GC法测定活血止痛散（片）中冰片、樟脑的含量

王云霞 张 楠 谢志民 西安市食品药品检验所（西安710054）

活血止痛散（片）是2012年国家评价性抽验项目，由当归、三七、制乳香、冰片、䗪虫、煅自然铜六味中药组成，具有活血散瘀、消肿止痛的功效，主要用于跌打损伤，瘀血肿痛等症。冰片为方中清热止痛的主要组成，冰片在合成过程中会产生或残留一定量的樟脑，近年来更有人为掺杂樟脑的现象，内服会对人体产生一定的毒副作用，现行标准仅有冰片的薄层鉴别项目，无含量控制和樟脑限度控制要求［1，2］。参照中国药典［1，3］，本文建立了用 GC法测定成品中龙脑、异龙脑及樟脑的含量测定方法，作为成品中冰片质量的控制方法。

1 仪器与试药 1.1 仪 器 安捷伦7890A型气相色谱仪，7890A／GC色谱工作站；Agilent Technologies毛细管柱：DB－WAX 型（长30m，内径0.32mm，涂 层厚度 0.25μm），HP－INNOWAX 型 （长30m，内径0.32mm，涂层厚度0.25μm）；Thermo Scientific TG－WAXMS毛细管柱（长 30m，内径 0.32mm，涂层厚度0.25μm）；昆山市超声仪器有限公司KQ－300DE型数控超声波清洗器。

1.2 试剂与试药 乙酸乙酯为分析纯（广东省化学试剂工程技术研究开发中心）。龙脑对照品（110881－201107，含 量 99.3%）、异龙脑对照品（111512－200201）、樟脑对照品（110747－201008），均为中国食品药品生物制品检定院提供（供含量测定用）。

2 方法与结果 2.1 色谱条件 采用聚乙二醇20000（PEG－20M）毛细管柱（柱长30m，内径为0.32mm，膜厚度为0.25μm），柱温为程序升温，初始温度为130℃，保持3min，以2℃／min的速率升至140℃，保持5min；分流进样，分流比1∶10；载气流速1mL／min。理论塔板数按龙脑峰计算应不低于10000。

2.2 对照品溶液制备 精密称取龙脑对照品、异龙脑对照品、樟脑对照品适量，加乙酸乙酯制成每1mL含龙脑0.25mg、异龙脑0.20mg、樟脑3μg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备 取本品粉末，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20mL，称定重量，超声处理（功率150W，频率45kHz）20min，放凉，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 标准曲线与线性范围 精密称取樟脑对照品（批号110721－200507）12.26mg，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯使溶解，并加至刻度，摇匀，作为6号对照品溶液；再精密称取龙脑对照品（批号110881－201107，含量99.3%）15.40mg、异龙脑对照品（批号111512－200201）12.00mg，置同一10mL量瓶中，精密加入6号对照品溶液2mL，加乙酸乙酯使溶解，并加至刻度，摇匀，作为5号对照品溶液；精密吸取5号对照品溶液5mL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为4号对照品溶液；精密吸取4号对照品溶液5mL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为3号对照品溶液；精密吸取3号对照品溶液5mL，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为2号对照品溶液；精密吸取2号对照品溶液5mL，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为1号对照品溶液。精密吸取1～6号对照品溶液各1μL进样2次，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积平均值为纵坐标，以进样量（ng）为横坐标，计算得龙脑回归方程Y＝0.64318X－0.4208、r＝0.999999，异龙脑回归方程Y＝0.64223X－0.1336、r＝0.999999，樟脑回归方程 Y＝0.6168X＋0.6358、r＝0.99996，表明在该系统条件下，龙脑进样量在15.2922ng～1529.22ng范围内、异龙脑进样量在12.0ng～1200.0ng范围内，樟脑进样量在2.452ng～1226ng范围内，峰面积积分值与进样量呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取上述1、3、5号对照品溶液1μL，各进样5次，按上述色谱条件测定峰面积，计算变异系数。结果RSD均小于1.7%。表明本方法龙脑进样量在15.2922ng～1529.22ng范围内、异龙脑进样量在12.0ng～1200.0ng范围内、樟脑进样量在2.452ng～1226ng范围内进样精密度良好。

2.6 重复性试验 精密称取同一批活血止痛散粉末0.5g，活血止痛片粉末0.55g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙酸乙酯各20mL，称定重量，分别超声处理（功率150W，频率40kHz）20min，取出，放凉，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液。精密吸取续滤液和标准曲线考察项下的2号对照品溶液各1μL，注入气相色谱仪，按标准曲线考察项下的色谱条件测定龙脑、异龙脑、樟脑色谱峰面积，按外标法以峰面积计算，结果表明散剂、片剂样品测定结果的重复性均良好，RSD均小于1.1%。

2.7 稳定性试验 分别于0h、2h、4h、8h、12h、16h、20h和24h精密吸取同一供试品溶液1μL进样，按上述色谱条件测定龙脑、异龙脑、樟脑峰面积，计算变异系数。结果表明本品散剂、片剂中龙脑、异龙脑、樟脑均在24h内稳定，峰面积RSD均小于1.6%。

2.8 加样回收试验 活血止痛散：精密吸取标准曲线项下6号对照品溶液2mL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为樟脑对照品溶液。精密称取龙脑对照品（批号110881－201107，含量99.3%）9.66mg、异龙脑对照品（批号111512－200201）9.04mg，置10mL量瓶中，精密加入樟脑对照品溶液2mL，加乙酸乙酯溶解至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取重复性试验项下所用活血止痛散0.25g、0.375g各3份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液2mL和1mL，再分别精密加入乙酸乙酯20mL，称定重量，超声处理（功率150W，频率40kHz）20min，取出，放凉，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液。精密吸取续滤液和线性考察项下2号对照品溶液各1μL，注入GC仪，测定，计算。

活血止痛片：精密吸取标准曲线项下6号对照品溶液2mL，置25mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为樟脑对照品溶液。精密称取龙脑对照品（批号110881－201107，含量99.3%）13.45mg、异龙脑对照品（批号111512－200201）7.90mg，置25mL量瓶中，精密加入樟脑对照品溶液2mL，加乙酸乙酯溶解至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取重复性试验项下所用活血止痛片样品粉末0.27g、0.40g各3份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液2mL和1mL，再分别精密加入乙酸乙酯20mL，照上述方法测定。

结果显示，活血止痛散和活血止痛片两个添加量，龙脑的平均加样回收率分别为99.84%和98.84%，RSD分别为0.91%和0.84%（n＝6）；异龙脑的平均加样回收率分别为99.07%和99.11%，RSD分别为0.76%和2.38%（n＝6）；樟脑的平均加样回收率分别为102.54%和99.72%，RSD分别为2.27%和2.20%（n＝6）。

2.9 样品含量测定 我们测定了4个生产企业生产的33批活血止痛散样品，4个生产企业生产的54批次活血止痛片样品，结果活血止痛散每1g含冰片6.05～22.09mg、平均16.51mg，含龙脑为3.39～12.94mg、平均9.73mg，含樟脑29.4～494.3μg、平均122.33μg；活血止痛片每片（换算为含活血止痛散0.37g）含冰片0.13～6.36mg、平均2.94mg，含龙脑为0.09～3.65mg，平均1.80mg，含樟脑5.8～34.9μg，平均9.74μg。

3 讨 论 研究过程中采用正交实验的方法对不同超声功率和时间的提取效果进行了考察，结果表明超声功率和超声时间均对龙脑和异龙脑的测定结果无显著性影响，为了保证提取液杂质少、提取完全、测定周期短，确定了上述供试液的制备方法，超声处理过程中应注意水温控制在25℃以下。

系统适用性试验证明本系统在不同品牌的色谱柱、不同进样口温度（160℃～240℃）、不同检测温度（230℃～270℃）、不同载气流速（0.8mL／min～1.2mL／min）、不同分流比（1／4～1／12）、不同程序升温（初始温度为120℃～140℃，保持3min，以2℃／min的速率升至130℃～150℃）条件下龙脑、异龙脑和樟脑均分离良好、峰形对称，可用于含量测定。阴性对照样品在龙脑、异龙脑和樟脑峰处均无色谱峰出现，不干扰本品的测定。

活血止痛胶囊与活血止痛散处方一致，本法亦适用于活血止痛胶囊中冰片的质量控制。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2010：956，422，620.

［2］国家食品药品监督管理局.国家药品标准［S］.北京：YBZ30222005－2009Z.

［3］国家药典委员会.中国药典［S］.第二部.北京：化学工业出版社，2010：1108.