史国举.紫外-可见分光光度法测定复方红景天胶囊中总黄酮含量〔J〕.中国医药科学，2011，14（1）：45-46.

〔13〕斯琴毕力格，曲长明，李增春.茜草中提取总黄酮实验微型法与常规法的比较〔J〕.内蒙古民族大学学报：自然科学版，2008，23（3）：270-271.

〔14〕姚倩，郭晓强，张良蕾，等.分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量〔J〕.成都大学学报：自然科学版，2010 29（1）：23-24.

（责任编辑 毛本勇）

Quantitative Determination of Total Flavonoids in Sangjiang Ganmao Capsule

ZHU Kunning,CHEN Yuanyuan,ZHOU Yang,YANG Yongshou*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To establish UV spectrophotometry method for the determination total flavonoids in compounds of Sangjiang Ganmao capsule.Methods:The contents of the total flavonoids were determined at 506 nm with rutin as the standard substance by ultraviolet UV-visible method.Results:The calibration curve was linear in the range of 0.5-3.0 mg for rutin,r越0.999 7;the average recovery was 96.63%,RSD越1.91%（n越6）.Conclusion:This method is simple,fast and accurate,and can be used as the determination of the total flavonoids in compound Sangjiang Ganmao capsule.

Sangjiang Ganmao capsule;total flavonoids;UV-visible method

R284

A

1672-2345（2013）03-0003-03

大理学院大学生科研基金资助项目（KYSX2011071）

2012-11-30

2012-12-20

朱坤宁，2010级药学专业本科生. *通信作者：杨永寿，高级实验师.