猪链球菌疫苗研究进展

杨卫军，张珍珍

（河北省秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心，河北秦皇岛 066000）

猪链球菌疫苗研究进展

杨卫军，张珍珍

（河北省秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心，河北秦皇岛 066000）

猪链球菌为革兰氏阳性菌，是一种能够引起人和多种动物发病的重要人畜共患病病原。猪链球菌病分布广泛，英国于1954年最早报道该病，此后在养猪业发达的其他国家均有发生。我国最早由吴硕显（1949年）报道，在上海郊区发现本病散发病例。1963年在广西部分地区开始流行，继之蔓延开来。1968年丹麦首次报道了人感染猪链球菌2型导致脑膜炎，1998年、2005年分别在我国江苏省海安县和四川省资阳市暴发猪链球菌病，这两次疫病的暴发不仅造成生猪死亡，引起养殖户巨大经济损失，还导致人感染，引起人的死亡，严重地威胁着人类的公共卫生安全。

目前对于猪链球菌病的预防和治疗仍主要采用抗生素疗法，由于长期大量的滥用抗菌药物，导致耐药菌株的不断出现，疾病得不到控制，造成疫病不断暴发。为了控制猪链球菌病的感染，应该以预防为主，辅以药物治疗。疫苗在疫病的控制发面发挥了重要的作用，选择安全、可靠的疫苗对动物进行接种免疫，能够使动物体产生高的抗体水平来抵抗细菌的感染，从而达到控制本病的目的。本文对猪链球菌疫苗目前的研究情况作一简述。

一、灭活菌苗

灭活疫苗是把病原微生物经物理或化学的方法灭活后制成，但是保留了其抗原性，而没有致病力。灭活疫苗由于接种后在动物体内不能繁殖，因此使用剂量较大，保护期较短，一般要加入免疫佐剂来增强其免疫效果。灭活疫苗常需多次接种，往往接种1次不产生具有保护作用的免疫，仅仅是“初始化”免疫系统，必须进行第二次加强免疫才能产生免疫保护。灭活疫苗作为传统的疫苗，由于其具有研制周期短，使用安全可靠，易于保存等优点，至今仍应用在生产实践中。

有研究报道为使菌苗能够达到更好的保护力，挑选目前流行的优势菌株作为疫苗候选株,研制多价灭活疫苗，用于该地区的免疫预防，解决了各血清群之间交互免疫能力差和保护力低等缺点。该多价灭活疫苗不仅安全性好，而且免疫效果确实。Reams 及Hott 等对链球菌的全细胞菌苗持否定态度，而王建以马链球菌兽疫亚种ATCC35246株和猪链球菌2型HA9801株作为疫苗候选菌株，制备氢氧化铝胶二联灭活疫苗，免疫保护率达到100%，优于Reams 及Hott等报道的结果，可能是由于使用的菌株不同而造成的结果差异。余玲娜等人在研究猪链球菌疫苗方面报道，蜂胶作为佐剂的疫苗对动物体的刺激性较少，并且蜂胶还是一种天然的抗菌药物，具有一定发展前景。山东滨州华宏生物制品有限责任公司研制的猪链球菌病蜂胶灭活疫苗(马链球菌兽疫亚种+猪链球菌2型）系用致病性马链球菌兽疫亚种(猪链球菌C群）BHZZ-L1株和猪链球菌2型BHZZ-L4株分别接种适宜培养基培养，收获培养物，经甲醛溶液灭活后，加入蜂胶佐剂混合乳化制成，主要用于预防马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型感染引起的猪链球菌，并被批准为三类新兽药。王金合等配制铝胶佐剂，制备自家铝胶灭活苗对猪链球菌病进行防治，利用本场分离菌株制备自家菌苗保护率高，成本低。在猪场分离到致病性菌株制成的自家灭活菌苗能够降低猪的死亡率，但这种自家灭活菌苗由于其血清型的局限性，只能用作预防同种血清型的菌株，而对其它新暴发的血清型菌株保护力差。建议猪场在合理的免疫程序下使用了链球菌的商品疫苗仍不能得到有效地保护，可以考虑制备猪链球菌自家灭活疫苗进行预防猪链球菌病。

二、活菌苗

目前，市场上应用的活菌苗大多为弱毒菌苗。弱毒菌苗是一种病原致病力减弱但仍保持原有的抗原性，也就是用人工致弱或自然筛选的弱毒菌株，经合适条件培养后制备的疫苗。该疫苗的优点是病原可在免疫动物机体内繁殖，且用量小，免疫原性好，免疫期长，使用方便，不影响动物产品的品质。缺点是弱毒菌株的毒力易返强，且容易散毒，对一些极易感动物存在一定的危险性。由于其运输和贮存受一定的条件限制，而且保存期较短，故将其制成冻干弱毒菌苗可延长疫苗的保存期。

Holt用活的无毒菌株反复进行免疫，能够使猪得到坚强的免疫保护，但不能清除已经定居在扁桃体和关节里的链球菌，亦不能清除隐性感染猪扁桃体内的细菌。Busque用猪链球菌2型无毒株(#1330）对4周龄的小猪进行接种免疫，接种21天后用猪链球菌2型有毒株（#999）进行攻毒实验，结果显示用#1330株进行3次接种免疫的15头仔猪中只有1头表现出一些中度的临床症状，接种3次的保护力明显优于接种2次的保护力，证明了该无毒株具有高的免疫保护力。高云飞采用ST171弱毒菌种，经过培养后，加入适当保护剂，制成猪链球菌病活疫苗，经动物攻毒保护试验证明免疫保护力为9/12（75%），经过安全试验和效力试验等证明，具有良好的免疫原性和免疫保护力。

三、生物技术疫苗

生物技术疫苗是利用生物技术制备的分子水平的疫苗，包括基因工程亚单位疫苗、合成肽疫苗、抗独特型疫苗、基因工程活疫苗以及DNA疫苗。目前研究主要集中在对致病菌的一些具有免疫原性的蛋白进行基因分析、重组和表达，进而对其免疫原性进行检测，从而筛选出疫苗的候选菌株，以期制造出能够对致病菌进行有效预防的基因工程疫苗。

Zhang Anding等通过蛋白原核表达，表达了烯醇化酶基因的重组蛋白，并应用到小鼠攻毒保护性试验中，其能够对抗猪链球菌2型和7型的攻击，起到了免疫保护作用。试验证明烯醇化酶可作为新的亚单位疫苗的候选蛋白，是一种保护性蛋白。一个大小为110KD的Sao蛋白被发现，通过电子显微镜技术利用其抗血清与猪链球菌结合发现其定位在细菌表面，且高度的保守。用重组Sao蛋白免疫猪能够得到显著的体液免疫应答，并能保护猪免受有毒株的感染，可作为疫苗候选株进行研究。Elliott SD研究发现，CPS与弗氏不完全佐剂制成的油乳剂苗，接种小猪并能够诱导机体产生CPS抗体，具有一定的保护力。JacobsAA从猪链球菌2型中分离纯化出SLY，将纯化的SLY接种动物，免疫2次以后，免疫血清与血溶素的中和活性明显提高，攻毒后只是产生轻度临床的病症并很快消退，而用不含SLY的其他蛋白接种猪攻毒后仅产生很弱的免疫保护作用。刘丽娜等人利用基因工程手段获得的纯化重组纤连蛋白结合蛋白免疫小鼠，间接ELISA检测鼠抗血清效价，结果进一步证实纤连蛋白结合蛋白能刺激小鼠机体产生强大的体液免疫应答，说明纤连蛋白结合蛋白确实具有良好的免疫原性，并且不同分离株的纤连蛋白结合蛋白基因同源性很高，氨基酸序列相当保守，符合作为疫苗保护性抗原的条件，所以可将基因工程手段获得的纯化重组蛋白作为猪链球菌疫苗候选分子参与后续的研究。

（略）