VITEK-32 506卡检测产ESBLs大肠埃希菌可靠性分析

吴嫱

（临沂市人民医院检验科，山东临沂276003）

VITEK-32 506卡检测产ESBLs大肠埃希菌可靠性分析

吴嫱

（临沂市人民医院检验科，山东临沂276003）

目的评价VITEK-32GNS-506药敏卡检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药性的可靠性。方法用VITEK-32GNS-506药敏卡、NCCLS推荐的筛选法、表型确证法同时对288株大肠埃希菌进行ESBLs检测，以表型确证法和筛选法作为对照比较结果。结果288株大肠埃希菌中，仪器法检测出ESBLs146株，表型确证法检测140株，筛选法检测132株，阳性率分别为50.7%、48.6%、45.8%。仪器法高于筛选法和表型确证法。结论VITEK-32GNS-506药敏卡检测ESBLs细菌耐药性具有快速、简便、准确性高等优点，可推荐为临床实验室常规检测方法。

大肠埃希菌；VITEK-32 506药敏卡；超广谱β-内酰胺酶；耐药性

产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是革兰氏阴性杆菌最为常见的一种耐药机制。近年来出现的质粒介导的超广谱β-内酰胺酶因其底物谱广、传播速度快、并具有多重耐药性，可导致严重的医院感染和社区获得性感染。因此快速、准确地检测出ESBLs细菌对预防产ESBLs菌株的暴发流行以及指导临床合理应用抗生素有重要意义。大肠埃希菌是肠杆菌科中最常见的产ESBLs菌之一。我院用配备了药敏专家系统的VITEK-32GNS-506药敏卡筛选产ESBLs大肠埃希菌，同时以筛选法和表型确证法为参考方法对照结果，仪器法效果满意，现报道如下。

1临床资料

1.1一般资料1）菌株来源为我院2012年1月—2013年4月间从尿液、血液、分泌物、痰、前列腺液、脓液等临床标本中分离所得大肠埃希菌288株。其中采用VITEK-32型全自动细菌分析系统鉴定，采用细菌鉴定卡保存菌种，少部分菌种半固体保存。2）试剂VITEK32型全自动细菌分析系统GNI+、GNS-506药敏分析卡均为法国生物梅里埃（Bio-Merieux）公司产品。质控菌株：ESBLs阴性大肠埃希菌ATCC25922、ESBLs阳性肺炎克雷伯菌购自卫生部临床检验中心。3）药敏纸片和MH琼脂。复合纸片头孢他啶/克拉维酸（CAZ/CA）、头孢噻肟/克拉维酸（CTX/CA），单项药敏纸片和MH琼脂均购于英国Oxoid公司。

1.2方法

1.2.1菌株分离与鉴定由临床血、尿、痰、脓性分泌物、脑脊液、前列腺液、引流液、胸腹水、胆汁等标本中，按常规方法培养分离的纯菌以及用半固体保存下来的纯菌用VITEK32GNI+鉴定卡鉴定到种。

1.2.2仪器检测ESBLs：GNS-506卡通过测定头孢他啶、头孢噻肟两种抗生素与酶抑制剂克拉维酸的联合制剂，与单纯头孢他啶、头孢噻肟的最低抑菌浓度（MIC）值之比≥4时判定为ESBLs阳性。

1.2.3 ESBLs表型确证法在MH琼脂平皿上按NCCLS标准方法接种待测菌，并贴上头孢他啶（CAZ 30ug/片）、头孢他啶/克拉维酸（CAZ/CA 30μg/10μg片）和头孢噻肟（CTX 30μg/片）、头孢噻肟/克拉维酸（CTX/CA 30μg/10μg片）两对纸片，经35℃温育16～18 h后观察。结果判定按NCCLS(2002年版)推荐标准，两对纸片中任何一对的抑菌圈直径之差≥5mm，可确认产ESBLs菌株[1]。

1.2.4筛选法头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢曲松、头孢噻肟5种抗生素作初步筛选，接种方法及判定标准按NCCLS推荐的方法[1]。

2结果

2.1 288株大肠埃希菌中仪器法检测ESBLs阳性者146株，阳性率50.7%；表型确证法检测ESBLs阳性者140株，阳性率48.6%；筛选法检测ESBLs阳性者132株，阳性率45.8%。

2.2大肠埃希菌中ESBLs阳性菌与ESBLs阴性菌对VITEK32 GNS-506卡上的抗菌药物耐药性比较如下：奥格门丁ESBLs+100%，ESBLs-37.3%；氨苄西林ESBLs+100%，ESBLs-81.3%；头孢噻吩ESBLs+94.0%，ESBLs-37.3%；头孢西丁ESBLs+31.6%，ESBLs-10.8%；头孢噻肟ESBLs+89.5%，ESBLs-7.8%；头孢他啶ESBLs+67.9%，ESBLs-6.7%；奈替米星ESBLs+39.9%，ESBLs-5.9%；氨曲南ESBLs+40.6%，ESBLs-6.7%；妥布霉素ESBLs+70.5%，ESBLs-27.9%；庆大霉素ESBLs+53.7%,ESBLs-11.9%；奈啶酸ESBLs+98.8%, ESBLs-37.6%；呋喃妥因ESBLs+97.7%,ESBLs-20.1%；培氟沙星ESBLs+58.2%,ESBLs-38.8%；复方SMZ ESBLs+67.1%,ESBLs-4.1%，亚胺培南均为0。

2.3 ESBLs检出率三种方法检测产ESBLs大肠埃希菌的平均阳性率48.3%，仪器法阳性率50.7%,高于NCCLs表型确证法和筛选法。在耐三代头孢菌素阴性菌中，66%大肠埃希菌在产ESBLs菌中，12株大肠埃希菌同时对头孢噻肟和头孢他啶敏感，分别占同类敏感的4.06%及4.8%。

2.4体外抗菌作用比较亚胺培南对产ESBLs大肠埃希菌表现出很强的抗菌作用，奈替米星、头孢西丁对产生ESBLs大肠埃希氏菌有较好的抗菌作用，而其它氨基糖苷类及氟喹诺酮类抗菌药物则呈现出交叉耐药。ESBLs阳性菌株耐药性明显高于ESBLs阴性菌株。

3讨论

ESBLs是一种新的β-内酰胺酶，主要存在于革兰氏阴性杆菌中，以肠杆菌科细菌为主。1983在西德首先发现了质粒介导的ESBLs（SHV-2）[2]，1985年法国首次报道了产ESBLs菌株引起医院内感染暴发流行，并迅速传播到其他医院，从此，产ESBLs细菌的流行在世界各地被广泛报道。产ESBLs细菌的产酶基因（特别是存在于质粒中的基因）可在种间或属间广泛传播，引起更多的细菌产生ESBLs，从而引起医院内感染的暴发流行，产ESBLs的肠杆菌科的耐药问题已成为全球最重要的耐药问题之一。大肠埃希菌是肠杆菌科中重要的产ESBLs细菌，近年来ESBLs阳性率逐年升高[3-4]，ESBLs阳性菌株的耐药率明显高于非ESBLs阴性菌株，且具有多重耐药性[5]。因此，快速、准确地检测出产ESBLs菌株，指导临床合理应用抗生素，对预防和控制院内感染和暴发流行有极其重要的意义。

VITEK GNS-506卡选用NCCLS最新MIC标准，并配备了特殊的药敏专家系统，提高了检测结果的可靠性，对ESBLs检出率高于表型确证法和筛选法，且用时短，仅需6～8 h。据Saneders等报道VITEK仪器法对ESBLs的检出率高达99.5%,特异性100%[6]，而且操作简便、结果准确、阳性率高，使用一个药敏试验卡可同时发出ESBLs结果和药敏试验报告，可作为大中型医院临床实验室常规方法。确证法和筛选法为NCCLs推荐的方法，与仪器法对照阳性率较低，用时较长，需24 h；但因其操作简便，不受实验条件限制，各类实验室容易普及。用多重PCR同时检出多重耐药的技术，在常规细菌实验室尚难普遍应用。为防止ESBLs的漏检，除建立室内质控外，应从以下几个方面查找原因：所选药物非所测ESBLs的合适药物；高产ESBLs菌株克拉维酸抑制剂在数量上的相对不足；克拉维酸对某些ESBLs抑制作用较差；ESBLs菌株同时有其他耐药机制，如产AmpC酶和膜通透性改变等。

产ESBLs大肠埃希菌对亚胺培南或西司他丁、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦敏感性高,对第1～3代头孢菌素耐药率极高，对喹诺酮类、氨基糖苷类等存在交叉耐药。头孢噻肟或克拉维酸对检出的大肠埃希菌100%敏感，头孢他啶或克拉维酸100%敏感；头孢噻肟耐药率89.5%,头孢他啶耐药率67.9%。我院头孢噻肟和头孢噻肟或克拉维酸检出ESBLs阳性率高于头孢他啶和头孢他啶或克拉维酸。

ESBLs是三代头孢菌素应用的产物，近年出现的质粒介导的ESBLs，能水解头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、头孢曲松等三代头孢及氨曲南等单酰类抗生素的β-内酰胺环，给临床治疗造成极大困难。NCCLS建议：临床微生物实验室应该报告所有产ESBLs菌株为耐全部青霉素、头孢菌素和氨曲南的菌株。因此，一旦确定为产ESBLs菌株，应避免使用青霉素类及1～3代头孢菌素类抗菌药物[7]。

对产ESBLs菌株，目前最敏感的抗生素为碳青霉烯类，本实验室未发现对亚胺培南耐药菌株。亚胺培南的高抗菌素菌活性和低耐药突变选择能力已被多项研究证实,亚胺培南是治疗产ESBLs菌株的首选药物[8]。另外，临床耐药菌株常以多种机制并存：如细菌产酶同时伴有外膜蛋白改变或主动泵出药物；与抗生素结合靶位改变；产ESBLs同时产Ampc酶；产TEM-1或SHV-1同时产ESBLs；一株菌能产几种ESBLs；GyrA突变和携带整合子[9]，因而耐药表型错综复杂。

总之产ESBLs菌株的出现，并在世界范围内流行，且使医院感染复杂化，使治疗更艰难，这些都给临床工作者提出了严峻挑战。临床实验室应及时有效地检测出ESBLs菌株，指导临床合理使用抗生素，尽量控制三代头孢菌素的使用，考虑以其他含β-内酰胺酶抑制剂的药物替代三代头孢作常规治疗。

[1]National committee.for clinical laboratory standards,performance standards for antimicorbial susceptibilitytestingM100-s12,NCCLS, 2002,22：1-466.

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[3]孙景勇,倪语星.Mohnarin 2008年度报告：华东地区细菌耐药监测[J].中国抗生素杂志,2010,35(07)：503-507,547.

[4]徐桂霞,安科颖,于玲,等.近6年产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌的耐药变迁[J].黑龙江医学,2012,36(5)：329-331，341.

[5]易建云,江洁华.产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的筛选和耐药性分析[J].检验医学与临床,2012,9(5)：545-546,548.

[6]Sanders cc,BarryAC,Washington JA,etal.Detection of ertended spectrum-beta-lactamase-producing membeis of the family Enterob-acteriaceae With VitekESBLtest[J].JClin Microbiol,1996,34：2997-3001.

[7]杨飞兰,王颖,王娅,等.3年临床分离大肠埃希菌的耐药性变迁分析[J].中华医院感染学杂志,2010,20(19)：3038-3039.

[8]陈子松,喻长法,郑英姿.产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的检测及耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2009, 19(8)：998-999.

[9]王志锐,苏旭,刘广文,等.大肠埃希菌GyrA突变、超广谱β-内酰胺酶及整合子检测分析[J].中华医院感染学杂志,2010,20(22)：3445-3448.

Detecting Extend-spectrum Blactam ases Strains of Escherichia Coil by Vitek-32

W u Qiang
(People’sHospitalofLinyi,Linyi276003,Shandong)

Ob jectiveTo evaluate production of Escherichia coilproducing extend spectrum B-lactamases(ESBLs) which infected disease and drug resistance of ESBLs-producing straining.M ethods288 strains isolates from clinical infections specimenswere tested by the presence of ESBLs by the VITEK-32 ESBL detection testand NCCLS performed standards for Antimicrobialsusceptibility testing initialscreen testand phenotypic confirmatory test.Resu lts50.7%Positive(146/288)was found to be ESBLs by Vitek-32.The positive rate of initial screen testwas 48.6%(140/288).The positive rate of phenotypic confirmatory testwas 45.8%(132/288).ConclusionsIt is important specimens thatwere tested by the presence of ESBLs by the VITEK-32 GNS-506.ESBL detection test to select the proper and rapidmethod to detectESBLs in time.Im ipenem were sensitive of themostB-lactamasesantibiotics.

Escherichia coil;Vitek-32GNS-506;Extend-spectrumβ-latamases;Drug-resistance

R446.19

：A

：1008-4118（2013）03-0007-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2013.03.03

2013-05-13