浅谈鸭坦布苏病毒病及其防控

张兆成 刘恩昌 史 辉 （山东省昌乐县畜牧兽医局 262400）

鸭坦布苏病毒属于黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群。该病主要以体重、食欲、产蛋率下降与高热，甚至停产以及部分死亡为特征。该病原传播迅速且发病范围极广，全国大部分省市蛋鸭曾受到严重影响。

1 病毒的流行病学

鸭感染后主要表现站立不稳，卧地不起等神经症状，但与其他黄病毒属病毒不同的是该病毒可导致蛋鸭产蛋下降。根据报道，该类病毒的传播主要媒介是节肢动物。该病感染主要以产蛋鸭群为主，还包括商品肉鸭、肉用种鸭，现有报道在种鹅和野鸭体内也分离到该病毒。

2 病毒的培养特性

经研究表明鸭坦布苏病毒可以在鸡胚、鸭胚、鸭胚成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞及部分传代细胞系(如DF1)中增殖并增殖到较高的滴度，经尿囊腔接种鸡胚或者鸭胚后2～6d可以致死胚体。经细胞培养，病毒可以对成纤维细胞引起明显的病变。

3 临床诊断

临床上该病主要以产蛋骤降和一系列明显的病理变化为诊断依据，鸭发病后采食量下降甚至废绝、体温升高、精神委顿，喜卧、排绿色稀便，可见有神经症状，部分可见有软脚现象。剖解病鸭后可见病鸭脾脏明显肿大，呈花斑样病变，严重可出现坏死点，肾脏肿大，蛋鸭可见卵泡破裂，卵巢出血，卵泡膜明显增厚、浑浊。

4 实验室诊断

4.1 病毒分离鉴定

一般将发病鸭的脾脏研磨离心后取上清经尿囊腔接种8日龄SPF鸡胚，接种后2～6d鸡胚死亡，死亡时间在第4天相对比较集中。死亡鸡胚主要表现为尿囊膜明显增厚，胚体水肿出血。胚体肝脏肿大，有坏死灶。分离毒株在鸡胚、鸭成纤维细胞及DF1细胞上均可正常生长，一般2d左右即可导致细胞病变，产生CPE，检测鸭坦布苏病毒最为经典的方法就是病原的分离鉴定，但这种诊断方法影响因素多、工作量较大且耗时较长，所以在临床应用上该方法具有一定的局限性。

4.2 血清学检测

4.2.1 传统的血清学方法 这种方法最经典的就是中和实验，它的主要原理可以归纳为：血清中的中和抗体可以与病毒相互作用，从而导致病毒失去吸附细胞的能力或者使其侵入或者脱壳的能力受到抑制，继而丧失对敏感细胞和易感动物的感染力。这种方法多被用于动物免疫水平和疫苗效价的评价。进行中和实验需要采集急性期和恢复期血清进行检测，检测诊断费时费力，不能达到早期快速诊断的目的，特异性和敏感性不高，双份标本的采集有困难。

4.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) 酶联免疫吸附试验是一种灵敏、简单、快速并且适合于大规模检测的诊断方法。ELISA可以检测抗体，也可以检测抗原。该方法具有很大的优点，使用的抗原全部为灭活过的病毒，所以没有病毒的扩散等问题，同时该法不需要实验动物也不需要大量的细胞，减少了人力物力，这就使鸭坦布苏病毒的诊断从特定的实验室走向了普通的实验室。

4.2.3 间接免疫荧光法(IFA) 免疫荧光技术是将免疫学方法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。在荧光显微镜下可检测出荧光素所发出的荧光，从而可从细胞上定位出抗原。鸭坦布苏病毒抗体的检测可通过该方法来实现。虽然这种方法特异性强、灵敏性高，但是在操作上较为复杂，不适宜作为临床快速诊断的方法。

4.3 分子生物学诊断方法

鸭坦布苏病毒全基因序列测定取得的进展、分子生物学及生物信息学的发展，为鸭坦布苏病毒的快速基因检测提供了依据。

4.3.1 RT-PCR 是经过反转录将RNA模板转化为cDNA，再以其为模板进行扩增，从而获得所要的基因片段。现多以该病毒的NS5和E基因为目的基因。该方法可从临床病鸭上快速敏感的检测出该病，且结果快速、简单，特异性高，这为鸭坦布苏病毒病的诊断提供了科学的检测手段。

4.3.2 套式RT-PCR 是应用两对引物对目的基因片段进行两次扩增，即先应用一对外部引物对目的基因进行第一次扩增，再将第一对扩增产物作为模板，用第二对内部引物对其进行扩增，这种方法具有较高的特异性和敏感性。套式PCR比一般的PCR敏感性高10倍，并且还具有快速、特异等优点。

4.3.3 实时荧光定量RT-PCR 实时荧光定量反转录PCR这种技术在近几年才发展起来，它即摆脱了普通PCR中所存在的不可准确定量和假阳性污染等缺点，又提升了自 身的灵敏性，是一种既快速又可靠的病毒检测技术。该方法检测范围广，可对多种样品进行检测。这种方法的特异性较好，但成本高。

5 鸭坦布苏病毒病的防控

2010年鸭坦布苏病毒属于首次爆发和流行，所以目前针对该病还没有有效的治疗和免疫防治措施，所以要做到尽可能的减少养殖业的损失就要以预防为主，防治结合。目前，针对发病鸭群应采取如下措施：（1）提高管理人员的素质，强调生物安全措施意识，做好饲养人员的生活安排，管理人员和饲养人员必须时刻要尽量隔离开。（2）注意消毒，特别要对用具设备和运输车辆，减少发病鸭场与健康鸭场的人员和车辆的流动。（3）对发病鸭场的种蛋做好消毒工作，同时加强卫生管理、垫料的消毒和处理、同时将病死鸭进行生物处理或者焚烧。（4）针对健康鸭群主要是做好消毒工作，减少对鸭群的应激，特别是在疫苗接种的时候，注意天气变化，尽量保持鸭舍内温度的适宜，避免突然升降温，及时采取保温措施。在疫苗方面，针对鸭坦布苏病毒的灭活苗、基因工程苗和减毒活疫苗等尚在研发中。