浅议药品杂质分析的方法验证

北京市药品审评中心（100061）陶林 田晓娟 佟利家

（接11月下）

此外，笔者认为，在制剂强制降解试验的时候，应在供试品进行降解的同时，使用相同的破坏条件对原料、辅料同时破坏，并对空白溶剂进行分析，以便形成的对比观察不同破坏条件下产品真实的降解特性。

对色谱峰进行纯度检查，是评价色谱方法专属性的一项非常有意义的指标。常用的方法是采用二极管阵列检测器和质谱来确定被测的色谱峰是否为单一成分，以评价色谱系统的分离能力，质谱检测器还具有定性杂质的意义。申请人进行相关试验的时候，往往只考察了主成分的色谱峰纯度，因此建议申请人同时关注杂质色谱峰的纯度情况，特别是已知杂质和含量较高的未知杂质纯度情况，这样为色谱方法对杂质测定的适用性和限度制定提供参考。

2 线性和范围

线性是在分析方法的范围内对方法进行评价，一般至少需要5个浓度建立线性。范围一般是从线性研究中得到的。应该保证分析方法在范围内能获得良好的线性、精密度和准确性。

对于杂质检查的范围，可按照产品实际测定结果进行考察。原则上应为杂质的报告水平至标准规定的120%。

3 准确度

准确度系指采用该分析方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。常用准确度确定的方法是在规定的范围内，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，报告已知加入量的回收率（%）或测定结果平均值与真实值之差及可信限。

杂质测定方法回收率试验，一般是在原料药或制剂中加入已知量的杂质进行测定。对于不能得到的杂质，可用本法测定结果与另一成熟方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法。例如，分析方法对某些不易获得的杂质，可采用校正因子以主成分进行定量。此时，建议用该方法测定的结果与杂质外标法测定结果进行比较，以确定方法的准确度。

4 精密度

精密度系指在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。

对于杂质分析的精密度考察，如果以杂质水平较低（低于定量限）的供试品进行相关试验，则难以验证方法的精密度。建议在供试品中加入一定量的已知杂质或进行一定程度的降解后进行精密度考察。

5 检测限和定量限

检测限和定量限确定的常见方法有直观法、信噪比法和计算法（根据响应值的标准差和斜率）。准确测定定量限和检测限，可对方法的灵敏度和准确度做出评价。必要时，应关注LOQ的变异性。

6 耐用性

耐用性主要考察方法本身对可变试验因素的抗干扰能力。耐用性的考察对方法确定尤为重要，对于测试条件要求苛刻的，必要时应将严格的试验条件在标准分析方法中明确。

典型的变化在指导原则中均有明确规定，但是仍建议申请人应针对品种的自身特性和分析方法选择影响产品测定结果的关键参数来设定微小变化，以考察方法的耐用程度。对于色谱法测定的，应特别关注色谱柱类型、品牌、参数的变化导致系统适用性和定量测定结果的影响。

综上所述，方法验证是一个系统工程，验证内容之间是相互关联的一个整体，申请人特别应该关注方法验证的整体性和系统性。对于杂质控制来说，也应该结合鉴别试验及含量测定结果，关注内在关联性和互补性。而且同一分析方法的验证内容侧重点也可能有所不同，如对杂质限度检查和定量检查，方法学验证中前者重点关注专属性，而后者则是对定量的要求更为全面。

方法学验证的内容虽然分别独立，但是上述内容的排列顺序也从侧面反映了杂质分析方法建立和评估的一个过程。不同品质特征的产品，各种复杂情况均可能存在，在方法验证过程中，不能简单教条进行。加之新方法、新仪器的不断使用，方法验证的内容和形式也要具体问题具体分析。对于生物技术产品和生物制品，由于自身结构和生产工艺的不同决定了其产品的复杂特性，所用的分析方法和验证方案可能与指导原则所述不同，但验证的本质和基本原则应是一致的。分析方法验证的主要目的是证明该方法适合于测试项目的预期。申请人应该选择最适合他们产品的分析方法和验证方案。