新城疫抗体测定技能大赛总结

向双云 周珍辉 （北京农业职业学院畜牧兽医系 北京 房山 102442）

为贯彻落实《国家中长期教育改革和发展规划纲要(2010-2020年)》精神，进一步强化职业院校涉农专业学生职业技能训练和职业技术综合运用能力，大力培养适应农业、农村经济发展需要的应用型和技能型人才，农业部根据教育部全国职业院校技能大赛总体要求，从2011年开始举办新城疫抗体测定竞赛项目，本学院连续2年参加该比赛项目，获得了可喜的成绩。下面将这2年来参加比赛的经验进行总结，以供同行们参考。

1 提前动员，提前准备

经过两轮的新城疫抗体测定技能技能大赛，发现理论考试内容涉及面广，考试题比较细。为了有足够充分的时间为选手们准备理论知识，学院比赛的准备工作需提前。可以在学期一开学组织报名，同时在学生中做好动员，让参与者对比赛有个全面的认识，为筛选优秀的选手做好准备。

2 重视理论基础，培养理论突击能力

通过两次的比赛，总结发现选手们的理论考试成绩是弱项，因此比赛的准备必须强化理论。指导老师要根据国家职业标准《动物疫病防治员》（三级）规定的应知要求，对参赛选手进行系统的辅导复习。理论的赛选最好通过几轮模拟考试成绩综合评定，既要考核选手们的基础知识，也要考核其学习理论内容突击能力，才能更好地应对比赛理论考试知识面广的状况。

3 规范操作规程，模拟操作过程

3.1 规范试验器材，正确熟练使用 新城疫抗体测定需要的试验器材最好能和竞赛规程所用的器材一致，这样才能保证选手在比赛中不至于出现小的失误而引起扣分。选手在平时训练时，所有的器材在使用完之后必须放在一个托盘里，每一轮训练开始时，再从托盘拿出，按要求摆放在自己的操作台面上。托盘天平测量开始前，必须先将游码移到标尺左端的零刻度处，然后才开始调节平衡螺母，使天平平衡。若将平衡螺母左右移至尽头天平仍不得平衡，则应检查原因，不能移动游码来达到平衡。离心机使用时离心管液体不能装得太满，对称放置的试样必须配平。移液枪吸头装配时需将移液器垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可，切勿用移液器反复撞击吸头来上紧。移液器吸液时应垂直吸液，吸头尖端侵入液面3mm以下，吸液时枪头应预润湿，然后再正式移液。吸液可将按钮按到第一档吸液，释放按钮。放液时先按下第一档，打出大部分液体，再按下第二档，将余液排出。吸取的过程应该做到“慢吸快打”，在吸液时要慢、准，放液时对准后速度要快，可以避免打完后吸头下存留液体，保证加入的液体体积一致。

3.2 采血方法规范、熟练 采血过程2位参赛的者的默契配合很重要。采血前采血者先将注射器内吸入3.8%的枸橼酸钠。采血时，助手将鸡侧卧保定，一手固定鸡的头部，一手固定鸡的脚；采血者展开采血侧翅膀，一手固定采血部分，一手采血。采血完毕后采血者一手将抗凝剂和血液轻轻摇匀，一手用干棉球按压采血部位止血。采血部位最好从翅静脉丛刺入，比较容易采血成功且不容易淤血，采血过程需要加强练习，要求参赛者能做到一针见血。

3.3 红细胞悬液的配制 血液采集完毕需取下针头，把血液沿离心管的管壁缓慢注入离心管中，防止红细胞的破坏。然后轻轻来回晃动离心管，使血液与抗凝剂充分混合，配平后置于离心机中开始离心。离心完毕，应先选用5ml的移液器吸取上面的液体，然后再选用1ml或200µl的移液器吸取，最好以画圈的方式吸取，比较容易把白细胞和血小板吸干净。最后一次离心完毕，按照计算量用移液器从离心管底部吸取红细胞放入加好生理盐水的烧杯中，再反复回用生理盐水将移液器吸头里的红细胞洗下来，保证配制红细胞浓度的准确性。

3.4 血凝试验 血凝试验操作过程中需要注意的是使用微量移液器吸取液体时，吸头需碰壁以除去多余的液体。加样时应将所加物在V型板的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。倍比稀释时，要注意避免产生过多的气泡，影响结果的准确性。加红细胞时最好悬滴或由后往前加，因为孔内已有稀释的抗原，如果吸头接触到孔内混合液，会造成各个孔间液体相互污染，导致试验结果出现误差。抗原悬液在使用前一定要摇匀，红细胞悬液要边摇边加，以保证每一孔中加入浓度的准确一致，但注意不要用力过大，防止红细胞的就够被破坏，造成溶血。结果判断应按照操作规程规定的时间，在对照孔成立的前提下及时观察读数，读数过早，血凝价易判高，血凝抑制价易判低，读数过晚，红细胞发生裂解，结果不再有意义。

3.5 四单位病毒的配制 四单位病毒的配制应根据计算结果用大移液器先吸取生理盐水，然后用小移液器吸取抗原，抗原吸取前要摇匀，再反复用生理盐水将移液器吸头里的抗原洗下来，保证配制四单位病毒浓度的准确性。配制好的四单位病毒最好能进行回归试验检测，回归试验的操作方法是：在微量反应板的1～4孔均加入0.025ml生理盐水，取四单位病毒液0.025ml加入第1孔内，混匀后吸取0.025ml加入第2孔，依次倍比稀释至第4孔，从第4孔吸取0.025ml弃去。然后每孔再加入0.025ml 1%鸡红细胞悬液，轻轻混匀，室温(20～25℃)下静置40min后观察结果。若第1，2孔凝集，则视为抗原配制正确；若第1孔凝集，第2、3、4孔均沉淀，则抗原浓度配制偏低；若前3孔均凝集第4孔沉淀，则抗原浓度配制偏高。

3.6 血凝抑制试验 血凝抑制试验操作过程中加样的注意事项与血凝试验基本相同，主要注意四单位病毒和红细胞悬液加样时注意悬滴或由前往后滴加，避免移液器吸头与孔内的液体接触，保证结果的准确性。血清要摇匀后加样，四单位病毒和红细胞悬液要边摇匀边加样，保证每孔所加的样品量和浓度的准确性。判定结果的时间要严格控制，一般以阳性和阴性对照成立，红细胞对照孔完全沉淀的前后5min内判定试验结果较好，大约在30～40min左右。试验结果判读时，微量反应板倾斜45°，孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒的为凝集完全抑制，以能完全抑制四单位病毒的血清最高稀释度作为血凝抑制滴度。

综上所述，在新城疫抗体测定中，影响试验结果的因素很多，只有严格按规定操作，细致、耐心地做好每一个环节，发现问题找出原因，及时纠正处理，才能保证试验结果的准确，才能在比赛时获得好的成绩。

3.7 多次反复模拟比赛过程 选手们的操作技能经过一定时间的练习，基本上都能正确掌握，熟练操作。为了更顺利地进行比赛，为了培养选手的良好心理素质和应变能力，应该为选手们进行多次模拟操作比赛。模拟过程严格按照比赛的形式进行，从器材的准备到试验报告的最好完成，全程多个评委对每一个环节都进行评分，一部分学生参加观摩，根据平时的模拟成绩确定最后的比赛选手。

4 建议比赛举办方能对技能操作有一个反馈

比赛时，各个参赛队只能知道理论分数，而操作分数是不公布的。因此建议比赛举办方能对每一个参赛队的技能操作有一个反馈。因为各比赛队都是按照竞赛规程去进行准备的，比赛不公布成绩，辅导教师和参赛选手只能自己去猜失误在什么地方，而不能对自己的比赛进行正确的分析，也不能发现问题，如果操作过程有一个反馈，更利于以后比赛的改进和提高。