全自动生化分析仪测定血清低密度脂蛋白胆固醇分析性能评价

冯 倩，邓德耀，周林华，陈 弟，李增安，支国华，薛云松 (云南省第二人民医院检验科，云南 昆明 650021)

血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)检测作为反映缺血性心血管病发病危险的指标已在临床被广泛应用，《中国成人血脂异常防治指南》明确规定不同危险因素存在情况下LDL－C的控制目标。目前，检测LDL－C的参考方法是超速离心法，直接测定方法即均相测定法因其具有简便、快速、易于自动化，所以作为常规方法在临床广泛应用，但有关的性能评价报道较少。为了深入了解在全自动生化分析仪上检测LDLC的性能，笔者参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的相关文件、国内一些定量检测性能评价的报道以及试剂厂家的标准，在全自动生化分析仪上对试剂进行了性能评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器:日立7600全自动生化分析仪。

1.1.2 试剂:①日本积水医疗株式会社LDL－C检测试剂(批号:807RLI);②配套校准品(批号:823RJI);③Bio－Rad质控血清水平2(批号46452)和水平3(批号46453);④干扰材料(日本Sysmex公司)，包括游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白和乳糜物。

1.1.3 标本:所有受检者均隔夜空腹8 h以上抽血，3 500 r/min离心5 min，取血清检测，或留取血清标本置于－20℃待检。

1.2 方法

1.2.1 精密度(precision)验证:用两个水平的质控品和患者新鲜混合血清按标本检验程序进行测定，在批内重复测定20次，以及每份样本每天测定1次，连续测定20天。分别计算批内及天间均值标准差(SD)和变异系数(CV)。并判断是否小于厂家规定的性能标准。

1.2.2 正确度(accuracy)验证:依据参考文献［1］，结合笔者科室的实际情况，选择卫生部临床检验中心2012年5月发放的5个批号的质控品进行检测，每个质控品测定LDL－C 2次，计算检测均值与靶值的相对偏倚(%)，偏差小于卫生部临检中心组织的室间质评的允许偏倚，则正确度验证成功。

1.2.3 分析干扰实验:采用Sysmex干扰检查试剂盒。空白液与新鲜混合血清按1:9比例制备各自干扰物的空白对照A液。将结合胆红素、血红蛋白、游离胆红素和乳糜物用蒸馏水溶解，按1:9的比例分别加入相同的新鲜混合血清，制成不同的干扰物B液，制成后结合胆红素B液浓度为20 mg/dl，血红

蛋白B液500 mg/dl，游离胆红素B液21 mg/dl，乳糜物B液3000 FTU。将A液与B液按照10∶0(空白管)，8∶2(1号管)，6∶4(2号管)，4∶6(3号管)，2∶8(4号管)，0∶10(5号管)比例混合，制备成空白管及含不同干扰物浓度的1－5号管。对每一份样品进行2次LDL－C浓度测定，结果取平均值。计算影响度(F)=(含干扰物质标本检测值一无干扰物质标本(空白)检测值)/无干扰物质标本检测值×100%［2］。F绝对值＞10%认为该浓度干扰物质对LDL－C检测有影响。

1.2.4 分析测量范围(analyticaimeasurement range，AMR)验证:按参考文献［3－5］，使用厂家提供的高值质控品(其值大于厂家给定的分析测量范围上限)，用生理盐水稀释。稀释液(L)与高值样本(H)按照10L、9L+1H、8 L+2 H、7L+3 H、6L +4 H、5L+5 H、4 L十6 H、3 L+7H、2 L+8 H、1L+9 H、10H的关系配制，形成系列浓度样品。每个浓度重复测定2次，以平均值为实测值，按照公式预期浓度=(CL×VL+CH×VH)/ (VL+VH)计算预期值。将实测值与预期值作比较，确定LDL－C的分析测量范围。检测低限(LLD)的确定:LLD为样品单次检测，可以达到的非空白检测响应量对应的分析物的量。按99.7%的可信限，生理盐水在批内重复测定10次空白样品±3s所对应的LDL－C的量即为LLD。

1.2.5 生物参考区间(biological reference interval)的验证:参考CLSIC28－A2文件［6］，选取健康体检者20例，年龄20～56岁，平均36岁。男女各一半。按照标准操作程序进行检测，对结果进行统计并与设定的参考区间进行比较，若20份标本的检测结果均在设定的参考区间内或不超过2份标本超出，则验证通过。否则，进行参考区间确立实验。

1.3 统计学处理:应用SPSS11.5统计软件进行数据分析。分析测量范围的验证中截距a与0的比较用t检验。

2 结果

2.1 精密度验证结果:批内CV均＜5%，天间CV均小于10%，达到厂家性能标准，见表1。

表1 日立7600全自动生化分析仪测定LDL－C的批内、天间不精密度结果

2.2 正确度验证结果:相对偏倚均＜30%，小于卫生部临检中心规定的室间质评允许偏倚，见表2。

2.3 分析干扰实验结果:不同浓度游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白和乳糜物对LDL－C检测的干扰(F)的绝对值都＜10%，见表3。

表2 日立7600全自动生化分析仪测定LDL－C的偏倚结果

表3 不同浓度干扰物质对LDL－C检测的干扰(F)

2.4 分析测量范围验证结果:以实测值为Y轴、预期值为X轴，将结果点在X－Y坐标图上，计算回归方程y=bx+a。得到回归方程y=0.982x－0.05，r=0.999，相关系数r≥0.975，b在0.97～1.03范围内，a与0无统计学差异(P＞0.05)，可判断AMR在实验已涉及浓度。生理盐水在批内重复测定10次，结果均为0，本检测系统的LLD是0 mmol/L。结合LLD，本方法的AMR为0～14.38 mmol/L。

2.5 生物参考区间验证结果:20份表面健康人血清LDL－C检测结果浓度在0.21～2.36 mmol/L范围，均在设定的参考区间＜3.63 mmol/L范围之内。

3 讨论

LDL－C检测的参考方法是超速离心法，需要特殊的仪器，操作时间长，临床很难开展，应用Friedewald公式计算LDL－C的方法，常受TC、TG和HDL－C变异的影响［7］，所以临床LDL－C检测的常规方法为均相测定法。本检测系统试剂的检测原理是均相测定－表面活性剂清除法，试剂1中的表面活性剂1能改变LDL以外的脂蛋白(HDL、CM和VLDL等)结构并解离，所释放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应，产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色，此时LDL颗粒仍是完整的。加试剂2它可使LDL颗粒解离释放胆固醇，参与Trinder反应而显色，因其他脂蛋白的胆固醇分子已除去，色泽深浅与LDL－C量呈比例。临床实验室的管理部门和相关机构要求实验室要选择适当的方法对检测系统的分析性能进行评价，证实其能够达到所要求的性能标准，才可将分析系统用于常规工作。本文对日立7600全自动生化分析仪测定LDL－C的主要分析性能进行评价，包括不精密度、不准确度、分析测量范围、分析干扰试验、生物参考区间来了解该系统的性能。

一个检测系统最基本的性能指标是精密度，在本检测系统，两个质控品及患者混合血清的批内、天间变异都小于厂家声明的CV值。正确度的验证，有关文件建议可以通过与参考方法比对或检测定值参考物(包括由参考方法或决定性方法定值的样本，从能力比对试验获得的参考物，厂家提供的正确度参考物或质控物，室间质量评价样本、由第三方提供的已用一些不同方法定值的物质)来验证［8］。本实验使用卫生部临检中心发放的5个不同批号的质控品进行正确度验证，结果均小于卫生部临检中心规定的室间质评允许偏倚。不同浓度的游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白和乳糜物对检测结果的影响度均＜10%，可认为这些浓度的干扰物质不影响LDL－C的检测。本检测系统分析测量范围为0～14.38 mmol/L，略宽于厂商给出的线性范围(0.04～11.64 mmol/L)。20份健康人血清浓度均在设定的参考区间＞3.63 mmol/L范围内，可以认为现用参考区间适用于本实验室。

总之，本文参考试剂厂家、CLSI文件以及国内关于定量检测分析系统性能评价的相关报道，评价了循环酶法在全自动生化分析仪上检测LDL－C的性能，基本与厂家申明的性能一致，该检测系统能够用于临床，使用中要注意内源性干扰对检测结果的影响。

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［4］ 冯仁丰.临床检验质量管理技术基础第二版［M］.上海科学文献技术出版社，2008:111－138.

［5］ 张秀明，庄俊华，郑松柏，等.临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证与实验方法［J］.中华检验医学杂志，2007，30(11):1293.

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［7］ 鄢盛恺.高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定法及技术要求［J］.2004年全国血脂分析及其临床应用学术研讨会暨第七届全国脂蛋白学术会议论文汇编2004－08－18T12，银川.

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